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请教如何排除RNA sample 中的genomic DNA contamination
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请教如何排除RNA sample 中的genomic DNA contamination# Biology - 生物学
a*n
1
我以前在国内大学教书时,出试题考学生都是先出几道名词解释,再根据学科内容重点
,出十来道计算题和问答题,把试题从易到难排列一下,一份试卷就整出来了。直到进
入一家美国考试公司混饭吃,才知道考试是一门学科,出试题和组合试卷有诸多讲究。
除了大学和研究生入学考试外,在美国几乎各个行业都有资格考试。除了学历,获得资
格证书同样很重要。有了资格证书,工作好找,工资也高些,职务升迁快。像医生这样
的职业,就是有医学博士学位,没有考得医生执业资格证书,也不能开业。通过资格考
试成了多数专业人士必须跨越的门槛。本人自己在美读书时经过各类入学和课程考试,
以及博士资格考试和答辩,也参加并通过了两次专业证书考试,加上选题考过数万人次
,所以觉得可以在这里根据记忆胡诌几句。离开考试行业已久,记忆错误的地方,请行
家指正。
和中国不同,美国政府不管考试,实施考试的都是私立公司。设计和执行考试在美国不
但成为一门学科,还成为一个独特的产业。有声誉的考试公司生意兴隆,利润非常可观
。各种新的考试公司不断涌现,争夺考试行业大饼,竞争激烈。
美国专业资格考试公司赚的大钱其实不是每门200美元左右的考试费,而是考过后每年
要交的会员费,和继续业务学习的培训费。不交会员费或不修满每年三个学分的业务提
高再教育,考试公司可以吊销证书,并从网上雇主查询数据库将证书获得者除名。除非
退休或改行,没人敢这样做。因为有些证书并不容易考得,需要大量复习。有些考生甚
至考了20多次才通过。
笨人从前在那家面向全球的考试公司工作时,负责试题统计分析、筛选、试卷组建。对
从出题、选题、组成试卷、实施考试、评分到证书发放整个流程,有着相当程度的了解
。现在简单介绍一下出题、选题和组题。
一个考试公司能否生存和盈利,取决因素是信誉。而信誉是由试题决定的。试题质量好
,就能考出考生的真正水平,就会得到业内专家和雇人单位认可,自然不愁没人来交钱
参加考试。相反,如果用人单位发现持有某公司专业证书的员工的工作能力很差,不能
胜任,消息传出去,那家考试公司倒闭就指日可待了。
显然,试题质量攸关考试公司生死存亡。试题实际上也是考试公司最重要的财产。笨人
所在公司的每道试题,其成本价是200美元左右。
决定试题质量有两个最重要的统计参数。一是可靠性。这是指同一道题,测量两个水平
相同的人,结果是接近的。比如一万考生在几年考试里做了这道题,通过考试的大多做
对,不通过的大多做错了,那么这道题就有很好的可靠性。
光有可靠性还不行。像一把秤每次称同一块铁饼都是50斤,重复性很好很可靠,但那块
铁实际上只有45斤,那把秤每次都多显示了5斤。所以好试题的第二个参数就是效度,
指的是测量准确度,也就是测出想测之物的指标吻合度。影响效度的因素包括试题难度
,太难的题所有人都做错,分辨度为零;太容易的题大家都做对,分辨度也是零。第二
个因素是跑题。第三个影响因素是试题用语不明晰、有歧义、正确选项不唯一。现在的
标准化考试多是选择题,除了一个正确选项,其它三个必须有接近的干扰度,否则试题
效度也大打折扣。
考试公司征集试题时,在寒暑假、春假邀请专业行家、大学教授、资深的实际工作人员
,到旅游胜地的五星级酒店,好菜好酒招待,全家旅费报销。让出题人员吃饱喝足玩够
之后,按考试章节把他们分成若干出题组,每个考试内容至少出20多个不同考题。出题
会议一般分两节,先修改或投票淘汰用过但可靠性、效度不符合规定的试题。比如某道
题三个干扰项中有一个很少有考生选过,这个干扰度低的就必须改写。修改完考题后接
着就是添加新题,决定退休一部分用过多次的老题。出题和修改题目非常费时费力,经
常看到出题者之间争论不休,脸红耳赤。一个出题组有时候一天弄不出几道题。所以出
题费高昂,是考试公司最大的成本支出。
有了好的和足够多的试题后,就可以组建四到八份平行试卷,以保证补考的不会碰到考
过的试卷。组建平行试卷时要保证每一份都有接近的效度、难度系数和可靠性。考试时
,计算机随机分配平行试卷给考生。平行试卷设计的原则是,一个考生能考过A试卷,
就能考过B、C、D、E、F等试卷,而且总分应该非常接近。
组建试卷时,每份试卷都会随机塞入20%左右的新试题。这些新题不参加评分,也不告
知考生。测试新题的目的是获得这些新题的可靠性、效度和难度参数。不合规定指标的
,下次会议根据测试参数加以修改。那些测试合格的新题,则放进题库作为备用题。
所有考题和试卷都要经过大量的测试、统计分析、修改提高、使用的反复循环,直到退
休。美式考试所以靠谱,就是因为考题都通过大量统计分析,和不断改善提高之故。
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l*1
2
检查房子时候没发现,现在房子被水淹了, 被淹地方没看到, 到是看厕所发现了. 大家
帮着看看是吗?
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c*7
3
哦也
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p*y
4
夜里要跳到床上喵喵叫,直到人摸他,摸几分钟后就开始舔被,如果睡衣是棉质的就舔
睡衣,一边拿爪子踩,一边舔。。。
他从一个月进家门到现在五个多月了,还没有停止的迹象,要怎么样戒掉他这个习惯让
人睡个囫囵觉呀
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r*s
5
用 PLAYBOOK 快一年了,琢磨这个版上这个是冷门。
问个问题: 有没有上 MITBBS 的 app for playbook 呀? 谢谢!
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s*y
6
已经用nanodrop check 了, A260/280 是2.11, A260/230 是2.32
查了一下,A260/280对DNA是1.8, RNA是2.0, 是不是表示我的sample是OK呢?
有没有什么别的方法能快速验证一下,下游是要去做RNA seq的,谢谢!
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s*d
7
这个属于BSO贴,拖出去,打~~
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j*t
8
DNAse treatment试了吗?
另外,A260/280 的读数2.11挺正常的。
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Q*A
9
en打~

