Co-IP 如何cross-link?# Biology - 生物学
b*8
1 楼
我在烟草中做Co-IP， 用 A-HA 钓 B-GFP 。做了一次没有发现GFP信号。 我怀疑我的
蛋白的互做比较弱。请问cross-link如何做？
另外，如果把蛋白浓缩一下会不会效果好点？那个公司的浓缩柱会好点？
谢谢了！
蛋白的互做比较弱。请问cross-link如何做？
另外，如果把蛋白浓缩一下会不会效果好点？那个公司的浓缩柱会好点？
谢谢了！
j*n
2 楼
pierce direct IP kit
z*i
3 楼
cross-link之后得到的结果你相信吗？
m*u
4 楼
crosslink 是把抗体和beads cross link 吧， 保证IgG 不被洗脱下来。 你用的HA抗
体还是GFP抗体做的IP？ 我现在也在烟草里做 co-ip 可以站内联系 交流一下。
体还是GFP抗体做的IP？ 我现在也在烟草里做 co-ip 可以站内联系 交流一下。
s*a
5 楼
The cheapest method to crosslink interacting proteins for Co-IP is to use
Formaldehyde as crosslinker. You need to find the lowest concentration of
formaldehyde in an initial test. I have been using 0.1% formaldehyde in PBS
to crosslink proteins on freshly harbested cells, room temperature for a few
minutes, and quench with 1.25M Glycine. Then lyse cells, sonicate and IP as
usual. I found this paper very useful: Optimization of Formaldehyde Cross-
Linking for Protein
Interaction Analysis of Non-Tagged Integrin β1
Formaldehyde as crosslinker. You need to find the lowest concentration of
formaldehyde in an initial test. I have been using 0.1% formaldehyde in PBS
to crosslink proteins on freshly harbested cells, room temperature for a few
minutes, and quench with 1.25M Glycine. Then lyse cells, sonicate and IP as
usual. I found this paper very useful: Optimization of Formaldehyde Cross-
Linking for Protein
Interaction Analysis of Non-Tagged Integrin β1
s*a
6 楼
This kit is to crosslink the antibody to the beads. I think LZ wants to
crosslink interacting proteins.
【在 j******n 的大作中提到】
: pierce direct IP kit
crosslink interacting proteins.
【在 j******n 的大作中提到】
: pierce direct IP kit
b*8
7 楼
非常感谢大家的解答。
我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！
我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！
d*u
8 楼
我也打算用cross link做烟草里的co IP，你有没试出一些方法来了。。。
用DSP？
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢大家的解答。
: 我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
: 蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！
用DSP？
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢大家的解答。
: 我是想cross-link烟草叶片，然后做co_IP。 因为用普通的方法没做出来，我怀疑我的
: 蛋白的互做比较弱。大家有什么好的解决办法吗？谢谢！
b*8
9 楼
还没试出来呢。有什么好方法，我们可以相互交流一下。
什么事DSP?
什么事DSP?
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