w*r
2 楼
去年10月份在Express clothing store买了件衣服，记得当时是自己把信用卡交给店员
去刷，当时似乎店员提到它家credit card啥的，记得当时完全没兴趣，期间也没有任
何的确认过程。
今年1月份开始收到world financial network national bank的电话骚扰，说我办了它
家的卡但是欠钱了，当时完全不记得有申请过这回事于是要求对方给我寄bill，我再付
款，但对方态度恶劣完全不理会，只要求我在电话里报卡号给她付钱。挂了电话搜索这
个号码发现很多负面评论，所以一直没有在意。
前几天看credit report发现狂降了100多分，主要原因就是这家，前几天已经打
Express把钱付了，从原来的80多变成加罚金300多。
现在想请教大家的是，我首先基本在没有意识的情况下有了这个账户，但是自己从来没
有收到它家的卡和bill,我电话里给了对方地址让对方寄bill对方拒绝，我现在想把这
个记录消掉应该咋办？我这种情况如果去dispute的话有可能吗？有个情况是我看我的
credit report里三家显示对于我那个Express账户的账号均完全不相同，差别非常离谱
，不知道这个能作为一个proof吗？
现在正在找工作，怕因为这个影响background check，请大家帮助，跪谢！！
去刷，当时似乎店员提到它家credit card啥的，记得当时完全没兴趣，期间也没有任
何的确认过程。
今年1月份开始收到world financial network national bank的电话骚扰，说我办了它
家的卡但是欠钱了，当时完全不记得有申请过这回事于是要求对方给我寄bill，我再付
款，但对方态度恶劣完全不理会，只要求我在电话里报卡号给她付钱。挂了电话搜索这
个号码发现很多负面评论，所以一直没有在意。
前几天看credit report发现狂降了100多分，主要原因就是这家，前几天已经打
Express把钱付了，从原来的80多变成加罚金300多。
现在想请教大家的是，我首先基本在没有意识的情况下有了这个账户，但是自己从来没
有收到它家的卡和bill,我电话里给了对方地址让对方寄bill对方拒绝，我现在想把这
个记录消掉应该咋办？我这种情况如果去dispute的话有可能吗？有个情况是我看我的
credit report里三家显示对于我那个Express账户的账号均完全不相同，差别非常离谱
，不知道这个能作为一个proof吗？
现在正在找工作，怕因为这个影响background check，请大家帮助，跪谢！！
w*g
3 楼
劳动节要飞出去玩四天，我家小咪不方便随身带，考虑放在家里存够粮食和水，但我实
在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
多谢！^_^
在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
多谢！^_^
a*2
4 楼
转行新人，跑来向牛人们请教一下~
我最近要做一个semi-quantitative western blot
Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
用GAPDH来normalization
于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
1）strip之后在同一张上stain；
2) 跑两张同样的膜分别stain；
如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
另外，综合而言，为了确保最终结果的有效性，除了对loading sample做个gradient之
外，还有什么其它建议吗？
完全转行新人，问题很弱，还请大家不要鄙视俺。。。
拜谢！
我最近要做一个semi-quantitative western blot
Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
用GAPDH来normalization
于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
1）strip之后在同一张上stain；
2) 跑两张同样的膜分别stain；
如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
另外，综合而言，为了确保最终结果的有效性，除了对loading sample做个gradient之
外，还有什么其它建议吗？
完全转行新人，问题很弱，还请大家不要鄙视俺。。。
拜谢！
r*e
5 楼
Zan
s*l
6 楼
你没有告诉人家SSN吗？
b*a
7 楼
这种情况找朋友帮忙过来照顾一下比较好吧。不行的话找cat sitter也要。只有4天，送
出去board太折腾了。
的。
【在 w*****g 的大作中提到】
: 劳动节要飞出去玩四天，我家小咪不方便随身带，考虑放在家里存够粮食和水，但我实
: 在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
: 多谢！^_^
出去board太折腾了。
的。
【在 w*****g 的大作中提到】
: 劳动节要飞出去玩四天，我家小咪不方便随身带，考虑放在家里存够粮食和水，但我实
: 在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
: 多谢！^_^
h*o
8 楼
你的蛋白的分子量如果和gapdh 差距比较大 （当然前提是抗体也不能太垃圾）
strip比较好
用mild一点的strip， 然后重新block， 做gapdh
strip比较好
用mild一点的strip， 然后重新block， 做gapdh
m*f
9 楼
有包子嘛？
w*r
10 楼
【在 s******l 的大作中提到】
: 你没有告诉人家SSN吗？
x*u
11 楼
对猫来说4天还是在家里比较好。找人每天来看看
g*5
12 楼
2 is no good because no a same experiment.
