用Dye去label带amine的大分子 - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

用Dye去label带amine的大分子

用Dye去label带amine的大分子# Biology - 生物学

i*n2012-05-08 07:05

1 楼

一直在版上潜水，受益颇多，我现在正在写一个grant，碰到怎么写potential problem
的问题，想请教一下各位前辈。
我计划在一个小鼠里敲出一个基因，然后研究这个基因对表型的影响。
那么潜在的问题就是如果没有影响怎么办？
我怎能justify这个可能阴性的结果对研究的影响？
谢谢大家！

s*u2012-05-08 07:05

2 楼

OPT的材料，朋友说，没有办法把我的名字加进邮箱里去，我才知道
现在也不想节外生枝的该地址。。。。不过真的好担心阿
根据大家的经验，这种文件能寄到没有我名字的邮箱吗？my friends' own names are
all attached to that mailbox...
ｂｔｗ，ｒｅｃｅｉｐｔ收到了的，不过ＥＡＤ是不是不一样的信封亚，那种ｒｅｔｕ
ｒｎ　ｓｅｒｖｉｃｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ的。。。万一寄不到就麻烦死了。。。。

z*c2012-05-08 07:05

3 楼

这个应该是孩子还小的同学们关心的问题。等我开会回来，说说这个：）
这个其实就象玩篮球一样，最后能成为职业的，去NBA打球一样，少之有少。

c*y2012-05-08 07:05

4 楼

请问那里可以找到一般的protocol?
反应是怎么进行的呢？Dye的什么基团和amine反应？

s*u2012-05-08 07:05

5 楼

Anyone knows? Please help me out~~ thanks!

z*c2012-05-08 07:05

6 楼

我和太太都不会乐器，很遗憾，但老大非常厉害，乐队指挥建议作为职业，被立马拒绝
。所以说，这个不遗传：）
我的同事，台湾人，自己玩了一辈子音乐，俩孩子都是全州最高级青少年乐队成员，但
还是没法以音乐当职业，只能作为爱好和修养了。
美国这方面的整体水平非常高，比如说高中，就有三个乐队，人山人海，要突出很不容
易。非常奇怪的是，玩电吉他，建乐队的，在高中才认为在音乐方面有Talent，其他
什么都白瞎：）
初中的乐队指挥就刚刚的，当然是专业的，会玩乐队里所有的乐器。
男孩选小号，Trumpet，女孩选长笛，Flute，我觉得是最好的选择。

v*m2012-05-08 07:05

7 楼

Thermo Fisher Scientific

【在 c***y 的大作中提到】

: 请问那里可以找到一般的protocol?
: 反应是怎么进行的呢？Dye的什么基团和amine反应？

s*u2012-05-08 07:05

8 楼

any help?????

c*d2012-05-08 07:05

9 楼

是的因为学习乐器是跟老师学习电吉他自建乐队都是自己摸索出来的所以后者却
是需要gift
一般会玩乐器多的是这方面有天赋的他们学习乐器很容易上手比一般人简单好比语
言有的人说的好友的人说的差有的人说好几门语言有的人母语都颠三倒四

我和太太都不会乐器，很遗憾，但老大非常厉害，乐队指挥建议作为职业，被立马拒绝
。所以说，这个不遗传：）
我的同事，台湾人，自己玩了一辈子音乐，俩孩子都是全州最高级青少年乐队成员，但
还是没法以音乐当职业，只能作为爱好和修养了。
美国这方面的整体水平非常高，比如说高中，就有三个乐队，人山人海，要突出很不容
易。非常奇怪的是，玩电吉他，建乐队的，在高中才认为在音乐方面有Talent，其他
什么都白瞎：）
初中的乐队指挥就刚刚的，当然是专业的，会玩乐队里所有的乐器。
男孩选小号，Trumpet，女孩选长笛，Flute，我觉得是最好的选择。

【在 z**c 的大作中提到】

: 我和太太都不会乐器，很遗憾，但老大非常厉害，乐队指挥建议作为职业，被立马拒绝
: 。所以说，这个不遗传：）
: 我的同事，台湾人，自己玩了一辈子音乐，俩孩子都是全州最高级青少年乐队成员，但
: 还是没法以音乐当职业，只能作为爱好和修养了。
: 美国这方面的整体水平非常高，比如说高中，就有三个乐队，人山人海，要突出很不容
: 易。非常奇怪的是，玩电吉他，建乐队的，在高中才认为在音乐方面有Talent，其他
: 什么都白瞎：）
: 初中的乐队指挥就刚刚的，当然是专业的，会玩乐队里所有的乐器。
: 男孩选小号，Trumpet，女孩选长笛，Flute，我觉得是最好的选择。

b*y2012-05-08 07:05

10 楼

NHS

s*u2012-05-08 07:05

11 楼

ji xu ding............

