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请教一个蛋白 SUMO 的问题

请教一个蛋白 SUMO 的问题# Biology - 生物学

f*e2013-08-19 07:08

1 楼

本地中餐馆太烂，把人逼成了厨师
这个菜是妈妈教的，湖北风味
辣椒是新鲜红辣椒炸的，想做成香辣脆那种，没找到protocol，随便炸竟然试成功了
花生也是炸的，普通炒花生的方法
其实可以用黄飞鸿香辣脆，问题是味精太多我不喜欢，另外我们这里很少有卖的
牛肉是先卤后炸/炒
顺序是卤牛肉
牛肉放凉切条或片（不放凉会散）
炸辣椒（不要太老），炸花生（不要炸过），炸牛肉条
牛肉条炸15分钟左右，软硬看自己的喜欢，差不多了倒辣椒和花生
根据自己口味调味（盐、糖、胡椒、老干妈、味精；还可以加花椒、桂皮、茴香，我这
里没有放）
加芝麻起锅

g*f2013-08-19 07:08

2 楼

我最近在做一个蛋白的 SUMOylation, 用SUMO1(D-11)(SC5308,santa clus) 来IP,然后
用我要做的蛋白的抗体 blot,用的是 Dynabeads Protein G. 但是没有任何 SUMOed
蛋白的带，但是比我的目标蛋白size 小的位置有一条很浓的带，我怀疑是从beads上
elute 下来的东西，会不会是IgG呢？
附图从左到右 lane 1－4：不同处理的样品用SUMO1 IP后用目标蛋白抗体blot; lane
5-8 是相应的 input; lane 9-12 是ip 后用 bead collect 后的 leftover。
从图上看IP 的样品在目标蛋白的位置没有任何带，但是下面很强的band 不知是什么？
不知是否是这个影响了 IP，如何消除掉这种非特异性。
还请对 SUMO 有经验的大小牛们不吝赐教。多谢

p*j2013-08-19 07:08

3 楼

非常不错呀！

K*a2013-08-19 07:08

4 楼

SUMO1 是mouse. 你的蛋白抗体是不是也是mouse？用的什么elution buffer?

lane

【在 g*******f 的大作中提到】

: 我最近在做一个蛋白的 SUMOylation, 用SUMO1(D-11)(SC5308,santa clus) 来IP,然后
: 用我要做的蛋白的抗体 blot,用的是 Dynabeads Protein G. 但是没有任何 SUMOed
: 蛋白的带，但是比我的目标蛋白size 小的位置有一条很浓的带，我怀疑是从beads上
: elute 下来的东西，会不会是IgG呢？
: 附图从左到右 lane 1－4：不同处理的样品用SUMO1 IP后用目标蛋白抗体blot; lane
: 5-8 是相应的 input; lane 9-12 是ip 后用 bead collect 后的 leftover。
: 从图上看IP 的样品在目标蛋白的位置没有任何带，但是下面很强的band 不知是什么？
: 不知是否是这个影响了 IP，如何消除掉这种非特异性。
: 还请对 SUMO 有经验的大小牛们不吝赐教。多谢

x*i2013-08-19 07:08

5 楼

口水

K*a2013-08-19 07:08

6 楼

你要是担心抗体被elute，你可以把抗体和beads crosslink在一起

lane

【在 g*******f 的大作中提到】

c*e2013-08-19 07:08

7 楼

黄飞鸿香辣脆花生是炒菜必备啊，麻，非常的麻，貌似里面就是青麻椒，花生是山东大
花生，没的说。用這個做辣子鸡丁，宫保鸡丁，都是一绝。

【在 f**e 的大作中提到】

: 本地中餐馆太烂，把人逼成了厨师
: 这个菜是妈妈教的，湖北风味
: 辣椒是新鲜红辣椒炸的，想做成香辣脆那种，没找到protocol，随便炸竟然试成功了
: 花生也是炸的，普通炒花生的方法
: 其实可以用黄飞鸿香辣脆，问题是味精太多我不喜欢，另外我们这里很少有卖的
: 牛肉是先卤后炸/炒
: 顺序是卤牛肉
: 牛肉放凉切条或片（不放凉会散）
: 炸辣椒（不要太老），炸花生（不要炸过），炸牛肉条
: 牛肉条炸15分钟左右，软硬看自己的喜欢，差不多了倒辣椒和花生

g*f2013-08-19 07:08

8 楼

多谢回复，我用的蛋白抗体确实是mouse的，这样会有什么问题吗？
我没有 elute，就是直接将loading buffer 加在洗过后的bead里，然后煮5min，就跑
western 了。

c*e2013-08-19 07:08

9 楼

现在牙口不好，吃牛肉干会塞牙缝。

【在 f**e 的大作中提到】

o*42013-08-19 07:08

10 楼

25 kd跟 50 kd附近是会有很强的 IgG的信号的，
需要用true blot的二抗，
ebioscience有卖

z*r2013-08-19 07:08

11 楼

看着不错，其实既然油炸就别在乎味精了，又不是炸味精。

【在 f**e 的大作中提到】

e*s2013-08-19 07:08

12 楼

你的IP用的mouse,那么IB就最好不要用mouse。
特别你的目标蛋白要是~50或者25kd的话。
换个其他Species 的抗体。必要的话，甚至用light chain的二抗等其他办法来降低IgG
的干扰。
不过，貌似你这个没有SUMO被检测到。而且好像是用purified proteins做的，为什么
要做IP呢？不能直接用SUMO和目标蛋白的抗体跑WB来检测SUMO吗？

【在 g*******f 的大作中提到】

: 多谢回复，我用的蛋白抗体确实是mouse的，这样会有什么问题吗？
: 我没有 elute，就是直接将loading buffer 加在洗过后的bead里，然后煮5min，就跑
: western 了。

x*j2013-08-19 07:08

13 楼

先在调料里面煮透，然后再烤更健康哈。

g*f2013-08-19 07:08

14 楼

多谢回复，我就是担心SUMO的蛋白比较少，所以先用SUMO1 IP 后再用我的目标蛋白抗
体blot。请问您所说的直接用SUMO和目标蛋白的抗体跑WB来检测SUMO是怎么做呢？您
意思是用SUMO1 blot 然后 strip 再用目标蛋白的抗体跑WB吗？

IgG

【在 e****s 的大作中提到】

: 你的IP用的mouse,那么IB就最好不要用mouse。
: 特别你的目标蛋白要是~50或者25kd的话。
: 换个其他Species 的抗体。必要的话，甚至用light chain的二抗等其他办法来降低IgG
: 的干扰。
: 不过，貌似你这个没有SUMO被检测到。而且好像是用purified proteins做的，为什么
: 要做IP呢？不能直接用SUMO和目标蛋白的抗体跑WB来检测SUMO吗？