【在 a**********2 的大作中提到】
: 转行新人，跑来向牛人们请教一下~
: 我最近要做一个semi-quantitative western blot
: Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
: 用GAPDH来normalization
: 于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
: 在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
: 1）strip之后在同一张上stain；
: 2) 跑两张同样的膜分别stain；
: 如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
: 如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
【在 a**********2 的大作中提到】
: 转行新人，跑来向牛人们请教一下~
: 我最近要做一个semi-quantitative western blot
: Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
: 用GAPDH来normalization
: 于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
: 在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
: 1）strip之后在同一张上stain；
: 2) 跑两张同样的膜分别stain；
: 如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
: 如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
g*A
13 楼
有包子
w*r
14 楼
说实话真没有啥印象了，因为自己当时就给了信用卡想付款没想管再申它家信用卡啥的
，脑海里就是很普通的一笔消费，以为是刷在自己给的citi的卡上了，所以一直没管，
前几天去看citi卡那天的记录确实把我的欠的钱转到那个Express账户上了。当时购买
时间也很短，没有确认过程，完全不像去Macy's 办卡，对方让你报地址，SSN啥的，最
后还让你在机子上确认。
【在 s******l 的大作中提到】
: 你没有告诉人家SSN吗？
，脑海里就是很普通的一笔消费，以为是刷在自己给的citi的卡上了，所以一直没管，
前几天去看citi卡那天的记录确实把我的欠的钱转到那个Express账户上了。当时购买
时间也很短，没有确认过程，完全不像去Macy's 办卡，对方让你报地址，SSN啥的，最
后还让你在机子上确认。
【在 s******l 的大作中提到】
: 你没有告诉人家SSN吗？
A*R
15 楼
I am using this one to find licensed and bonded petsitter. Got it from
someone here.
www.petsit.com
someone here.
www.petsit.com
e*s
16 楼
如果Size差别挺大的话，最好就是一个膜，减开，分别加一抗。
【在 a**********2 的大作中提到】
: 转行新人，跑来向牛人们请教一下~
: 我最近要做一个semi-quantitative western blot
: Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
: 用GAPDH来normalization
: 于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
: 在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
: 1）strip之后在同一张上stain；
: 2) 跑两张同样的膜分别stain；
: 如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
: 如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
【在 a**********2 的大作中提到】
: 转行新人，跑来向牛人们请教一下~
: 我最近要做一个semi-quantitative western blot
: Nitrocellulose membrane, chemiluminescent staining
: 用GAPDH来normalization
: 于是，会有两种不同的antibody，一种测我的target，另一种stain GAPDH.
: 在网上查了一晚上，还是搞不清哪种方式更好:
: 1）strip之后在同一张上stain；
: 2) 跑两张同样的膜分别stain；
: 如果1)效果好些，有什么strip buffer推荐吗？
: 如果2)好些，有什么需要特别注意事项？比如转膜时如何保证效率基本一致？
s*n
17 楼
真好看！
【在 m*f 的大作中提到】
: 不知为啥，边缘不太整齐。。。
【在 m*f 的大作中提到】
: 不知为啥，边缘不太整齐。。。
x*3
18 楼
呵呵我跟你一样，被dilard家挣了一笔，现在也是信用记录给破坏掉了， 你想出办法
告诉我一下啊 。。。
告诉我一下啊 。。。
w*s
19 楼
搞好多余的食水（多搞点，防止万一没赶上飞机，而再万一飞机第2天没有航班），
