有人在293 t中转染crispr来鉴定有效的guide 序列吗 - 未名空间MITBBS历史存档

有人在293 t中转染crispr来鉴定有效的guide 序列吗

有人在293 t中转染crispr来鉴定有效的guide 序列吗# Biology - 生物学

y*r2017-04-19 07:04

1 楼

ap238开头，后面有PS13，PS15，PS37，PS63，PS65等等，看了半天也没看出啥主要区
别来。。。哪位达人给总结比较一下？
http://www.cavalierehoods.com/categories/Under-Cabinet-Range-Ho

b*u2017-04-19 07:04

2 楼

如果有头十个guide, 目的蛋白在293中表达，可否转染然后2-3后检测是否有蛋白knock
down (out)?
还是需要先包病毒，然后在target 细胞中试？

s*r2017-04-19 07:04

3 楼

直接转293，然后做surveyor assay

knock

【在 b*****u 的大作中提到】

: 如果有头十个guide, 目的蛋白在293中表达，可否转染然后2-3后检测是否有蛋白knock
: down (out)?
: 还是需要先包病毒，然后在target 细胞中试？

Z*52017-04-19 07:04

4 楼

在切割位点两侧设计好引物，瞬转后48小时取一点细胞做PCR，然后去测序，第二天就
知道有没有切割了。

b*u2017-04-19 07:04

5 楼

多谢楼上两位！
还有一个问题，老想不明白。有几个guide，发表的文章中，发现在细胞a都能产生
indel。我把这几个guide克隆到另外一个慢病毒载体，然后感染同样的细胞系（不排除
细胞可能不一样), 发现有的产生indel以及蛋白表达明显下调了，而有的一点没有动静。

2024-01-28 18:01

2024-01-09 19:01

2024-01-07 18:01

2024-01-06 18:01

2024-01-06 18:01

2023-12-13 17:12

2023-12-02 07:12

2023-11-26 18:11