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PCR产物凝胶提纯之后变小了怎么回事

PCR产物凝胶提纯之后变小了怎么回事# Biology - 生物学

i*n2014-02-03 08:02

1 楼

刚搬家，还没开网络，想起来偶Sprint手机是unlimited data plan，就找了个app连到
电脑上上网，发现速度还可以，反正在家用的少，索性用这个不开网络了。
确实用的很狠，上个月用了15GB流量。
Sprint估计郁闷了，现在每三天派出一个阿三客服给我电话。说给我个限量版的优惠，
免费送个Epic但是要加条线，但是plan要从69.99加到99.99，然后不由分说问我想要神
马颜色组合的手机。
我想等dual-core的Android phone，本来不想理他，但是偶印度英语能力很久没操练了
，就跟丫玩了下。三哥不断问我说，你有亲戚朋友七大姑八大姨神马的么？这手机可以
送他们啊。纠结了好久，他依然不愿意承认我跟他说的多拿个手机没用。
最后三哥崩溃了，居然说，说你上班一个手机，下班一个手机，多美好啊。
我问他，你公司提供老婆吗？对方沉默了...

z*i2014-02-03 08:02

2 楼

这些东西早就有了啊。。。

j*i2014-02-03 08:02

3 楼

最近实验室里很多人克隆时遇到了这个诡异的事情。
1. PCR产物跑胶。大小正确。
2. 切胶回收提纯之后，第二天再跑胶确认，DNA片段居然变小了（不是smear)。
这个怎么解释呢？
1. 细菌污染，DNA降解？那应该得到很多很小的片段才是，而现在确是一条很强的条带
，只是变小了而已。
2. 变成单链DNA了? 倒是解释的通，但是怎么变呢？
各位有何高见呢？

N*m2014-02-03 08:02

4 楼

太不厚到了。谋生不易，人家也就是为了混口辛苦饭吃，
你不想要就直接拒绝，让他们别再打电话，至于这么揶揄人家嘛。

【在 i*******n 的大作中提到】

: 刚搬家，还没开网络，想起来偶Sprint手机是unlimited data plan，就找了个app连到
: 电脑上上网，发现速度还可以，反正在家用的少，索性用这个不开网络了。
: 确实用的很狠，上个月用了15GB流量。
: Sprint估计郁闷了，现在每三天派出一个阿三客服给我电话。说给我个限量版的优惠，
: 免费送个Epic但是要加条线，但是plan要从69.99加到99.99，然后不由分说问我想要神
: 马颜色组合的手机。
: 我想等dual-core的Android phone，本来不想理他，但是偶印度英语能力很久没操练了
: ，就跟丫玩了下。三哥不断问我说，你有亲戚朋友七大姑八大姨神马的么？这手机可以
: 送他们啊。纠结了好久，他依然不愿意承认我跟他说的多拿个手机没用。
: 最后三哥崩溃了，居然说，说你上班一个手机，下班一个手机，多美好啊。

s*o2014-02-03 08:02

5 楼

不知道下个回合能不能赶上...

m*D2014-02-03 08:02

6 楼

If you use water to dissolve the DNA, you might get single-stranded DNA.
To form DS-DNA, certain salt concentration is necessary. I generally mix the
DNA with TE buffer (1:9), and then load on gel with loading buffer. It will
get back to normal size.

m*t2014-02-03 08:02

7 楼

不错不错哈

刚搬家，还没开网络，想起来偶Sprint手机是unlimited data plan，就找了个app连到
电脑上上网，发现速度还可以，反正在家用的少，索性用这个不开网络了。
确实用的很狠，上个月用了15GB流量。
Sprint估计郁闷了，现在每三天派出一个阿三客服给我电话。说给我个限量版的优惠，
免费送个Epic但是要加条线，但是plan要从69.99加到99.99，然后不由分说问我想要神
马颜色组合的手机。
我想等dual-core的Android phone，本来不想理他，但是偶印度英语能力很久没操练了
，就跟丫玩了下。三哥不断问我说，你有亲戚朋友七大姑八大姨神马的么？这手机可以
送他们啊。纠结了好久，他依然不愿意承认我跟他说的多拿个手机没用。
最后三哥崩溃了，居然说，说你上班一个手机，下班一个手机，多美好啊。
我问他，你公司提供老婆吗？对方沉默了...