固定好门，关窗，开好空调，放家里。电源不放心的话，可以去买给小孩设计的
电源安全扣。4天的话，就算你找不到人中途来看，也比送猫旅馆好。
一开始我也是不放心，送猫旅馆了。
我家的2只猫送过猫旅馆1星期，关小笼子里，太惨了，还是2只关一起呢，
住了以后大量掉毛，皮毛都变差了非常多，体重大量减轻，回家来乱撒尿乱便便
（几天后重新学会用猫便盆），
胆小怕人，神经紧张，还学了一些哈人的坏习惯，而且还感染上跳蚤了。
性格大变，过了很久，不停地安抚，才恢复过来，但都没原来那么乖巧了。
我估计他们喂的也不会是什么好猫粮。
我去里面看过，就是都关小笼子里，猫粮放进笼子里喂，便便也在笼子里，到时候
那些人定时收拾下。有些粮食是直接撒在笼子里喂的。
但是周末他们不上班的话，也没人看猫的，也就放了粮食，让猫们自己过。
听说节假日寄养的人太多，笼子不够的话，还会猫狗放同一间房，狗叫猫叫的，
小猫被吓得。
而且还贵，我当初不放心，问了很多人，都说这家历史久远，很好，当然也贵，几百刀刷地
就出去了。那些钱还不如给它们买罐头吃呢。
第2次，第
固定好门，关窗，开好空调，放家里。电源不放心的话，可以去买给小孩设计的
电源安全扣。4天的话，就算你找不到人中途来看，也比送猫旅馆好。
一开始我也是不放心，送猫旅馆了。
我家的2只猫送过猫旅馆1星期，关小笼子里，太惨了，还是2只关一起呢，
住了以后大量掉毛，皮毛都变差了非常多，体重大量减轻，回家来乱撒尿乱便便
（几天后重新学会用猫便盆），
胆小怕人，神经紧张，还学了一些哈人的坏习惯，而且还感染上跳蚤了。
性格大变，过了很久，不停地安抚，才恢复过来，但都没原来那么乖巧了。
我估计他们喂的也不会是什么好猫粮。
我去里面看过，就是都关小笼子里，猫粮放进笼子里喂，便便也在笼子里，到时候
那些人定时收拾下。有些粮食是直接撒在笼子里喂的。
但是周末他们不上班的话，也没人看猫的，也就放了粮食，让猫们自己过。
听说节假日寄养的人太多，笼子不够的话，还会猫狗放同一间房，狗叫猫叫的，
小猫被吓得。
而且还贵，我当初不放心，问了很多人，都说这家历史久远，很好，当然也贵，几百刀刷地
就出去了。那些钱还不如给它们买罐头吃呢。
第2次，第
n*w
20 楼
如果不是同一个species的，都可以直接在同一张膜上弄，没有必要strip，也没有必要
跑两张膜。
跑两张膜。
A*1
21 楼
怎么弄的？使用牙签划得吗？
x*3
22 楼
呵呵我跟你一样，被dilard家挣了一笔，现在也是信用记录给破坏掉了， 你想出办法
告诉我一下啊 。。。
告诉我一下啊 。。。
w*g
23 楼
怕到时候朋友都出去玩了，我也不想折腾她 。。。
，送
【在 b******a 的大作中提到】
: 这种情况找朋友帮忙过来照顾一下比较好吧。不行的话找cat sitter也要。只有4天，送
: 出去board太折腾了。
:
: 的。
，送
【在 b******a 的大作中提到】
: 这种情况找朋友帮忙过来照顾一下比较好吧。不行的话找cat sitter也要。只有4天，送
: 出去board太折腾了。
:
: 的。
a*2
24 楼
谢谢大家的回复！
-- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
-- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
strip kit推荐？
-- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
，不会有cross-talk吗？
-- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
-- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
strip kit推荐？
-- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
，不会有cross-talk吗？
m*f
25 楼
no, just pour milk in stages to obtain the pattern.
【在 A*******1 的大作中提到】
: 怎么弄的？使用牙签划得吗？
【在 A*******1 的大作中提到】
: 怎么弄的？使用牙签划得吗？
x*3
26 楼
我被将了80多分，而且我那个更惨，3年以前的事情了，现在都不知道找谁说去，WK !!
!
!
w*g
27 楼
是么。。。。希望到时候劳动节能没出去玩的朋友
【在 x********u 的大作中提到】
: 对猫来说4天还是在家里比较好。找人每天来看看
【在 x********u 的大作中提到】
: 对猫来说4天还是在家里比较好。找人每天来看看
s*s
28 楼
你的蛋白表达量高的话，cross-talk问题不大
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
d*t
29 楼
赞！
y*n
30 楼
不告诉人家ssn怎么会被申卡？
w*g
31 楼
谢啦！我瞅瞅去~
【在 A*********R 的大作中提到】
: I am using this one to find licensed and bonded petsitter. Got it from
: someone here.
: www.petsit.com
【在 A*********R 的大作中提到】
: I am using this one to find licensed and bonded petsitter. Got it from
: someone here.
