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how to concentrate protein with high recovery?

how to concentrate protein with high recovery?# Biology - 生物学

s*s2014-04-30 07:04

1 楼

请教有什么方法可以concentrate 低浓度的protein sample, 并且有较高的recovery
rate?
我的protein sample是cell lysate, 浓度大概是40ug/ml,总共3ml左右.想concentrate
到2mg/ml左右。试了millipore 的Amicon column, 是可以concentrate到想要的浓度，
但是回收率只有60%左右。大概很多protein粘在了膜上。因为最后的蛋白量对我很关键
，请问有没有什么方法可以达到80-90%的回收率？
十分感谢！

e*s2014-04-30 07:04

2 楼

这个问得有点太泛泛了。比如浓缩的目的是干什么？最关键，蛋白能否变性。
Amacon是好的浓缩纯蛋白的方法，对cell lysate不是太好。首先，有个分子量Cut的问
题，膜孔径的大小。其次，小蛋白本身就会丢失。自然你的recovery 不会高。
1.Salt cut，复溶后小心dialysis，去盐。蛋白还是活的。这么处理后，能否到80-90%
我也不知道。
2. methanol precipitation，蛋白应该是变性了的。
可能还有别的办法，期待大牛们讨论。

concentrate

【在 s******s 的大作中提到】

: 请教有什么方法可以concentrate 低浓度的protein sample, 并且有较高的recovery
: rate?
: 我的protein sample是cell lysate, 浓度大概是40ug/ml,总共3ml左右.想concentrate
: 到2mg/ml左右。试了millipore 的Amicon column, 是可以concentrate到想要的浓度，
: 但是回收率只有60%左右。大概很多protein粘在了膜上。因为最后的蛋白量对我很关键
: ，请问有没有什么方法可以达到80-90%的回收率？
: 十分感谢！

s*s2014-04-30 07:04

3 楼

谢谢你的回答。我的蛋白是要去做proteomics, 就是load 2D gel。所以变性无所谓。
小的蛋白本身在2D gel上也会跑掉，过amicon会丢失倒是无所谓。