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关于质粒去磷处理,问个比较弱的问题
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关于质粒去磷处理,问个比较弱的问题# Biology - 生物学
i*y
1
地图不能用了。有其他人这样吗?
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w*a
2
一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。
那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation
插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理??
谢谢!
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z*e
3
我的很好。
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a*o
4
没这么干过,不过是个很有意思的问题。如果你的引物没有磷酸化标记,pcr产物末端
应该也不会有5'-P, 应该不会自联。建议lz试试看,把结果通知大家一下
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b*n
5
你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
否则一般的Ligase没法连上

ligation

【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation
: 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理??
: 谢谢!

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w*a
6
OK. 那也就是说不用担心自链的问题了??、、

【在 b******n 的大作中提到】
: 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
: 否则一般的Ligase没法连上
:
: ligation

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s*s
7
一般vector都不用去磷,因为严重影响连接效率。
我宁愿多screen几个colony

ligation

【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation
: 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理??
: 谢谢!

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d*l
8
no

ligation

【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation
: 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理??
: 谢谢!

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