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求推荐验证过的siRNA
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求推荐验证过的siRNA# Biology - 生物学
r*9
1
【 以下文字转载自 Working 讨论区 】
发信人: rapala09 (bassorcrappie), 信区: Working
标 题: 求建议(negotiate),一个小offer
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Aug 21 21:48:18 2011, 美东)
拿到加州一个小公司的offer,onsite完了之后就回来了, 周五给对方打电话,对方说
下午会给我发offer letter, 稍微谈了一下细节, 工资很低,略低于网上查到的
range最底线; 但是当时电话聊时,好像说是提供housing, 这工作是现在加州几个月
,然后背派到NY的一个城市分部。我当时想想虽然base salary很低,但是提供housing
,也算个中等偏下吧,等具体offer来了再商量。
结果周五没收到,因为目前只有一个offer,心里有点急, 周六发了个email过去,问
进展如何,结果别人发个email过来说要我尽快做决定; 我以为对方周五没发,是心里
有疑虑,然后现在说个要我尽快做决定,是要我同意了加入公司再给我发offer,就赶
紧发信说同意接收offer。 实际上我是想说,你发给我offer了,我会接收的。 结果发
完一看,附件里头有offer letter。 晕死。
再看具体的,结果还是很低的数目,其它的什么福利都很少,就医疗保险说公司会付,
假期提了一下, 什么relocation, sign on bonus,啥都没有写。
发信过去问, 结果说就一个1500的relocation, 在加州的一两个月提供housing, NY
的就不提供了, 那这样一来,我的offer实在是太低了,应该是公司最底线。
公司的VP,也就是管招人的那位,(公司很小,VP直接领导engineer),在当时面试和
电话谈初步offer的时候,不断强调,一开始不会给多高,开始pay 低,以后根据表现
来酌情调整,还给我举了一些公司之前招的员工的例子,说开始都给的很低。
想问问大家,我愚蠢的回了 accept offer,收到对方回信后,试图要点relocation,
sign on bonus, 结果 只讨来 1500, 而且还得知 不负责housing; 实在觉得有点低
; 我还想和对方谈谈,说我没有弄清楚NY不提供housing (misunderstand), 目前
的offer有点低,能不能再提高点, 大家觉得我在negotiate 一下,妥当吗?
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V*t
2
需要设计几个针对mouse的siRNA
自己随便设计,效率高的几率小啊,有没有验证过的数据库可以直接查的?
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r*9
3
顶!!
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C*h
4
有微友私信问设计siRNA、shRNA和gRNA. 今天先说siRNA和shRNA吧。
一般我是take advantage of sigma. 他们有现成的shRNA产品,而且反响很好。
当然了,土豪可以自己去Dharmacon订购siRNA, 或者在sigma订购shRNA,甚至是包装好
的病毒。
1.第一步去sigma英文网站,一定要是英文网站
http://www.sigmaaldrich.com/united-states.html
#华夏小奇说实验的事#设计siRNA和shRNA
2. 搜索你感兴趣的基因。如TNFR, 出来结果之后点击shRNA(下图黑色剪头所示)
插播广告 订购基因敲除小鼠请访问公司网站(2-4个月,小鼠转基因、敲除敲入、条件
性敲除)
#华夏小奇说实验的事#设计siRNA和shRNA
3. 点击进入下个页面,点击pricing,会出现每个shRNA的hairpin的序列。
如下面的序列,介于“CCGG”和"CTCGAG"之间的,就是shRNA的目标序列。
可以根据这个序列设计siRNA和shRNA(自己合成hairpin, 退火连入pLKO or Tet-pLKO就
可以做knockdown和inducible knockdown).
CCGGCACGACTTCATCCACGGATATCTCGAGATATCCGTGGATGAAGTCGTGTTTTTG
http://blog.sina.com.cn/s/blog_12d8810790102uyry.html

【在 V******t 的大作中提到】
: 需要设计几个针对mouse的siRNA
: 自己随便设计,效率高的几率小啊,有没有验证过的数据库可以直接查的?

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v*n
5
有别的就干掉他们 没有就忍了。

housing


【在 r******9 的大作中提到】
: 顶!!
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V*t
6
谢谢了
请问overhang 怎么选啊
是dtdt 还是别的?

【在 C*********h 的大作中提到】
: 有微友私信问设计siRNA、shRNA和gRNA. 今天先说siRNA和shRNA吧。
: 一般我是take advantage of sigma. 他们有现成的shRNA产品,而且反响很好。
: 当然了,土豪可以自己去Dharmacon订购siRNA, 或者在sigma订购shRNA,甚至是包装好
: 的病毒。
: 1.第一步去sigma英文网站,一定要是英文网站
: http://www.sigmaaldrich.com/united-states.html
: #华夏小奇说实验的事#设计siRNA和shRNA
: 2. 搜索你感兴趣的基因。如TNFR, 出来结果之后点击shRNA(下图黑色剪头所示)
: 插播广告 订购基因敲除小鼠请访问公司网站(2-4个月,小鼠转基因、敲除敲入、条件
: 性敲除)

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r*9
7
算了,听老大的,忍了,不negotiate了!

【在 v***n 的大作中提到】
: 有别的就干掉他们 没有就忍了。
:
: housing
: 问

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B*o
8
直接去dharmacon order它们的smart pool不就完了,自己设计费那劲不讨好哦

【在 V******t 的大作中提到】
: 谢谢了
: 请问overhang 怎么选啊
: 是dtdt 还是别的?

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G*7
9
As VP said, start low. Maybe, after they see your performance, they will
raise it.
Just finished watching 'Yi-Jing'. Learned a lot from it. I recommend you
watching the 15th. Here is the website. I think you might be able to know
what to do after finishing the video.
http://bbs.wenxuecity.com/inv-invest/347766.html
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x*e
10
其实是TRC(Then RNAi Consortium)的东西放在Sigma了,http://www.broadinstitute.org/rnai/public/。 我一般google: "shRNA+gene name+TRC" 能找到别人文章验证过的shRNA, 在到前面提到网站根据TRC ID找到需要合成的引物序列,根据addgene pLKO cloning protocol很快就做好了。当然能从Sigma买到细菌更方便了.

【在 C*********h 的大作中提到】
: 有微友私信问设计siRNA、shRNA和gRNA. 今天先说siRNA和shRNA吧。
: 一般我是take advantage of sigma. 他们有现成的shRNA产品,而且反响很好。
: 当然了,土豪可以自己去Dharmacon订购siRNA, 或者在sigma订购shRNA,甚至是包装好
: 的病毒。
: 1.第一步去sigma英文网站,一定要是英文网站
: http://www.sigmaaldrich.com/united-states.html
: #华夏小奇说实验的事#设计siRNA和shRNA
: 2. 搜索你感兴趣的基因。如TNFR, 出来结果之后点击shRNA(下图黑色剪头所示)
: 插播广告 订购基因敲除小鼠请访问公司网站(2-4个月,小鼠转基因、敲除敲入、条件
: 性敲除)

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r*9
11
老兄你前面是 汉译英, 后面是做宣传?

you

【在 G**7 的大作中提到】
: As VP said, start low. Maybe, after they see your performance, they will
: raise it.
: Just finished watching 'Yi-Jing'. Learned a lot from it. I recommend you
: watching the 15th. Here is the website. I think you might be able to know
: what to do after finishing the video.
: http://bbs.wenxuecity.com/inv-invest/347766.html

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