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大家现在构建质粒，都用什么办法？

大家现在构建质粒，都用什么办法？# Biology - 生物学

H*72015-03-01 08:03

1 楼

http://slickdeals.net/?pno=50733&lno=1&afsrc=1
http://media.kohls.com.edgesuite.net/is/image/kohls/271445?
wid=180&hei=180&op_sharpen=1

F*82015-03-01 08:03

2 楼

双酶切连接载体不是很简单吗？难道传统的双酶切连接策略已经过时了吗？
现在有什么更先进的方法？

c*o2015-03-01 08:03

3 楼

好像是练铁砂掌的

H*i2015-03-01 08:03

4 楼

双酶切连接，CPEC，golden gate，Gibson assembly（SLIC SLiCE）
没有过时的方法，只有合适的方法

d*22015-03-01 08:03

5 楼

做burger滴。

s*s2015-03-01 08:03

6 楼

双酶切能用，但是比较大的问题是
1. 要PCR，引入突变，需要反复测序
2. PCR片段，酶切片段，载体片段需要回收，增加许多step
3. 需要考虑读框，片段越多越复杂。
4. 大规模clone （多种片段进入同一载体，或者同一片段进入多种载体）效率低下。
我三五年前经常做克隆。当时常见的方法就是，凡事能拿到gateway的，统统gateway；
需要改造的，改造部分合成，用gibson assembly，然后gateway；改造比较多的，全部
合成。
其实生物破刀说工资少，其实每天人工加overhead也要$200。很想不通有些老板就是
愿意让手下多费一个礼拜反复做酶切测序，也不愿意花钱买，或者用gateway。

【在 F*****8 的大作中提到】