d*9
2 楼
想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
细的protocol？
是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
PCR？无比感谢
细的protocol？
是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
PCR？无比感谢
f*t
3 楼
我推荐过。居然有一个傻叉说我是托。
我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
H*i
4 楼
没啥特殊的，第一次产物纯化(如果有杂带割胶)后做模板，加两端引物，其他都一样。
h*j
5 楼
没有跟蒋姐的床戏 差评！
【在 f******t 的大作中提到】
: 我推荐过。居然有一个傻叉说我是托。
: 我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
【在 f******t 的大作中提到】
: 我推荐过。居然有一个傻叉说我是托。
: 我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
d*h
6 楼
没什么特殊protocol
第一步PCR后跑胶确定产物的质和量
质量好的话，可以不用纯化片段，DpnI digestion后直接作为模板
两个片段大慨1：1加入
多加些第一步PCR产物, 减少循环数（<20)
【在 d**********9 的大作中提到】
: 想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
: 细的protocol？
: 是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
: PCR？无比感谢
第一步PCR后跑胶确定产物的质和量
质量好的话，可以不用纯化片段，DpnI digestion后直接作为模板
两个片段大慨1：1加入
多加些第一步PCR产物, 减少循环数（<20)
【在 d**********9 的大作中提到】
: 想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
: 细的protocol？
: 是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
: PCR？无比感谢
g*t
7 楼
傻叉八成是仙侠剧和baby，冰冰们的粉丝吧？
【在 f******t 的大作中提到】
: 我推荐过。居然有一个傻叉说我是托。
: 我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
【在 f******t 的大作中提到】
: 我推荐过。居然有一个傻叉说我是托。
: 我还准备码一个正式点的推荐，看心情。
S*s
8 楼
PCR-Mediated Recombination
-A General Method Applied to Construct Chimeric Molecular Clones
Guowei Fang, Barbara Weiser, Aloise Visosky, Timothy Moran,
and Harold Burger
https://www.dropbox.com/s/ret55m8y599bg6c/PCR-Mediated%20Recombination.pdf
【在 d**********9 的大作中提到】
: 想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
: 细的protocol？
: 是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
: PCR？无比感谢
-A General Method Applied to Construct Chimeric Molecular Clones
Guowei Fang, Barbara Weiser, Aloise Visosky, Timothy Moran,
and Harold Burger
https://www.dropbox.com/s/ret55m8y599bg6c/PCR-Mediated%20Recombination.pdf
【在 d**********9 的大作中提到】
: 想将两段不相连的片段通过overlap PCR连接在一起，但是以前没有做过，谁有比较详
: 细的protocol？
: 是在普通的PCR之后，再将两段PCR产物extension，然后再用两端的PCR引物作普通的
: PCR？无比感谢
g*t
9 楼
越来越好看了！！！
d*9
10 楼
那在一个PCR后，都不要将两个PCR产物放在一起作一次延伸？
f*t
11 楼
还是跟班长姐好点。
【在 h**j 的大作中提到】
: 没有跟蒋姐的床戏 差评！
【在 h**j 的大作中提到】
: 没有跟蒋姐的床戏 差评！
M*g
12 楼
you can try Gibson assembly from NEB to assemble two fragments.
f*t
13 楼
看第二季了？我也觉得第二季更好。
【在 g****t 的大作中提到】
: 越来越好看了！！！
【在 g****t 的大作中提到】
: 越来越好看了！！！
a*u
14 楼
画虎不成反类犬，反倒不美。蒋姐好象哥的初恋~
【在 h**j 的大作中提到】
: 没有跟蒋姐的床戏 差评！
【在 h**j 的大作中提到】
: 没有跟蒋姐的床戏 差评！
a*u
15 楼
能力强，脾气大，最好不要招惹。不过眉眼确实吸引人
【在 f******t 的大作中提到】
: 还是跟班长姐好点。
【在 f******t 的大作中提到】
: 还是跟班长姐好点。
g*t
16 楼
你初恋她妈也像蒋姐她妈那样欠抽吗？
【在 a**********u 的大作中提到】
: 画虎不成反类犬，反倒不美。蒋姐好象哥的初恋~
【在 a**********u 的大作中提到】
: 画虎不成反类犬，反倒不美。蒋姐好象哥的初恋~
d*0
17 楼
：看第二季了？我也觉得第二季更好。
：
我觉得第一季假钞案卧底那段最好看。后面金手指开得太厉害了.