【在 i*******n 的大作中提到】

r*e2014-02-03 08:02

8 楼

panoramic photo 也拿出来说事，黔驴技穷了。

【在 z*i 的大作中提到】

: 这些东西早就有了啊。。。

l*e2014-02-03 08:02

9 楼

我也遇到过。当时也猜测是这个原因，用TE重复一次果然就没事了。

the
will

【在 m*********D 的大作中提到】

: If you use water to dissolve the DNA, you might get single-stranded DNA.
: To form DS-DNA, certain salt concentration is necessary. I generally mix the
: DNA with TE buffer (1:9), and then load on gel with loading buffer. It will
: get back to normal size.

i*n2014-02-03 08:02

10 楼

我每次都明确拒绝叫不要打我电话了，但是他非要继续说，偶只好陪他玩了

【在 N***m 的大作中提到】

: 太不厚到了。谋生不易，人家也就是为了混口辛苦饭吃，
: 你不想要就直接拒绝，让他们别再打电话，至于这么揶揄人家嘛。

d*02014-02-03 08:02

11 楼

reinvent

w*r2014-02-03 08:02

12 楼

想知道大小变了多少？DNA多大？

【在 j******i 的大作中提到】

: 最近实验室里很多人克隆时遇到了这个诡异的事情。
: 1. PCR产物跑胶。大小正确。
: 2. 切胶回收提纯之后，第二天再跑胶确认，DNA片段居然变小了（不是smear)。
: 这个怎么解释呢？
: 1. 细菌污染，DNA降解？那应该得到很多很小的片段才是，而现在确是一条很强的条带
: ，只是变小了而已。
: 2. 变成单链DNA了? 倒是解释的通，但是怎么变呢？
: 各位有何高见呢？

J*n2014-02-03 08:02

13 楼

就找了个app连到电脑上上网?
How to do it?

【在 i*******n 的大作中提到】

j*i2014-02-03 08:02

14 楼

果然ok了！多谢！

the
will

【在 m*********D 的大作中提到】

i*n2014-02-03 08:02

15 楼

the app is PdaNet

【在 J*****n 的大作中提到】

:
: 就找了个app连到电脑上上网?
: How to do it?

s*s2014-02-03 08:02

16 楼

loading buffer本身应该就是10xTE加dye啊

【在 l********e 的大作中提到】

: 我也遇到过。当时也猜测是这个原因，用TE重复一次果然就没事了。
:
: the
: will

j*i2014-02-03 08:02

17 楼

有的loading buffer可能没有盐。我换了一种loading buffer就好了。

【在 s******s 的大作中提到】

: loading buffer本身应该就是10xTE加dye啊

j*i2014-02-03 08:02

18 楼

ssDNA是怎么形成的呢。切出来的胶也就是用50来度加热啊，好像不至于都变性了啊。

the
will

【在 m*********D 的大作中提到】

m*D2014-02-03 08:02

19 楼

(ZT)
Salt concentration
The phosphate groups are moderately strong acids, and thus they are always
ionized at physiological pHs. The two oxygens are equivalent, so they share
the single negative charge. These negative charges tend to blow the double
helix structure apart, which is perhaps why I haven't included them in the
forces that hold the helix together. Why is the helix stable?
Inside the cell, the monovalent salt concentration is about 0.15 M. The
major cation in the cell is K, while in the diagram I snow Na (no matter).
The concentration of positive ions is greater than average around the
negative phosphates, and this screens the repulsive force between the
phosphates. Since the screen is dependent on the salt, the melting
temperature should be dependent on the salt concentration.

One of the better formulas for melting temperature [Richly and Rhoads,
Nucleic Acids Res 17: 8543, 1989] uses the nearest neighbor thermodynamic
data, i.e. del H and del S, from the same study quoted at the start of this
section (c is the oligonucleotide concentration).
Tm = (del H / (del S + R * ln (c/4)))- 273 + 16.6 * log (salt)
Thus, for every 10 fold decrease in salt concentration, the Tm decreases
about 17 degrees C. This means that most DNA will denature at room
temperature (20 C) when the salt concentration falls below 10-5 to 10-6 M.

【在 j******i 的大作中提到】

: ssDNA是怎么形成的呢。切出来的胶也就是用50来度加热啊，好像不至于都变性了啊。
:
: the
: will

j*i2014-02-03 08:02

20 楼

原来这个道理！谢谢啊；）

share

【在 m*********D 的大作中提到】

: (ZT)
: Salt concentration
: The phosphate groups are moderately strong acids, and thus they are always
: ionized at physiological pHs. The two oxygens are equivalent, so they share
: the single negative charge. These negative charges tend to blow the double
: helix structure apart, which is perhaps why I haven't included them in the
: forces that hold the helix together. Why is the helix stable?
: Inside the cell, the monovalent salt concentration is about 0.15 M. The
: major cation in the cell is K, while in the diagram I snow Na (no matter).
: The concentration of positive ions is greater than average around the

l*a2014-02-03 08:02

21 楼

赞！！！

the
will

【在 m*********D 的大作中提到】