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请教细胞培养达人:是否有这样的细胞死亡形态
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请教细胞培养达人:是否有这样的细胞死亡形态# Biology - 生物学
k*y
1
在贴壁细胞中siRNA了某基因,之后就有大量的碎片漂浮在medium里,镜下看就是小圆
泡,diameter < 10um,而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形,这些碎
片并不能uptake trypan blue,计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的%算,并不比对照组减少很多,大概从95%减少到
90%
用FITC-Annexin V和PI double staining,做flow没有看到明显Annexin V+细胞群,
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身%也小于10%)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生,
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡?能否看出是何种死亡方式?谢谢大家!
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l*y
2
能想到的最可能的解释就是 selective necrosis。
建议做个 mtt 看看。
trypan blue 和 facs 都 assume canonical apoptosis,可能不适用于你的 case。

【在 k******y 的大作中提到】
: 在贴壁细胞中siRNA了某基因,之后就有大量的碎片漂浮在medium里,镜下看就是小圆
: 泡,diameter < 10um,而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形,这些碎
: 片并不能uptake trypan blue,计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
: 有明显减少, 但以trypan blue+ 的%算,并不比对照组减少很多,大概从95%减少到
: 90%
: 用FITC-Annexin V和PI double staining,做flow没有看到明显Annexin V+细胞群,
: AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身%也小于10%)
: 用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生,
: 计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
: 请问这是否说明细胞有死亡?能否看出是何种死亡方式?谢谢大家!

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