: www.petsit.com
a*2
32 楼
谢谢大家的回复！
-- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
-- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
strip kit推荐？
-- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
，不会有cross-talk吗？
-- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
-- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
strip kit推荐？
-- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
，不会有cross-talk吗？
w*r
33 楼
我现在想有可能当时他随便问了我下我的SSN，我不知道要干什么用但是就告诉他了。
实在没什么印象，觉得没有跟他说过我的地址啥的。。一直没有收到过卡跟bill。。请
问现在怎么办呢？
【在 y****n 的大作中提到】
: 不告诉人家ssn怎么会被申卡？
实在没什么印象，觉得没有跟他说过我的地址啥的。。一直没有收到过卡跟bill。。请
问现在怎么办呢？
【在 y****n 的大作中提到】
: 不告诉人家ssn怎么会被申卡？
w*g
34 楼
十分感谢超详细指导！
学习了！
【在 w***s 的大作中提到】
: 搞好多余的食水（多搞点，防止万一没赶上飞机，而再万一飞机第2天没有航班），
: 固定好门，关窗，开好空调，放家里。电源不放心的话，可以去买给小孩设计的
: 电源安全扣。4天的话，就算你找不到人中途来看，也比送猫旅馆好。
: 一开始我也是不放心，送猫旅馆了。
: 我家的2只猫送过猫旅馆1星期，关小笼子里，太惨了，还是2只关一起呢，
: 住了以后大量掉毛，皮毛都变差了非常多，体重大量减轻，回家来乱撒尿乱便便
: （几天后重新学会用猫便盆），
: 胆小怕人，神经紧张，还学了一些哈人的坏习惯，而且还感染上跳蚤了。
: 性格大变，过了很久，不停地安抚，才恢复过来，但都没原来那么乖巧了。
: 我估计他们喂的也不会是什么好猫粮。
学习了！
【在 w***s 的大作中提到】
: 搞好多余的食水（多搞点，防止万一没赶上飞机，而再万一飞机第2天没有航班），
: 固定好门，关窗，开好空调，放家里。电源不放心的话，可以去买给小孩设计的
: 电源安全扣。4天的话，就算你找不到人中途来看，也比送猫旅馆好。
: 一开始我也是不放心，送猫旅馆了。
: 我家的2只猫送过猫旅馆1星期，关小笼子里，太惨了，还是2只关一起呢，
: 住了以后大量掉毛，皮毛都变差了非常多，体重大量减轻，回家来乱撒尿乱便便
: （几天后重新学会用猫便盆），
: 胆小怕人，神经紧张，还学了一些哈人的坏习惯，而且还感染上跳蚤了。
: 性格大变，过了很久，不停地安抚，才恢复过来，但都没原来那么乖巧了。
: 我估计他们喂的也不会是什么好猫粮。
a*2
35 楼
多谢各位！
明后天跑胶，大后天再上来汇报心得〜:)
明后天跑胶，大后天再上来汇报心得〜:)
a*d
36 楼
他随便问你SSN，你就告诉他了？
【在 w******r 的大作中提到】
: 我现在想有可能当时他随便问了我下我的SSN，我不知道要干什么用但是就告诉他了。
: 实在没什么印象，觉得没有跟他说过我的地址啥的。。一直没有收到过卡跟bill。。请
: 问现在怎么办呢？
【在 w******r 的大作中提到】
: 我现在想有可能当时他随便问了我下我的SSN，我不知道要干什么用但是就告诉他了。
: 实在没什么印象，觉得没有跟他说过我的地址啥的。。一直没有收到过卡跟bill。。请
: 问现在怎么办呢？
j*n
37 楼
我用了yelp.com, 然后到各个petsitter网页上看看
l*u
38 楼
用荧光二抗，同时染，不用担心交叉反应，也不用担心蛋白被洗掉，而且定量也更准一些
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
g*q
39 楼
刷一张其他的卡你的信息他们几乎就全有了.有一次申请store card我就是不想让小二
知道我的SSN，好像只给了后4位,也申请到了.
【在 y****n 的大作中提到】
: 不告诉人家ssn怎么会被申卡？
知道我的SSN，好像只给了后4位,也申请到了.