【在 s*****d 的大作中提到】
: 这个属于BSO贴,拖出去,打~~
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s*y
10
on column treat 了,
但是我上次把那个DNAse powder 溶解后,忘记放到-20 了,在4度放了近四周,虽然说
明书说可以放到六周,我还是很不放心,用的是purelink的 DNAse set。
主要是tissue sample太宝贵了,错过了要等好久,整个人都变得paranoid了:(

【在 j****t 的大作中提到】
: DNAse treatment试了吗?
: 另外,A260/280 的读数2.11挺正常的。

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h*d
11
我一直想知道猫为啥喜欢踩被子,Coco特别喜欢踩,很好玩。Fifi就不踩
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j*t
12
如不放心就买个新的试剂盒,重新做一遍DNAse treatment.
你也可以设计一个跨内含子的引物,用你的cDNA做一个PCR看看是不是有大小两条带。
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b*a
13
踩奶呢,这是爽的表现。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 夜里要跳到床上喵喵叫,直到人摸他,摸几分钟后就开始舔被,如果睡衣是棉质的就舔
: 睡衣,一边拿爪子踩,一边舔。。。
: 他从一个月进家门到现在五个多月了,还没有停止的迹象,要怎么样戒掉他这个习惯让
: 人睡个囫囵觉呀

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Z*5
14
用过Qiagen提RNA的kit,其中有一步是在柱子上加DNase处理的,但是后来做RT-验证发
现效果一点都不好。
后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理,RT-验证几乎没有DNA污染了。
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c*e
15
bso.....
那个是踩奶,喜欢你才踩你
我家小黛从来不踩,我家小宝只踩小黛,55555555555

【在 p*******y 的大作中提到】
: 夜里要跳到床上喵喵叫,直到人摸他,摸几分钟后就开始舔被,如果睡衣是棉质的就舔
: 睡衣,一边拿爪子踩,一边舔。。。
: 他从一个月进家门到现在五个多月了,还没有停止的迹象,要怎么样戒掉他这个习惯让
: 人睡个囫囵觉呀

