T*J
2 楼
修mixer，最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease，可怜我n多修车用
的grease不能用在做食物的机器上。
的grease不能用在做食物的机器上。
r*n
3 楼
有没有类似Sony DPTS1 Digital Paper System这种东西？
K*g
4 楼
addgene说用直接anneal两个长引物，然后用phusion生成双链
请问高手们给个protocol吧。
请问高手们给个protocol吧。
t*e
5 楼
Walmart
or Chinatown
【在 d**********9 的大作中提到】
: 求推荐4口之家用的蒸馒头的锅，多谢！
or Chinatown
【在 d**********9 的大作中提到】
: 求推荐4口之家用的蒸馒头的锅，多谢！
b*a
6 楼
food grade lubricants
walmart
【在 T**J 的大作中提到】
: 修mixer，最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease，可怜我n多修车用
: 的grease不能用在做食物的机器上。
walmart
【在 T**J 的大作中提到】
: 修mixer，最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease，可怜我n多修车用
: 的grease不能用在做食物的机器上。
t*u
7 楼
Onyx Boox Max
【在 r**********n 的大作中提到】
: 有没有类似Sony DPTS1 Digital Paper System这种东西？
【在 r**********n 的大作中提到】
: 有没有类似Sony DPTS1 Digital Paper System这种东西？
C*n
8 楼
由于要在不同的物种里试，Addgene的载体对我来说，就是Cas9的序列和gRNA的
tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的，设计了一个很长的引物，直接把20bp的gRNA
加在upstream primer上。
tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的，设计了一个很长的引物，直接把20bp的gRNA
加在upstream primer上。
d*i
9 楼
几口之家不重要，关键看战斗力。
一般不锈钢三层的足够了，不行就多蒸几锅。
一般不锈钢三层的足够了，不行就多蒸几锅。
e*t
10 楼
猪油行不？见过超市里卖的
【在 T**J 的大作中提到】
: 修mixer，最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease，可怜我n多修车用
: 的grease不能用在做食物的机器上。
【在 T**J 的大作中提到】
: 修mixer，最后装的时候发现齿轮组的润滑需要food grade grease，可怜我n多修车用
: 的grease不能用在做食物的机器上。
b*9
11 楼
看你是用什么载体，有直接将oligo退火然后GoldenGate克隆的（比如张峰lab的）；也
有把整个U6 expression cassette 通过overlap PCR 或者 Gibson 拼起来插到载体里
的（比如Church lab）
有把整个U6 expression cassette 通过overlap PCR 或者 Gibson 拼起来插到载体里
的（比如Church lab）
d*2
12 楼
估计mixer发臭了。
【在 e********t 的大作中提到】
: 猪油行不？见过超市里卖的
K*g
13 楼
I want use the church's gRNA cloning vector
http://www.addgene.org/4184
thanks
http://www.addgene.org/4184
thanks
d*2
14 楼
到local restaurant supply store.
K*g
15 楼
so ask for the anneal and phusion extension protocol, thanks
gRNA
【在 C****n 的大作中提到】
: 由于要在不同的物种里试，Addgene的载体对我来说，就是Cas9的序列和gRNA的
: tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的，设计了一个很长的引物，直接把20bp的gRNA
: 加在upstream primer上。
gRNA
【在 C****n 的大作中提到】
: 由于要在不同的物种里试，Addgene的载体对我来说，就是Cas9的序列和gRNA的
: tracrRNA部分可以用。我是直接用PCR的，设计了一个很长的引物，直接把20bp的gRNA
: 加在upstream primer上。
T*J
16 楼
无
【在 b*a 的大作中提到】
: food grade lubricants
: walmart
【在 b*a 的大作中提到】
: food grade lubricants
: walmart
l*y
17 楼
church的这个质粒克隆很麻烦，还不如直接gBlock合成
其实你可以去搞一个zhang feng的质粒把gRNA casette弄出来随便找个质粒一插，然后
用他的protocol克隆
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
其实你可以去搞一个zhang feng的质粒把gRNA casette弄出来随便找个质粒一插，然后
用他的protocol克隆
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
T*J
18 楼
谢谢，直接online买了。
【在 d****2 的大作中提到】
: 到local restaurant supply store.
【在 d****2 的大作中提到】
: 到local restaurant supply store.
b*9
19 楼
1. Gibson assemble,这个就是设计引物的时候两个PCR片段之间（U6 expression
cassette可以分成一个固定的，一个包含 target sequence的可变的），PCR片段和载
体之间要有overlap。
2.ovrelap PCR：两个PCR片段之间有overlap，先单独扩，分别扩增完之后再用Taq酶拼
起来，记得加3%DMSO。回收完了直接连T载体。
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
cassette可以分成一个固定的，一个包含 target sequence的可变的），PCR片段和载
体之间要有overlap。
2.ovrelap PCR：两个PCR片段之间有overlap，先单独扩，分别扩增完之后再用Taq酶拼
起来，记得加3%DMSO。回收完了直接连T载体。
【在 K********g 的大作中提到】
: I want use the church's gRNA cloning vector
: http://www.addgene.org/4184
: thanks
m*z
20 楼
addgene上有protocol啊。
【在 K********g 的大作中提到】
: so ask for the anneal and phusion extension protocol, thanks
:
: gRNA
【在 K********g 的大作中提到】
: so ask for the anneal and phusion extension protocol, thanks
:
: gRNA
相关阅读
SBIG: Channelswuwu...被训了!!SBIG: Aquaporin, the water channelRe: purpose of DMSO in cell freezingRe: orthologRe: 请教关于CRYSALIZATIONThe club Re: should we change board style?Re: About blastshould we change board style?post-doc fellowship -prepare applicationRe: HELP: how to select RNAi target sequjiushi Re: 先不要早下结论Re: 如此博士后？？my experience with Biology[转载] 中国农民的儿子王磊 23日喜获世界科学大奖SBIG: ChannelsRe: 谁能给写个抑癌基因的小综述？Re: an earth questionRe: CaP transfectionRe: 问个问题～关于基因上游区和蛋白质binding数据库的Re: 基因功能研究方法疑问