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求助两个问题,primary cell 如何保存,和病毒质粒转染
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求助两个问题,primary cell 如何保存,和病毒质粒转染# Biology - 生物学
c*i
1
小人了解840pro是绝对比840强的,但是主要因为刚有个840 500G的deal,看着挺心动
的,所以想了解一下840pro会比840强多少,是否840差到完全不能用。
我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋,所以想换个SSD。主要是科研工作使用,最复
杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
谢谢各位了!
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K*R
2
求助各位大侠两个问题,很着急,谢谢了!
1 我提取原代细胞后 加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜,在放入液氮,这样方
法对吗?应为样品及其宝贵
2 第二部有个逆转录载体质粒,我不想包装了,可以用普通lipofectamiane2000 等试
剂来转染吗?
效率一般是多少,
多谢大家了!
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J*n
3
MLC VS TLC
主要区别就是这个,TLC写入次数比MLC小一个数量级。
TLC = Triple-Level Cell,即3bit/cell,它的寿命短,速度慢,约500-1000次擦写
寿命。

开。

【在 c****i 的大作中提到】
: 小人了解840pro是绝对比840强的,但是主要因为刚有个840 500G的deal,看着挺心动
: 的,所以想了解一下840pro会比840强多少,是否840差到完全不能用。
: 我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋,所以想换个SSD。主要是科研工作使用,最复
: 杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
: 谢谢各位了!

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l*y
4
要缓慢降温,1度/分钟。买个冻细胞用的IPA 罐子,或者自己用泡沫塑料盒子做一个。

【在 K**R 的大作中提到】
: 求助各位大侠两个问题,很着急,谢谢了!
: 1 我提取原代细胞后 加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜,在放入液氮,这样方
: 法对吗?应为样品及其宝贵
: 2 第二部有个逆转录载体质粒,我不想包装了,可以用普通lipofectamiane2000 等试
: 剂来转染吗?
: 效率一般是多少,
: 多谢大家了!

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w*f
5
Reliability!

开。

【在 c****i 的大作中提到】
: 小人了解840pro是绝对比840强的,但是主要因为刚有个840 500G的deal,看着挺心动
: 的,所以想了解一下840pro会比840强多少,是否840差到完全不能用。
: 我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋,所以想换个SSD。主要是科研工作使用,最复
: 杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
: 谢谢各位了!

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C*4
6
怎么那么多实验室都没有细胞冻纯盒啊?很便宜的,一个几十美元,里面灌满异丙醇。
自制的不知道好用不。找个塑料盒子,里面内衬一层海绵,装满异丙醇,把冻存管放EP
试管架里,使试管架下部浸入异丙醇里,
那么珍贵的样品,不如买一个或者借一个冻存盒咯。细胞在冻存盒里面在-80度大于4
个小时,就可以转入液氮了。
最好用90%的血清+10%的DMSO冻细胞,这样对细胞的保护作用最好,复苏后几乎没有死
细胞。

【在 K**R 的大作中提到】
: 求助各位大侠两个问题,很着急,谢谢了!
: 1 我提取原代细胞后 加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜,在放入液氮,这样方
: 法对吗?应为样品及其宝贵
: 2 第二部有个逆转录载体质粒,我不想包装了,可以用普通lipofectamiane2000 等试
: 剂来转染吗?
: 效率一般是多少,
: 多谢大家了!

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c*i
7
了解了,谢谢两位的解答,看来便宜真没好货。。。我再观望一下吧。。。。
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w*r
8
primary cell难道不是要现用么?
冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...
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t*t
9
840和840Pro是有本质区别的。
840是TLC的闪存,一般USB用的,所以便宜。
840Pro是MLC的,SSD一般用的。

开。

【在 c****i 的大作中提到】
: 小人了解840pro是绝对比840强的,但是主要因为刚有个840 500G的deal,看着挺心动
: 的,所以想了解一下840pro会比840强多少,是否840差到完全不能用。
: 我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋,所以想换个SSD。主要是科研工作使用,最复
: 杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
: 谢谢各位了!

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C*4
10
可以冻存。
比如,李文辉乙肝受体的文章,树鼩原代肝细胞都是一次灌注出来,冻起来
慢慢用的。
每次都取原代,太麻烦了啊

【在 w********r 的大作中提到】
: primary cell难道不是要现用么?
: 冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...

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s*g
11
就是840,你玩命用也用不坏的。
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s*s
12
和我的做法一样,主要是懒,一种freezing medium全搞定。
这个其实还是取决于细胞,有的就算这么小心,化出来还是
大多数死掉,说不定直接-80还死的少点

EP
4

【在 C********4 的大作中提到】
: 怎么那么多实验室都没有细胞冻纯盒啊?很便宜的,一个几十美元,里面灌满异丙醇。
: 自制的不知道好用不。找个塑料盒子,里面内衬一层海绵,装满异丙醇,把冻存管放EP
: 试管架里,使试管架下部浸入异丙醇里,
: 那么珍贵的样品,不如买一个或者借一个冻存盒咯。细胞在冻存盒里面在-80度大于4
: 个小时,就可以转入液氮了。
: 最好用90%的血清+10%的DMSO冻细胞,这样对细胞的保护作用最好,复苏后几乎没有死
: 细胞。

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K*R
13
谢谢你,好像我们有那种小方盒子。感谢!

个。

【在 l***y 的大作中提到】
: 要缓慢降温,1度/分钟。买个冻细胞用的IPA 罐子,或者自己用泡沫塑料盒子做一个。
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K*R
14
谢谢!
不知道你说的那个盒子是不是一个塑料小方盒子? 您的方法很详细啊! 对了你说90%
血清是全部FBS,还是DMEM +FBS? 谢谢!
在 Cosimo2014 (柯希莫) 的大作中提到: 】
EP
4
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K*R
15
是这样的,一次用不完,还要根据实验结果调整呢, 你说的是个问题,但是没办法只
有尝试

【在 w********r 的大作中提到】
: primary cell难道不是要现用么?
: 冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...

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C*4
16
我喜欢用90%纯血清+10%DMSO
这样比掺杂了DMEM的对细胞的保护更好

【在 K**R 的大作中提到】
: 谢谢!
: 不知道你说的那个盒子是不是一个塑料小方盒子? 您的方法很详细啊! 对了你说90%
: 血清是全部FBS,还是DMEM +FBS? 谢谢!
: 在 Cosimo2014 (柯希莫) 的大作中提到: 】
: EP
: 4

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j*x
17
根据我个人的经验,人原代肝细胞一般还是不推荐冻存,质量会差很多,很多marker都
太不正常,用来做体外感染实验的话效率也会低很多。
不过最近有人向我推荐Karolinska Institute开发出来的一种新方法用于冻存人原代肝
细胞,我也准备近期试一下看看。
只是只是,发表的杂志太那个什么了。。。
http://www.wjgnet.com/1948-5182/full/v4/i5/176.htm
Improved cryopreservation of human hepatocytes using a new xeno free
cryoprotectant solution
另外一种可供参考的方法
http://www.springerprotocols.com/Pdf/doi/10.1007/978-1-59745-20
An Optimised Method for Cryopreservation of Human Hepatocytes

【在 C********4 的大作中提到】
: 可以冻存。
: 比如,李文辉乙肝受体的文章,树鼩原代肝细胞都是一次灌注出来,冻起来
: 慢慢用的。
: 每次都取原代,太麻烦了啊

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a*7
18
没有冻存盒可以试试:
4度20分钟
-20度30分钟
-80度过夜
第二天放到液氮里
90-95%FBS+10-5%DMSO
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