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请问版上牛人:什么promoter在mouse astrocytes里面表达比较好啊?
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请问版上牛人:什么promoter在mouse astrocytes里面表达比较好啊?# Biology - 生物学
l*u
1
看到最新的新闻,是陈秀雯被骗千万,已经破产,然后整个人很憔悴。
陈秀雯才50出头,曾经是亚视一姐,演了很多经典电视剧,最出名的是再见艳阳天系列。
后来陈秀雯因为爱情,结婚,就此退隐。
陈秀雯老公也是演员,不过不太出名,老公做生意,被骗,损失惨重,可谓破产。明星
做生意很多都是不行的,比如陈百强,谭咏麟接受采访的时候说失败原因他被骗四千万
。当时还在还债。陈豪喜欢喝咖啡,开了很多咖啡店,最后多是亏损的。黄晓明也开店
,想让粉丝来捧场,好像也生意 不好。
我个人总结,明星开店做生意,很多是亏损首场,主要在于明星主业是拍戏,不一定有
生意头脑,而且这些人明星的文化素质不高,所以在做生意上也容易吃亏。
感觉做生意做得很好的明星很少,有人说刘嘉玲算一个,不知道是真的还是假的。
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M*t
2
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: hosr (LL), 信区: Military
标 题: 乔布斯创造的苹果奇迹一不小心被弄丢了
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 15 19:14:19 2019, 美东)
上周,苹果罕见地宣布下调营收预期。在给投资者的声明中,苹果公司首席执行官库克
将苹果产品卖不动“甩锅”给中国,遭多家外媒“打脸”。《日经亚洲评论》1月12日
又曝料称,苹果正在削减目前的生产计划,预计2019年1月至3月的新款iPhone的产量将
减少约10%。
最为悲催的是,苹果在2018年8月成为史上首家市值超万亿美元的公司后,其股价在1月
3日较此前最高点下跌约39%,市值蒸发4千多亿美元,到目前较高点缩水三分之一,被
亚马逊、微软、谷歌超越。
短短半年之间,苹果经历了从巅峰到坠落的过程。面对困境,分析师认为发布新的流媒
体服务就是苹果能否翻身的锦囊之一。但这也许无济于事。
作为掌舵人,库克发布了2019财年第一财季(即截至2018年12月29日的三个月)的营收
预期,从原来的至少890亿美元下调到了840亿美元。这一数据也令很多投资人感到失望
。这意味着苹果公司的营收不仅同比将下降5%,而且也将是2016年以来苹果首次在这个
传统的优势季度出现营收下滑。
其实,苹果目前在智能手机、平板电脑市场都遭遇了瓶颈,必须在保住市场份额的前提
下,寻找新的突破点,以保持业绩与股价的增长。预计今年苹果将做出一系列产品设计
的改变,包括发布大尺寸(可能是4.8英寸)的iPhone;MacBook产品线也将做出全新设
计的调整。
过去,苹果以高昂的价格,其赚得盆满钵满。然而,苹果的死穴恰恰是高利润。高利润
吸引了众多股东购买其股票,一旦利润下降,第一个下台的就是以库克为首的管理层。
为了保住饭碗,苹果的售价才会一次次的冲击新高。而用户量下滑只是这种经营策略的
负面影响之一,但这不可逆转。
目前,业内对苹果的评价都是比较悲观的,已经有分析师明确的指出,没有了乔布斯的
苹果将失去了核心,苹果的新品已经延期,如果后续冲击力再不够的话,那么无论是在
PC行业,还是在手机行业,苹果都将面临威胁。
乔布斯又是那种天生的创新者,对创造新产品有着一种天然的渴望。但这也带来对于苹
果产品创新能力的常见误解,产品创新能力是源自乔布斯天生的天才。最同样重要的是
,乔布斯在他回归后的十年里,又掌握了(或者至少是落实与展现了)另一种产品创新
能力。
乔布斯对于苹果的意义相信没有任何人会否认,没有乔布斯就不会有苹果,就不会有苹
果的魅力无穷和激情四射,在已经过去的岁月里,乔布斯凭借自己一个人的独特魅力,
将苹果从濒临死亡的边缘拉了回来。
然而,库克并没有这样的能力和魅力,几乎是在吃乔布斯遗留下来的老本。这不禁让人
感叹,乔布斯创造的苹果奇迹一不小心就被库克弄丢了。
微软、三星,华为这些苹果的竞争对手都虎视眈眈,一旦苹果陷入困境,这些公司都会
拼命争夺苹果失掉的那部分市场,新的竞争和洗牌将在进行中。
归根结底,一家企业像一个人一样,不能一辈子躺在功劳簿上吃老本,不改变就死,这
是永远的生存法则。就苹果而言,不管你有多么辉煌的过去,不管你曾多么无敌,未来
不会为失败者而来,只会由胜利者书写。
这是一个最好的时代,也是一个最坏的时代,这个时代能够让雷军的小米这种初创不久
的公司在短短几年内快速崛起,问鼎国内第一,也能够让苹果这样曾经的实力派从顶峰
坠落到深渊,从威名赫赫到鲜为人知……这就是市场的选择,也是历史的选择。
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b*9
3
做了个construct,转primary newborn astrocytes,用hygromycin来筛选stable
transfection,可是一直都没有筛出来,细胞全都死光光了。转染效率还算可以,是电
转,有30%左右。hygromycin浓度也不算高,50ug/ml。
hygromycin是用TK promoter表达的,不知道是不是因为promoter不行。试了别人的一
个puromycin construct,是pGK promoter,也基本上死光了。想问一问版上牛人有没
有经验可以传授。多谢多谢!
另外我是用CMV promoter来表达我要的基因,先转细胞,然后筛选stable line打到老
鼠上。听说CMV promoter在体内可能会被shut down,是不是也应该换掉呢?谢谢!
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M*t
4
库克短视
很多项目一看不来钱就直接砍掉了,而不是去努力做好
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b*9
5
顶一下。

