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悬浮细胞加药筛选以后好多细胞死掉了怎么去除？

悬浮细胞加药筛选以后好多细胞死掉了怎么去除？# Biology - 生物学

j*62012-12-31 08:12

1 楼

前天第一次做温泉蛋失败了，本来打算开启一周至一个月的探索性实验，没想到第二次
就成功了（觉得比较成功吧，求拍）～
第一次参数：砂锅，鸡蛋一枚，沸水：冷水=10:3，浸泡时间10min，之后取出浸冷水；
结果：蛋最外层有2mm厚凝结，其余均为液态
第二次参数：砂锅，鸡蛋一枚，沸水：冷水=10:4，浸泡时间30min，之后取出浸冷水；
结果：蛋黄凝固，蛋白半熟，融融状
温泉蛋乀原理是蛋黄熟成温度比蛋白稍低，但蛋白不易导热，所以需要中温长时间浸泡
。以后有时间可继续优化参数。
第一次发帖，请多指教～

c*n2012-12-31 08:12

2 楼

自己给自己combine转有没有每月限多少次的说法？从别人那里买点数呐？

b*d2012-12-31 08:12

3 楼

根据attitude同学的统计
NSC
RFE 87 Denial 21 Approval 44 Withdraw 1
Pending 9
TSC
RFE 100 Denial 32 Approval 54 Withdraw 0
Pending 15
仅考虑最后有结果的case，总样本数151,误差+-2%
NSC Denial 32.31% Approval 67.69%
TSC Denial 37.21% Approval 62.79%
好像NSC的通过率更高一些

b*i2012-12-31 08:12

4 楼

BRAYDEN是我们家第一个孩子。
一晃已经好几年了。
苦乐并存，但我们觉得很幸运，希望他也这么觉得---我不知道，我问过他，他什么也
不说...
希望所有的宠友的宠物---包括我儿子在内，都健康。
TO: YMcDullY---没真正给他剪过毛。

m*u2012-12-31 08:12

5 楼

不跟风了。。。用dropbox用惯了

d*i2012-12-31 08:12

6 楼

就是有什么办法能把死细胞去除，只留下活的细胞继续加药筛选。谢谢！

s*92012-12-31 08:12

7 楼

好吃吗？~~看上去没太大食欲···

【在 j******6 的大作中提到】

: 前天第一次做温泉蛋失败了，本来打算开启一周至一个月的探索性实验，没想到第二次
: 就成功了（觉得比较成功吧，求拍）～
: 第一次参数：砂锅，鸡蛋一枚，沸水：冷水=10:3，浸泡时间10min，之后取出浸冷水；
: 结果：蛋最外层有2mm厚凝结，其余均为液态
: 第二次参数：砂锅，鸡蛋一枚，沸水：冷水=10:4，浸泡时间30min，之后取出浸冷水；
: 结果：蛋黄凝固，蛋白半熟，融融状
: 温泉蛋乀原理是蛋黄熟成温度比蛋白稍低，但蛋白不易导热，所以需要中温长时间浸泡
: 。以后有时间可继续优化参数。
: 第一次发帖，请多指教～

c*o2012-12-31 08:12

8 楼

没听说有

【在 c******n 的大作中提到】

: 自己给自己combine转有没有每月限多少次的说法？从别人那里买点数呐？

l*g2012-12-31 08:12

9 楼

反正我是TSC辖区的，没选择

Y*Y2012-12-31 08:12

10 楼

怪不得毛这么好。金毛据说不能剪，剪了之后再也长不了原来这么好。

f*n2012-12-31 08:12

11 楼

自己搞就可以啊，为啥还要买？

C*42012-12-31 08:12

12 楼

用 Ficoll
一种溶液铺5ml在15ml试管里面，上面小心地铺上1ml你的悬浮细胞（原来的体积太大
，先离心一下，去掉一部分上清）。1500rpm 离心5min，注意选择离心机最慢速停止的
那种
死细胞沉淀在下面，活细胞在溶液里面。再pbs或者培养基洗涤一下活细胞，因为活细
胞不喜欢ficoll。
继续培养即可

R*w2012-12-31 08:12

13 楼

都爆炸了? 这是成功还是失败啊?

