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求助：promoter transcription regulation

求助：promoter transcription regulation# Biology - 生物学

w*s2013-03-01 08:03

1 楼

一时没注意垃圾桶……
里面有鸡翅的骨头，被小黄叼了，注意到的时候，地上只剩竖的一半鸡骨，
不知道是不是已经吃下去了。
要做什么措施吗？怕划到它的食道。现在还无异状。

a*w2013-03-01 08:03

2 楼

屏幕一点反应也没有，想把里面的照片导出来但是必须要先解锁。可以通过外接键盘操
作吗？就是买个lighting to usb的转接头，然后接usb键盘

s*l2013-03-01 08:03

3 楼

哪位有这方面消息，帮忙通知一下啊
包子酬谢

D*g2013-03-01 08:03

4 楼

已经知道一个基因F的promoter有Transcription factor G的结合位点, 在Bandshift试
验中，这个结合位点只结合G这一个蛋白；ChIP也证明G可以结合到F的promoter;如果把
这个结合位点突变掉，基因F promoter的活性在Luciferase assay中几乎全部失去（
低于2%）；但是现在把G 用siRNA knockdown后，虽然G的mRNA下降了40%（还没有检测
蛋白质）但是基因F的mRNA只下降了20~30%，是因为siRNA knockdown的太少么？有没有
别的可能？有经验的XDJM能不能给指点一下？谢谢！

z*r2013-03-01 08:03

5 楼

newegg bf sale alive.
记得有希捷 3t

【在 s*****l 的大作中提到】

: 哪位有这方面消息，帮忙通知一下啊
: 包子酬谢

S*s2013-03-01 08:03

6 楼

1.TF G的knockdown效率太低，至少要80%以上吧
做2-3 rounds of knockdown或许可以提高 OR design new siRNA
2.Gene F的mRNA decrease 20%不认为是显著差异，QPCR有20%误差是很正常的。
3.redundancy也是要考虑的

【在 D****g 的大作中提到】

: 已经知道一个基因F的promoter有Transcription factor G的结合位点, 在Bandshift试
: 验中，这个结合位点只结合G这一个蛋白；ChIP也证明G可以结合到F的promoter;如果把
: 这个结合位点突变掉，基因F promoter的活性在Luciferase assay中几乎全部失去（
: 低于2%）；但是现在把G 用siRNA knockdown后，虽然G的mRNA下降了40%（还没有检测
: 蛋白质）但是基因F的mRNA只下降了20~30%，是因为siRNA knockdown的太少么？有没有
: 别的可能？有经验的XDJM能不能给指点一下？谢谢！

m*32013-03-01 08:03

7 楼

楼主找内置硬盘还是外置，这个外置的3T不知道是不是楼主要找的
http://www.amazon.com/exec/obidos/ASIN/B00834SJU8/amazon-highly

【在 s*****l 的大作中提到】

: 哪位有这方面消息，帮忙通知一下啊
: 包子酬谢

D*g2013-03-01 08:03

8 楼

谢谢回复。
1. 可能knockdown的效率是太低了。我做的细胞是一种增殖很快的细胞，如果每两天传
代一次，需要稀释20倍才行（0.5ml/10ml）。在不同的时间检测siRNA knockdown的效
果，发现在24小时是最好的；48小时后 mRNA 差异已经变小；72小时后已经几乎没有区
别。所以说，连着几次转染由于转染试剂毒性的问题也不太可能。可能需要试一试
shRNA，看效果是不是会好些。
2. 我也担心20%的差异可能太小了；但是唯一值得安慰的是，重复了4－5次，每次都是
降低20％以上，即使直接knockdown基因F自己，也只是比knockdown transcription
factor G略低而已。
3. Gene G has six homologies in mammalian cells, with two of them
specifically expressed in this cell lineage, expression of the other one is
very low (below the detection threshold of western blot); and the third
member of this family also expresses in a similar cell lineage, but I has
not checked its expression in this cell yet. I know I should check probably
all of them in this cell line. All of the member in this family share
similar binding cite, it is possible that other member regulates gene F too.
谢谢

【在 S*********s 的大作中提到】

: 1.TF G的knockdown效率太低，至少要80%以上吧
: 做2-3 rounds of knockdown或许可以提高 OR design new siRNA
: 2.Gene F的mRNA decrease 20%不认为是显著差异，QPCR有20%误差是很正常的。
: 3.redundancy也是要考虑的