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n*l
16
我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现
genomic dna污染的?
另外,现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment,
不知道怎么样。

【在 Z******5 的大作中提到】
: 用过Qiagen提RNA的kit,其中有一步是在柱子上加DNase处理的,但是后来做RT-验证发
: 现效果一点都不好。
: 后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理,RT-验证几乎没有DNA污染了。

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p*y
17
我知道是他爽,关键是他爽之前非得叫,非得我们摸,摸够了才开始踩,人就没法睡囫囵觉了,唔
不要把我拖出去打,我不是BSO,伊连让我抱都不让我抱呢,可晚上还非得来踩。。。
他会一直踩下去,还是大了就好了呢

【在 b******a 的大作中提到】
: 踩奶呢,这是爽的表现。
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Z*5
18
反转录cDNA的时候,做一个对照,就是其它条件都一样,只是不加逆转录酶。 然后PCR
跑胶看条带。或者直接qPCR看曲线。

【在 n*******l 的大作中提到】
: 我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现
: genomic dna污染的?
: 另外,现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment,
: 不知道怎么样。

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p*y
19
我们小猫自来熟的很,有兄弟的时候踩兄弟,没兄弟踩猫爸,见猫妈第二天就开始踩猫
妈。。。

【在 c*******e 的大作中提到】
: bso.....
: 那个是踩奶,喜欢你才踩你
: 我家小黛从来不踩,我家小宝只踩小黛,55555555555

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b*a
20
慢慢生活习惯会改,以后可能会变得你什么时候起,他什么时候起。也有可能就这么一
直踩下去了,看猫吧。我家大黄们的习惯就几年如一日。我家笨笨的习惯就恨不得一星
期一变,甚至随着心情的改变随时调整。

囫囵觉了,唔

【在 p*******y 的大作中提到】
: 我知道是他爽,关键是他爽之前非得叫,非得我们摸,摸够了才开始踩,人就没法睡囫囵觉了,唔
: 不要把我拖出去打,我不是BSO,伊连让我抱都不让我抱呢,可晚上还非得来踩。。。
: 他会一直踩下去,还是大了就好了呢

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h*o
21
我家猫喜欢在我身上走来走去。。。
那叫一个疼。。
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m*8
22
俺在床上脚底下,放了一小块给他们专用的毯子,他们最喜欢的有毛的软软的那种,把他们抱到那上面
,他们就知道这是他们的地盘。以后他们就在那上面踩了, 但偶尔也会来我胸上 踩。
沙发上我也放了块ikea的小羊皮,他们有时也去那里踩。不过你的宝贝还小,需要妈妈的抚爱,被你抚爱够了,他可能就会去他喜欢的毯子那里了。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 夜里要跳到床上喵喵叫,直到人摸他,摸几分钟后就开始舔被,如果睡衣是棉质的就舔
: 睡衣,一边拿爪子踩,一边舔。。。
: 他从一个月进家门到现在五个多月了,还没有停止的迹象,要怎么样戒掉他这个习惯让
: 人睡个囫囵觉呀

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p*y
23
他们喜欢软软的吗?我买了软软的猫床,他不敢进,囧。。。
我其实不介意他在床上睡,就是晚上叫,要把我叫醒摸他,比较困扰我:((((

把他们抱到那上面
妈的抚爱,被你抚爱够了,他可能就会去他喜欢的毯子那里了。

【在 m**********8 的大作中提到】
: 俺在床上脚底下,放了一小块给他们专用的毯子,他们最喜欢的有毛的软软的那种,把他们抱到那上面
: ,他们就知道这是他们的地盘。以后他们就在那上面踩了, 但偶尔也会来我胸上 踩。
: 沙发上我也放了块ikea的小羊皮,他们有时也去那里踩。不过你的宝贝还小,需要妈妈的抚爱,被你抚爱够了,他可能就会去他喜欢的毯子那里了。

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w*s
24
请用任贤齐的曲子唱:
有兄弟今生踩兄弟,没兄弟立刻踩daddy
我家的小猫自来熟,踩完了爹地换妈咪
妈妈的歌飘过来飘过去 猫罐头的回音里
好吃的猫粮每一天每一夜 祝妈咪every day pretty