g*t
18 楼
被第一季几个案子吊足了胃口，第二季这个大案看得真TM过瘾
：看第二季了？我也觉得第二季更好。
：
：看第二季了？我也觉得第二季更好。
：
f*s
19 楼
剧里的案件比书差远了，书里才真的是大案，所有商人都涉黑，官场也有内应，书里梁
舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
推荐常书欣的《超级大忽悠》，里面的男主角更逗比，比简凡厉害也比简凡有趣，里面
好几个案件，每个案件都特牛，比如传销，假钞。第一次知道传销厉害到这种程度就是
在这个小说里，最近新闻里好几个被传销逼死的，发现小说真的很写实。
【在 g****t 的大作中提到】
: 被第一季几个案子吊足了胃口，第二季这个大案看得真TM过瘾
:
: ：看第二季了？我也觉得第二季更好。
: ：
舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
推荐常书欣的《超级大忽悠》，里面的男主角更逗比，比简凡厉害也比简凡有趣，里面
好几个案件，每个案件都特牛，比如传销，假钞。第一次知道传销厉害到这种程度就是
在这个小说里，最近新闻里好几个被传销逼死的，发现小说真的很写实。
【在 g****t 的大作中提到】
: 被第一季几个案子吊足了胃口，第二季这个大案看得真TM过瘾
:
: ：看第二季了？我也觉得第二季更好。
: ：
g*t
20 楼
原来书里这么负能量？难怪我觉得电视剧有几个漏洞没补，十七年前那四个犯人马上都
减刑了，梁局向（吕？）局汇报失枪被找到后，马上就泄密了，明显高层涉案。还有李
威为什么派人进看守所捎信逼薛自杀？
《超级大忽悠》有电视剧吗？懒得看书
：剧里的案件比书差远了，书里才真的是大案，所有商人都涉黑，官场也有内应，书里
梁舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
：
减刑了，梁局向（吕？）局汇报失枪被找到后，马上就泄密了，明显高层涉案。还有李
威为什么派人进看守所捎信逼薛自杀？
《超级大忽悠》有电视剧吗？懒得看书
：剧里的案件比书差远了，书里才真的是大案，所有商人都涉黑，官场也有内应，书里
梁舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
：
f*s
21 楼
不算负能量吧，最后也是好人胜利，但是比较接近生活中的事实。
确实最后好几个漏洞没补上，比如经侦查银行账号，发现有重大疑点，走私文物根本是
小case，后面还有更大的问题，结果突然就结尾了。再比如公安内部一再的泄密后来也
没交代。李威打电话捎信也是没编圆。
超级大忽悠应该没拍吧，拍的话应该特别有意思，里面的案件描述简直感觉身历其境
【在 g****t 的大作中提到】
: 原来书里这么负能量？难怪我觉得电视剧有几个漏洞没补，十七年前那四个犯人马上都
: 减刑了，梁局向（吕？）局汇报失枪被找到后，马上就泄密了，明显高层涉案。还有李
: 威为什么派人进看守所捎信逼薛自杀？
: 《超级大忽悠》有电视剧吗？懒得看书
:
: ：剧里的案件比书差远了，书里才真的是大案，所有商人都涉黑，官场也有内应，书里
: 梁舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
: ：
确实最后好几个漏洞没补上，比如经侦查银行账号，发现有重大疑点，走私文物根本是
小case，后面还有更大的问题，结果突然就结尾了。再比如公安内部一再的泄密后来也
没交代。李威打电话捎信也是没编圆。
超级大忽悠应该没拍吧，拍的话应该特别有意思，里面的案件描述简直感觉身历其境
【在 g****t 的大作中提到】
: 原来书里这么负能量？难怪我觉得电视剧有几个漏洞没补，十七年前那四个犯人马上都
: 减刑了，梁局向（吕？）局汇报失枪被找到后，马上就泄密了，明显高层涉案。还有李
: 威为什么派人进看守所捎信逼薛自杀？
: 《超级大忽悠》有电视剧吗？懒得看书
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: ：剧里的案件比书差远了，书里才真的是大案，所有商人都涉黑，官场也有内应，书里
: 梁舞云的爹是比局长大的官，也涉黑。
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