【在 y****n 的大作中提到】
: 不告诉人家ssn怎么会被申卡？
w*s
40 楼
我以前发过一个把猫放家里的帖子，可参考：
http://www.mitbbs.com/article0/pets/31773295_0.html
的。
【在 w*****g 的大作中提到】
: 劳动节要飞出去玩四天，我家小咪不方便随身带，考虑放在家里存够粮食和水，但我实
: 在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
: 多谢！^_^
http://www.mitbbs.com/article0/pets/31773295_0.html
的。
【在 w*****g 的大作中提到】
: 劳动节要飞出去玩四天，我家小咪不方便随身带，考虑放在家里存够粮食和水，但我实
: 在不放心她一个人，或者送去pet hotel，不知道有没有什么推荐呢？希望不要太贵的。
: 多谢！^_^
y*i
41 楼
thermo的restore buffer
担心去不干净的话，可以strip完了拿去曝光一次，确定了原来的band不在了再上下一
个antibody
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
担心去不干净的话，可以strip完了拿去曝光一次，确定了原来的band不在了再上下一
个antibody
antibody
【在 a**********2 的大作中提到】
: 谢谢大家的回复！
: -- 很可惜，protein size差别很小，应该是剪不开的。。。
: -- strip的话，有个overexpress的condition，担心可能去不干净；不知有没有什么
: strip kit推荐？
: -- species倒是不同的，一个anti-mouse, 一个anti-rabbit。同时stain两种antibody
: ，不会有cross-talk吗？
w*r
42 楼
我去。。我就是觉得是不是当时把我的citi的卡刷了下然后就可以知道大部分信息可以
给我弄卡了。。
【在 g*q 的大作中提到】
: 刷一张其他的卡你的信息他们几乎就全有了.有一次申请store card我就是不想让小二
: 知道我的SSN，好像只给了后4位,也申请到了.
给我弄卡了。。
【在 g*q 的大作中提到】
: 刷一张其他的卡你的信息他们几乎就全有了.有一次申请store card我就是不想让小二
: 知道我的SSN，好像只给了后4位,也申请到了.
l*n
43 楼
对于不吃干粮只吃罐头的猫呢？头疼Ing。。。每天还至少要喂两次
C*S
44 楼
之前试过几种stripping buffer，没发现好用的。现在我都是先染一个弱的蛋白，比如
曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
w*r
45 楼
已经记不得了，印象中没有跟小二废话几句，就把我的信用卡拿给他了，怀疑是像下一
楼所说的情况。。
【在 a*******d 的大作中提到】
: 他随便问你SSN，你就告诉他了？
楼所说的情况。。
【在 a*******d 的大作中提到】
: 他随便问你SSN，你就告诉他了？
q*g
46 楼
我也是这样。如果两个蛋白分子量差不多，就换个loading control. GAPDH 37Kd,
TUBULIN50Kd, 差别还是够大。
如果做phosphorylated protein, 我还是建议strip。
【在 C**S 的大作中提到】
: 之前试过几种stripping buffer，没发现好用的。现在我都是先染一个弱的蛋白，比如
: 曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
TUBULIN50Kd, 差别还是够大。
如果做phosphorylated protein, 我还是建议strip。
【在 C**S 的大作中提到】
: 之前试过几种stripping buffer，没发现好用的。现在我都是先染一个弱的蛋白，比如
: 曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
k*2
47 楼
谢谢分享。吃一堑，长一智吧。
下次碰到问申不申卡的，一定要仔细看清楚receipt，看里面的付款方式以及
卡号的后四位是不是自己的信用卡。
【在 w******r 的大作中提到】
: 去年10月份在Express clothing store买了件衣服，记得当时是自己把信用卡交给店员
: 去刷，当时似乎店员提到它家credit card啥的，记得当时完全没兴趣，期间也没有任
: 何的确认过程。
: 今年1月份开始收到world financial network national bank的电话骚扰，说我办了它
: 家的卡但是欠钱了，当时完全不记得有申请过这回事于是要求对方给我寄bill，我再付
: 款，但对方态度恶劣完全不理会，只要求我在电话里报卡号给她付钱。挂了电话搜索这
: 个号码发现很多负面评论，所以一直没有在意。
: 前几天看credit report发现狂降了100多分，主要原因就是这家，前几天已经打
: Express把钱付了，从原来的80多变成加罚金300多。
: 现在想请教大家的是，我首先基本在没有意识的情况下有了这个账户，但是自己从来没
下次碰到问申不申卡的，一定要仔细看清楚receipt，看里面的付款方式以及
卡号的后四位是不是自己的信用卡。
【在 w******r 的大作中提到】
: 去年10月份在Express clothing store买了件衣服，记得当时是自己把信用卡交给店员