【在 p*******y 的大作中提到】
: 我们小猫自来熟的很,有兄弟的时候踩兄弟,没兄弟踩猫爸,见猫妈第二天就开始踩猫
: 妈。。。

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x*n
25
怎么没有人认真回答问题呀。
我说把, 就撒把盐在你猫猫舔的地方。这个不信不灵。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 夜里要跳到床上喵喵叫,直到人摸他,摸几分钟后就开始舔被,如果睡衣是棉质的就舔
: 睡衣,一边拿爪子踩,一边舔。。。
: 他从一个月进家门到现在五个多月了,还没有停止的迹象,要怎么样戒掉他这个习惯让
: 人睡个囫囵觉呀

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p*y
26
才人,谢!

【在 w***s 的大作中提到】
: 请用任贤齐的曲子唱:
: 有兄弟今生踩兄弟,没兄弟立刻踩daddy
: 我家的小猫自来熟,踩完了爹地换妈咪
: 妈妈的歌飘过来飘过去 猫罐头的回音里
: 好吃的猫粮每一天每一夜 祝妈咪every day pretty

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p*y
27
这个这个,猫喜欢舔盐吧,不会害了他吗

【在 x******n 的大作中提到】
: 怎么没有人认真回答问题呀。
: 我说把, 就撒把盐在你猫猫舔的地方。这个不信不灵。

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b*a
28
馊主意。猫根本就不在乎盐不盐的问题。

【在 x******n 的大作中提到】
: 怎么没有人认真回答问题呀。
: 我说把, 就撒把盐在你猫猫舔的地方。这个不信不灵。

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b*a
29
其实吧,我觉得唯一的办法就是你别理他,就算醒了,也别摸他。有那么几天,估计他
夜里就不找你了。不过,想想可能小家伙会比较伤心吧。我家姑娘也这样,半夜三更的
过来用毛爪子摸我脸,我要是没醒就开始拍我嘴。我一开始也是pet她。后来天冷了,
实在是不想把手拿出被子,她这么拍几天看没效果,现在就不拍我了,但是也不来找我
了。桑心死我了。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 这个这个,猫喜欢舔盐吧,不会害了他吗
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p*y
30
不理他呀,那得多强的定力啊:D
伊就贴着你耳朵叫,叫的巨可怜。。。
有没有个理论说睡觉4个钟头一个周期效果最好?

【在 b******a 的大作中提到】
: 其实吧,我觉得唯一的办法就是你别理他,就算醒了,也别摸他。有那么几天,估计他
: 夜里就不找你了。不过,想想可能小家伙会比较伤心吧。我家姑娘也这样,半夜三更的
: 过来用毛爪子摸我脸,我要是没醒就开始拍我嘴。我一开始也是pet她。后来天冷了,
: 实在是不想把手拿出被子,她这么拍几天看没效果,现在就不拍我了,但是也不来找我
: 了。桑心死我了。

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b*a
31
人?两个小时一周期吧。不确定啊。
哈哈,你家小猫跟我家笨笨一样。我家笨笨以前夜里要吃一顿,而且笨笨自己不太会吃
饭,要我一粒一粒放到他嘴里他才能吃。我就这么喂了他好3-4年,天天夜里4-5点起来
喂他。后来也是在这里说起来,大家说这样太辛苦了,不能这么惯着他,然后我就顶住
压力,无论他怎么叫,我就是不起不喂,慢慢的他夜里这顿就终于免了。不知道啊,我
家笨笨平常看起来挺乖一孩子,要起饭来那叫声啊,听得人肝直哆嗦。而且,刚开始给
他改这毛病的时候,他是从4-5点开始,每半个小时上来叫个5-10分钟,那段日子啊,
不堪回首啊。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 不理他呀,那得多强的定力啊:D
: 伊就贴着你耳朵叫,叫的巨可怜。。。
: 有没有个理论说睡觉4个钟头一个周期效果最好?

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x*n
32
猫喜欢舔盐? I hope not. I didn't try this at home myself.