F*p2012-12-31 08:12

14 楼

估计你现在直接file到NSC，他们也不会据。NSC现在生意肯定不好，大量的efile都去
了tsc，估计年底结帐，两个center的头要掐起来了。

t*u2012-12-31 08:12

15 楼

那完了
来福kc输液，前腿踢掉一块
小时候脖子底下被跳蚤咬的乱七八糟，给剃了
前几日，我预谋很久，把他前后腿后面的毛剪短了，不然雨天带泥的厉害

m*u2012-12-31 08:12

16 楼

没有搞过。。taobao很便宜，大概也就$1。。。

【在 f****n 的大作中提到】

: 自己搞就可以啊，为啥还要买？

t*t2012-12-31 08:12

17 楼

Mark 学习了

b*p2012-12-31 08:12

18 楼

LZ别伤心，我觉得那个蛋黄晶莹剔透的还挺美，不知道好不好吃~~
赞好学精神，我肯定没有这个耐心的。。。

A*d2012-12-31 08:12

19 楼

可以负责任的说，现在TSC有些趋紧，NSC最近放水较多。前面不好说，好象是风水轮流
转，现在到NSC。

【在 b******d 的大作中提到】

: 根据attitude同学的统计
: NSC
: RFE 87 Denial 21 Approval 44 Withdraw 1
: Pending 9
: TSC
: RFE 100 Denial 32 Approval 54 Withdraw 0
: Pending 15
: 仅考虑最后有结果的case，总样本数151,误差+-2%
: NSC Denial 32.31% Approval 67.69%
: TSC Denial 37.21% Approval 62.79%

j*g2012-12-31 08:12

20 楼

【在 m**u 的大作中提到】

: 没有搞过。。taobao很便宜，大概也就$1。。。

d*i2012-12-31 08:12

21 楼

你这里说的“一种溶液”就是FICOLL吧？非常感谢！

【在 C********4 的大作中提到】

: 用 Ficoll
: 一种溶液铺5ml在15ml试管里面，上面小心地铺上1ml你的悬浮细胞（原来的体积太大
: ，先离心一下，去掉一部分上清）。1500rpm 离心5min，注意选择离心机最慢速停止的
: 那种
: 死细胞沉淀在下面，活细胞在溶液里面。再pbs或者培养基洗涤一下活细胞，因为活细
: 胞不喜欢ficoll。
: 继续培养即可

m*82012-12-31 08:12

22 楼

挺好的。蛋黄结了蛋白没有结。

★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器

【在 j******6 的大作中提到】

w*d2012-12-31 08:12

23 楼

大家还efile to TSC吗？

X*r2012-12-31 08:12

24 楼

他们怎么这么便宜

【在 m**u 的大作中提到】

: 不跟风了。。。用dropbox用惯了

C*42012-12-31 08:12

25 楼

对的我的意思就是 ficoll，这是一种溶液，多聚蔗糖之类的大分子....实际上就是
密度梯度离心。常用来分离血液细胞们的。
我一般就用这个，快速又便宜。注意离心刹车速度，要选无档的
貌似还有一种kit Dead Cell Removal Kit # 130-090 101 MiltenyiBiotec公司
可能比ficoll贵或者更好 ...我看有人用过，但是我自己没用过

【在 d****i 的大作中提到】

:
: 你这里说的“一种溶液”就是FICOLL吧？非常感谢！

A*d2012-12-31 08:12

26 楼

想Efile就file，这可没人拉着你。我就是在三月底觉得TSC形势好，efile去的，现在
真是后悔。这玩意和玩股票一样，跟风吃屁。但真让你和别人不一样，你还真需要勇气
，所以股市大部分人赔多赚少。等别人试过了--好使，你再来，哈哈，P等着。

【在 w***d 的大作中提到】

: 大家还efile to TSC吗？

F*y2012-12-31 08:12

27 楼

我也买了，9块人民币

d*i2012-12-31 08:12

28 楼

非常非常感谢！我去试试看。新年快乐！

【在 C********4 的大作中提到】

: 对的我的意思就是 ficoll，这是一种溶液，多聚蔗糖之类的大分子....实际上就是
: 密度梯度离心。常用来分离血液细胞们的。
: 我一般就用这个，快速又便宜。注意离心刹车速度，要选无档的
: 貌似还有一种kit Dead Cell Removal Kit # 130-090 101 MiltenyiBiotec公司
: 可能比ficoll贵或者更好 ...我看有人用过，但是我自己没用过