H*s
2 楼
就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
盒太贵了。
盒太贵了。
T*i
3 楼
TOPO cloning 很差，也很过时了。
推荐 Cold Fusion。我曾经一次性克隆拼接3个PCR片段，竟然也得到了几个克隆。
Clontech 的Infusion 也是一样原理，不过没用过。Gibson Assembly我试过，不行，
也许是个例。
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
推荐 Cold Fusion。我曾经一次性克隆拼接3个PCR片段，竟然也得到了几个克隆。
Clontech 的Infusion 也是一样原理，不过没用过。Gibson Assembly我试过，不行，
也许是个例。
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
j*n
4 楼
我们的经验貌似gibson assembly最可靠 试剂还可以自己配 省不少钱
3-5个片段 载体20 kb以下 基本没啥问题
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 T****i 的大作中提到】
: TOPO cloning 很差，也很过时了。
: 推荐 Cold Fusion。我曾经一次性克隆拼接3个PCR片段，竟然也得到了几个克隆。
: Clontech 的Infusion 也是一样原理，不过没用过。Gibson Assembly我试过，不行，
: 也许是个例。
3-5个片段 载体20 kb以下 基本没啥问题
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 T****i 的大作中提到】
: TOPO cloning 很差，也很过时了。
: 推荐 Cold Fusion。我曾经一次性克隆拼接3个PCR片段，竟然也得到了几个克隆。
: Clontech 的Infusion 也是一样原理，不过没用过。Gibson Assembly我试过，不行，
: 也许是个例。
E*e
5 楼
CPEC seems working fine, or SLIC should work too.
剂盒太贵了。
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
剂盒太贵了。
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
s*2
6 楼
学习了
H*s
7 楼
谢谢各位了，我不做多片段连接。基本上就是一个片断和一个载体，但是量很大。所以
想找个便宜一点的方法，不需要连接反应的，效率不需要很高，马马虎虎过得去就可以
了，主要是quick and dirty。
想找个便宜一点的方法，不需要连接反应的，效率不需要很高，马马虎虎过得去就可以
了，主要是quick and dirty。
M*g
8 楼
you can try NEB PCR cloning kit. It is very good and efficient.
k*a
9 楼
可以试试genscript的clone ez 挺便宜，效果也不错
w*k
10 楼
你不是在公司工作吗？ topo cloning 这点钱是毛毛雨啊。
要不老纳给你推荐 isothermal ligation, 用了多说好。 算+能量吧
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
要不老纳给你推荐 isothermal ligation, 用了多说好。 算+能量吧
【在 H****s 的大作中提到】
: 就是PCR产物和载体共转化，不需要连接反应的那种。Invitrogen的TOPO cloning试剂
: 盒太贵了。
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