: 去刷，当时似乎店员提到它家credit card啥的，记得当时完全没兴趣，期间也没有任
: 何的确认过程。
: 今年1月份开始收到world financial network national bank的电话骚扰，说我办了它
: 家的卡但是欠钱了，当时完全不记得有申请过这回事于是要求对方给我寄bill，我再付
: 款，但对方态度恶劣完全不理会，只要求我在电话里报卡号给她付钱。挂了电话搜索这
: 个号码发现很多负面评论，所以一直没有在意。
: 前几天看credit report发现狂降了100多分，主要原因就是这家，前几天已经打
: Express把钱付了，从原来的80多变成加罚金300多。
: 现在想请教大家的是，我首先基本在没有意识的情况下有了这个账户，但是自己从来没
l*y
48 楼
2nd this
一些
【在 l*******u 的大作中提到】
: 用荧光二抗，同时染，不用担心交叉反应，也不用担心蛋白被洗掉，而且定量也更准一些
:
: antibody
一些
【在 l*******u 的大作中提到】
: 用荧光二抗，同时染，不用担心交叉反应，也不用担心蛋白被洗掉，而且定量也更准一些
:
: antibody
l*y
49 楼
also 2nd this。这就是用不同的 dynamic ranges 来区分。具体的计算是：比如说，
要看的 protein 需要 5min 曝光，而 house keeping protein 只需要 5S，就可以不
用 stripping 了。最糟的情况下由这种方法带来的误差也不太可能会超过 1/60 也就
是 1.7% （除非 GAPDH 上的 non-specific binding 比 target protein 还要强 --
那也是可以估算的）。而对于 WB，只要方法带来的误差不超过 5%，就可以忽略之。想
要更精确的结果，只需要调节一抗的浓度来加大弱信号和强信号的信号比就可以。
【在 C**S 的大作中提到】
: 之前试过几种stripping buffer，没发现好用的。现在我都是先染一个弱的蛋白，比如
: 曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
要看的 protein 需要 5min 曝光，而 house keeping protein 只需要 5S，就可以不
用 stripping 了。最糟的情况下由这种方法带来的误差也不太可能会超过 1/60 也就
是 1.7% （除非 GAPDH 上的 non-specific binding 比 target protein 还要强 --
那也是可以估算的）。而对于 WB，只要方法带来的误差不超过 5%，就可以忽略之。想
要更精确的结果，只需要调节一抗的浓度来加大弱信号和强信号的信号比就可以。
【在 C**S 的大作中提到】
: 之前试过几种stripping buffer，没发现好用的。现在我都是先染一个弱的蛋白，比如
: 曝光需要30秒的。之后不做stripping，接着染强的，比如1秒就可以的。
a*2
50 楼
感谢大家的建议！
附上胶图，回馈本版：）
最终，我选择用同一张胶staining，并且不做strip
为了确认没有cross-talk，弃用chemi，改用fluorescent:
1) 一张胶，同时用anti-ms goat 和 anti-rb goat 做primary antibody staining;
2) 再同时用 anti-rb donkey Alexa647 和 anti-ms donkey Alexa488 做secondary
antibody staining;
3) 如gel image所示，用473nm激发时，我只看到anti-ms所对应的protein,而用635nm
激发时，只看到anti-rb对应的protein:)
初步实验算是成功〜
再次谢谢大家！
附上胶图，回馈本版：）
最终，我选择用同一张胶staining，并且不做strip
为了确认没有cross-talk，弃用chemi，改用fluorescent:
1) 一张胶，同时用anti-ms goat 和 anti-rb goat 做primary antibody staining;
2) 再同时用 anti-rb donkey Alexa647 和 anti-ms donkey Alexa488 做secondary
antibody staining;
3) 如gel image所示，用473nm激发时，我只看到anti-ms所对应的protein,而用635nm
激发时，只看到anti-rb对应的protein:)
初步实验算是成功〜
再次谢谢大家！
相关阅读
防止学生博士后转行的策略14k的plasmid用lipofection2000转到细胞中会不会有困难？jms 生了娃之后多久开始做实验？谁给带娃？真诚建议：不要再转统计了生物信息要不要转生统/统计？打算改名字，将英文名字加成first name 还是middle name？ (转载)天朝科研真的发生了翻天覆地的变化又一postdoc失业了1% formaldehyde fix过的细胞的表位能被做flow的抗体识别吗？生物学能发展的最高层次是什么？这样的生物薄厚苦逼是不是很普遍？paper help生物文章通讯作者和第一通讯地址美女土博混到caltech的APPaper help, thanks a lot生物博士的死期Which company has good reputation for peptide synthesis转专业与转方向多是顺应了发展的需求海归前的感慨 (转载)悬浮细胞加药筛选以后好多细胞死掉了怎么去除？