D*R2012-05-08 07:05

12 楼

看完最后一句笑抽抽了。。。。

【在 c**********d 的大作中提到】

: 是的因为学习乐器是跟老师学习电吉他自建乐队都是自己摸索出来的所以后者却
: 是需要gift
: 一般会玩乐器多的是这方面有天赋的他们学习乐器很容易上手比一般人简单好比语
: 言有的人说的好友的人说的差有的人说好几门语言有的人母语都颠三倒四
:
: 我和太太都不会乐器，很遗憾，但老大非常厉害，乐队指挥建议作为职业，被立马拒绝
: 。所以说，这个不遗传：）
: 我的同事，台湾人，自己玩了一辈子音乐，俩孩子都是全州最高级青少年乐队成员，但
: 还是没法以音乐当职业，只能作为爱好和修养了。
: 美国这方面的整体水平非常高，比如说高中，就有三个乐队，人山人海，要突出很不容

s*n2012-05-08 07:05

13 楼

This is how we make home-made Halo-Atto647N in our lab using amine/NHS ester
chemistry. It is probably not the most cost-efficient way, but we did get
huge amount of Halo-Atto647N. Hope this would help.
Reagents and Reaction Set Up:
Dissolve 5mg of Atto NHS ester in 400ul of Anhydrous N,N DMF. (Final
Concentration 10mM)
Add 120 ul of 100mM stock solution of Amino HaloTag Ligand. (Final
Concentration 20mM)
Add 3.1 ul of DIPEA (reagent grade) to the solution. (Final Concentration
30mM)
Bring final volumn of reaction to 600ul.
Ratio of Atto NHS ester : Amino HaloTag Ligand : DIPEA is 1:2:3.
Incubate reaction mixture in a glass tube covered in foil at 30C overnight
while tube is rotating.
Note: Atto NHS ester should be between 5-20 mM during reaction. Fewer
equivalents of amino reactant are required because reaction is performed in
organic solvent so NHS ester hydrolysis is less of a concern. Save roughly 2
-3ul of stock solutions of reactants for LCMS analysis after reaction.
Purification of Product:
Use a LCMS (quantities less than 10mg) or HPLC system (quantities greater
than 10mg) to purify the product from the mixture. Reverse phase
chromatography with a C18 column is recommended with an ethanol/methanol:
water gradient and the sample of reactants can be run on the LCMS to assess
the degree of the reaction.
Note: LCMS and HPLC both use the same type of column; the difference between
the two systems is that LCMS runs each sample through the mass spectrometer
to determine where the product is and collects at the appropriate time
while the HPLC uses UV which is a less sensitive method.
Note: NEB, Promega, and Atto company reaction conditions are summarized and
combined here but optimization for specific tag combination may require
adjustment of the conditions.

【在 c***y 的大作中提到】

: 请问那里可以找到一般的protocol?
: 反应是怎么进行的呢？Dye的什么基团和amine反应？

o*r2012-05-08 07:05

14 楼

don't worry. they'll put your mail in that box.

P*s2012-05-08 07:05

15 楼

你这个不用标点，让人读得很使劲儿。。。

【在 c**********d 的大作中提到】

C*e2012-05-08 07:05

16 楼

PIERCE有一整套可以跟primary amine反应label蛋白的
还可以看他们的protein crosslinking书
网上免费下

【在 c***y 的大作中提到】

: 请问那里可以找到一般的protocol?
: 反应是怎么进行的呢？Dye的什么基团和amine反应？

s*u2012-05-08 07:05

17 楼

How did you know that? Sorry...i just don't wanna take any risk...timing is
just sooo critical to me.... Thanks!

【在 o***r 的大作中提到】

: don't worry. they'll put your mail in that box.

P*s2012-05-08 07:05

18 楼

如果你家老大要是想拿音乐做职业的话，你啥反应呢？

【在 z**c 的大作中提到】

s*u2012-05-08 07:05

19 楼

ding ding ding..........................................

z*c2012-05-08 07:05

20 楼

还是别。还是劝退，因为气质不对。

【在 P***s 的大作中提到】

: 如果你家老大要是想拿音乐做职业的话，你啥反应呢？

s*u2012-05-08 07:05

21 楼

ding ding ding...........................................

r*y2012-05-08 07:05

22 楼

你家老大学的什么乐器啊？

【在 z**c 的大作中提到】

: 还是别。还是劝退，因为气质不对。

p*g2012-05-08 07:05

23 楼

Just ask friend to tell USPS guy to add your name to the address and write
your name on the mailbox too.
That works for normal mails at least, not sure about EAD.

z*c2012-05-08 07:05

24 楼

黑管为主。当年上小学的时候，想学的被选完了，没别的了。
黑管竞争太强了。经常是400多抢20个席位。学巴松，5个抢3个席位。

【在 r**y 的大作中提到】

: 你家老大学的什么乐器啊？

s*u2012-05-08 07:05

25 楼

Thanks for your reply!!!
Does that work? Is that time-consuming? I am afraid my friend won't do that
if that will waste time...5555

【在 p**********g 的大作中提到】

: Just ask friend to tell USPS guy to add your name to the address and write
: your name on the mailbox too.
: That works for normal mails at least, not sure about EAD.

s*u2012-05-08 07:05

26 楼

this one?