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求助关于RACE的问题

求助关于RACE的问题# Biology - 生物学

y*g2013-06-10 07:06

1 楼

小弟目前在做关于lncRNA的研究，在做race鉴定一些lncRNA的全长。遇到了一些问题。
求助各位高手。
我用目前的方法做出了2条全长以后，接下来怎么做都做不出来了。
我RACE完的产物每一次都能跑出很亮的1-1.5KB的条带，切胶回收连接到T载体以后测序
。发现序列都是错的，序列两端有制作模板时候加的接头序列，但是中间的片段在基因
组里都找不到，或是一些错的片段。我自己检查了引物，酶，DNTP，水都没有污染，也
不知道为什么会这样，求高手指点.

k*l2013-06-10 07:06

2 楼

5' 还是 3'，这个不知道不好提供建议

【在 y******g 的大作中提到】

: 小弟目前在做关于lncRNA的研究，在做race鉴定一些lncRNA的全长。遇到了一些问题。
: 求助各位高手。
: 我用目前的方法做出了2条全长以后，接下来怎么做都做不出来了。
: 我RACE完的产物每一次都能跑出很亮的1-1.5KB的条带，切胶回收连接到T载体以后测序
: 。发现序列都是错的，序列两端有制作模板时候加的接头序列，但是中间的片段在基因
: 组里都找不到，或是一些错的片段。我自己检查了引物，酶，DNTP，水都没有污染，也
: 不知道为什么会这样，求高手指点.

y*g2013-06-10 07:06

3 楼

5' 和 3‘都是同样的情况，泡胶都很亮的单一条带，但是测序是错的。

【在 k****l 的大作中提到】

: 5' 还是 3'，这个不知道不好提供建议

y*g2013-06-10 07:06

4 楼

我最近几天重复了几次曾经做出来的东西，加入上下游的引物的可以P出单一的亮条带
。但是对照组我只加了接头引物也P出了亮的单一条带，位置都差不多。只加入基因特
异性引物不能够扩增出条带
求高人解答。谢谢！

s*32013-06-10 07:06

5 楼

If you wish, you can send me the image of your RACE results with more
detailed description. I happened to identified a lncRNA using 5'- and 3'-
RACE, Northern, and long range RT-PCR.
s*****[email protected]