【在 b******9 的大作中提到】
: 做了个construct,转primary newborn astrocytes,用hygromycin来筛选stable
: transfection,可是一直都没有筛出来,细胞全都死光光了。转染效率还算可以,是电
: 转,有30%左右。hygromycin浓度也不算高,50ug/ml。
: hygromycin是用TK promoter表达的,不知道是不是因为promoter不行。试了别人的一
: 个puromycin construct,是pGK promoter,也基本上死光了。想问一问版上牛人有没
: 有经验可以传授。多谢多谢!
: 另外我是用CMV promoter来表达我要的基因,先转细胞,然后筛选stable line打到老
: 鼠上。听说CMV promoter在体内可能会被shut down,是不是也应该换掉呢?谢谢!

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a*d
6
S100beta or GFAP?
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h*y
7
Hygromycin浓度偏高了。你有没有先做一下kill curve找出合适的antibiotic浓度?
合适的hygromycin通常在10-30 ug/mL
合适的puromycin通常在0.3-1 ug/mL

【在 b******9 的大作中提到】
: 做了个construct,转primary newborn astrocytes,用hygromycin来筛选stable
: transfection,可是一直都没有筛出来,细胞全都死光光了。转染效率还算可以,是电
: 转,有30%左右。hygromycin浓度也不算高,50ug/ml。
: hygromycin是用TK promoter表达的,不知道是不是因为promoter不行。试了别人的一
: 个puromycin construct,是pGK promoter,也基本上死光了。想问一问版上牛人有没
: 有经验可以传授。多谢多谢!
: 另外我是用CMV promoter来表达我要的基因,先转细胞,然后筛选stable line打到老
: 鼠上。听说CMV promoter在体内可能会被shut down,是不是也应该换掉呢?谢谢!

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n*w
8
re. pax2 as well.

【在 a****d 的大作中提到】
: S100beta or GFAP?
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