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肝脏，脂肪组织Western blot大家都用什么Loading control呀？

肝脏，脂肪组织Western blot大家都用什么Loading control呀？# Biology - 生物学

j*s2013-10-01 07:10

1 楼

请各位帮忙
事情是这样发生得, 我现在被控 assault on a female实际上我并没做
因为法律程序十分漫长已超过8个月未来还有6个月直到事情决定我的律师建议我如果
如果我同意去
anger management的课来当作交换和DA 来把这案 drop 但是我不签任何书面文件
我需要知道如果我这样做会有甚麼影响在将来我申请公民的时候?
还有在法律上这是甚麼意思 DA 会drop the case? Drop the case 对未来申请公民会
对未来申
请公民会有什麼影响? 还有在什麼情况下会让DA做出drop the case 的决定?应为DA觉
得胜算不高?
还是DA会把条件交换写在报告上纵使我不签任何文件
联邦政府在未来审我的案件时是否都将可以看到这一切得来龙去莫纵使DA drop the
case
我女友最初给了伪证之后她愿意去改她的证辞有何方式她可以这样做是去跟DA说吗
谢谢

C*c2013-10-01 07:10

2 楼

现在用的是actin，经常很脏，而且loading variation很大，大家都用什么loading
control呢？有用tubulin的吗？求推荐一个干净的tubulin antibody？谢谢！

l*f2013-10-01 07:10

3 楼

1.不管你的案件最后怎么处理，你是被drop case无罪释放还是被判死刑，都对你以后
申请公民申请绿卡有影响。那么长时间的name check不是用来吓吓小孩子的。
2.在美国做伪证，罪加一等。你女朋友要是翻供了就等着被抓进去关几年吧

z*82013-10-01 07:10

4 楼

我也觉得actin的wb好脏啊，同求！

j*s2013-10-01 07:10

5 楼

If you dont know about anything, dont say anything.

C*c2013-10-01 07:10

6 楼

没有人推荐吗？

c*g2013-10-01 07:10

7 楼

你问的这一堆问题，有多少个是跟本版有关的？

【在 j**********s 的大作中提到】

: 请各位帮忙
: 事情是这样发生得, 我现在被控 assault on a female实际上我并没做
: 因为法律程序十分漫长已超过8个月未来还有6个月直到事情决定我的律师建议我如果
: 如果我同意去
: anger management的课来当作交换和DA 来把这案 drop 但是我不签任何书面文件
: 我需要知道如果我这样做会有甚麼影响在将来我申请公民的时候?
: 还有在法律上这是甚麼意思 DA 会drop the case? Drop the case 对未来申请公民会
: 对未来申
: 请公民会有什麼影响? 还有在什麼情况下会让DA做出drop the case 的决定?应为DA觉
: 得胜算不高?

l*b2013-10-01 07:10

8 楼

是你的sample脏，不是actin脏。你的lysate如果是干干净净的，没有脂类混在里头，
用tubulin和actin的效果是差不多的。反之，用啥都有smear。

y*i2013-10-01 07:10

9 楼

abcam的单抗tubulin非常好用

【在 C****c 的大作中提到】

: 现在用的是actin，经常很脏，而且loading variation很大，大家都用什么loading
: control呢？有用tubulin的吗？求推荐一个干净的tubulin antibody？谢谢！

A*y2013-10-01 07:10

10 楼

How do you normalize your loading? If you use protein concentrations, you
need to dilute some lysate in 2% SDS and do a BCA assay. It is likely your
loading variant is big.

C*c2013-10-01 07:10

11 楼

这个我也知道，不过肝脏的脂肪很难完全去掉，因为太多了

【在 l****b 的大作中提到】

: 是你的sample脏，不是actin脏。你的lysate如果是干干净净的，没有脂类混在里头，
: 用tubulin和actin的效果是差不多的。反之，用啥都有smear。

C*c2013-10-01 07:10

12 楼

Usually I weigh the tissues. I tried to do BCA before, but it is not very
accurate. Does it work well when you dilute it in 2% SDS and do BCA assay?
Thanks!

your

【在 A******y 的大作中提到】

: How do you normalize your loading? If you use protein concentrations, you
: need to dilute some lysate in 2% SDS and do a BCA assay. It is likely your
: loading variant is big.

z*82013-10-01 07:10

13 楼

我也做的tissue，我觉得normalize到重量上很不可靠啊，因为有些tissue lysis的效
率感觉不太一样，我个人觉得normalize protein input 用bradford倒是还不错的感觉。

【在 C****c 的大作中提到】

: Usually I weigh the tissues. I tried to do BCA before, but it is not very
: accurate. Does it work well when you dilute it in 2% SDS and do BCA assay?
: Thanks!
:
: your

l*b2013-10-01 07:10

14 楼

It is difficult to remove the fat, but not impossible. Spin first, then use
gentle vacuum to remove the top layer, which contains mostly lipids. Repeat
the process if necessary. The remaining lysates can be further diluted to
reduce the lipid concentration. Since liver samples generally have plenty of
proteins so diluting them would be OK. It is a pain in the neck but with
this method my liver western blots, even with samples from high fat fed mice
, look perfectly fine.

【在 C****c 的大作中提到】

: 这个我也知道，不过肝脏的脂肪很难完全去掉，因为太多了

C*c2013-10-01 07:10

15 楼

用重量需要每一步所有的sample都要很consistent。下次我再试试dilute到SDS在做BCA。

觉。

【在 z*********8 的大作中提到】

: 我也做的tissue，我觉得normalize到重量上很不可靠啊，因为有些tissue lysis的效
: 率感觉不太一样，我个人觉得normalize protein input 用bradford倒是还不错的感觉。

C*c2013-10-01 07:10

16 楼

Thanks a lot for the tips.

use
Repeat
of
mice

【在 l****b 的大作中提到】

: It is difficult to remove the fat, but not impossible. Spin first, then use
: gentle vacuum to remove the top layer, which contains mostly lipids. Repeat
: the process if necessary. The remaining lysates can be further diluted to
: reduce the lipid concentration. Since liver samples generally have plenty of
: proteins so diluting them would be OK. It is a pain in the neck but with
: this method my liver western blots, even with samples from high fat fed mice
: , look perfectly fine.

f*e2013-10-01 07:10

17 楼

脏可能是的样品要多多离心几次了，但是variation我觉得避免不了，参考northern，
组织样品loading control变化非常大

【在 z*********8 的大作中提到】

: 我也觉得actin的wb好脏啊，同求！

w*d2013-10-01 07:10

18 楼

我试过下面的方法。材料是小鼠肝脏。供参考。
加PBS，匀浆（homogenize)，离心，裂掉RBC，加PBS，离心，用PBS洗一次，这时的上
清不再是浑浊的了，用RIPA buffer裂解细胞，离心，收集上清，BCA测蛋白浓度，
normalize.