【在 p*******y 的大作中提到】
: 这个这个,猫喜欢舔盐吧,不会害了他吗
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p*y
33
妈呀,笨笨威武~~~~~~
那我还是够幸运了,我家小猫叫醒我们也不用起,摸摸他就行了,以前有个myth,睡囫
囵觉才睡的好,偶决定接受那个每90-100分钟一个睡眠周期,每夜有四五个周期的理论
了,这样看起来,小猫顶多打断一个深睡期,对睡眠没实质影响的。
心理暗示很重要。。。。。。

【在 b******a 的大作中提到】
: 人?两个小时一周期吧。不确定啊。
: 哈哈,你家小猫跟我家笨笨一样。我家笨笨以前夜里要吃一顿,而且笨笨自己不太会吃
: 饭,要我一粒一粒放到他嘴里他才能吃。我就这么喂了他好3-4年,天天夜里4-5点起来
: 喂他。后来也是在这里说起来,大家说这样太辛苦了,不能这么惯着他,然后我就顶住
: 压力,无论他怎么叫,我就是不起不喂,慢慢的他夜里这顿就终于免了。不知道啊,我
: 家笨笨平常看起来挺乖一孩子,要起饭来那叫声啊,听得人肝直哆嗦。而且,刚开始给
: 他改这毛病的时候,他是从4-5点开始,每半个小时上来叫个5-10分钟,那段日子啊,
: 不堪回首啊。

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p*y
34
俺也没给他舔过:P 不过他喜欢吃咸的有滋味的东西啊
给他试盐,不如给他试辣椒粉
我太坏了 LOL
开玩笑,楼下切勿模仿

【在 x******n 的大作中提到】
: 猫喜欢舔盐? I hope not. I didn't try this at home myself.
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p*y
35
不知道有没有猫用充气娃娃 LOL

【在 p*******y 的大作中提到】
: 妈呀,笨笨威武~~~~~~
: 那我还是够幸运了,我家小猫叫醒我们也不用起,摸摸他就行了,以前有个myth,睡囫
: 囵觉才睡的好,偶决定接受那个每90-100分钟一个睡眠周期,每夜有四五个周期的理论
: 了,这样看起来,小猫顶多打断一个深睡期,对睡眠没实质影响的。
: 心理暗示很重要。。。。。。

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b*a
36
汗,我看第一句还以为你说俺威武,看了第二遍才发现是笨笨威武。。。
没错,没错,心理暗示很重要。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 妈呀,笨笨威武~~~~~~
: 那我还是够幸运了,我家小猫叫醒我们也不用起,摸摸他就行了,以前有个myth,睡囫
: 囵觉才睡的好,偶决定接受那个每90-100分钟一个睡眠周期,每夜有四五个周期的理论
: 了,这样看起来,小猫顶多打断一个深睡期,对睡眠没实质影响的。
: 心理暗示很重要。。。。。。

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b*a
37
猫狗好像对辣椒也没有感觉。上次谁家打了一瓶辣椒酱,然后狗冲过去给舔了来着

【在 p*******y 的大作中提到】
: 俺也没给他舔过:P 不过他喜欢吃咸的有滋味的东西啊
: 给他试盐,不如给他试辣椒粉
: 我太坏了 LOL
: 开玩笑,楼下切勿模仿

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m*8
38
应该不是不敢,可能不想自己睡,觉得太孤单,还是小奶猫,需要妈妈的爱抚。
我的猫是家里没人的时候它们就睡自己的窝,晚上还是都在床上和我睡,基本都是在我
脚那边,偶尔也挤在我身边,我都习惯了。有时候它们一夜都玩,不来找我睡我还别扭
呢。哈哈哈!
那个毛茸茸的毯子哪都有卖的,很便宜,costco有毛长的,12刀一个(见照片1)。
ikea有短毛的,好像是20多块一个。材料都是Ployester。 猫都喜欢。

【在 p*******y 的大作中提到】
: 他们喜欢软软的吗?我买了软软的猫床,他不敢进,囧。。。
: 我其实不介意他在床上睡,就是晚上叫,要把我叫醒摸他,比较困扰我:((((
:
: 把他们抱到那上面
: 妈的抚爱,被你抚爱够了,他可能就会去他喜欢的毯子那里了。

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