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protein A sepharose问题求助

protein A sepharose问题求助# Biology - 生物学

a*22015-03-29 07:03

1 楼

有一个蛋白，想用protein A sepharose+antibody抓住血液（虫）中该蛋白与其他蛋白
的complex。做了几次，该蛋白结合的很好，但是complex结合到beads上太少（总的
binding capacity应该不是问题）。complex量相对来说本身就比较少，但是还bind不
牢，大部分都被洗脱了。
本想打算先过跟别的柱子，把单体和complex先分开，但是因为过了柱子可能会改变
complex的组成，老板不推荐这么做。
不知道版上各位是否有做过这类实验，求分享经验！谢谢！

f*r2015-03-29 07:03

2 楼

可以试试先把抗体偶联到protein A sapherose beads上。这样可以把beads表面的
抗体浓度做得大，而且antibody和beads解离的问题就不存在了。我经常这么做，感觉
效果好很多。

l*y2015-03-29 07:03

3 楼

可以screen一下不同buffer

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 1.0.2

【在 a******2 的大作中提到】

: 有一个蛋白，想用protein A sepharose+antibody抓住血液（虫）中该蛋白与其他蛋白
: 的complex。做了几次，该蛋白结合的很好，但是complex结合到beads上太少（总的
: binding capacity应该不是问题）。complex量相对来说本身就比较少，但是还bind不
: 牢，大部分都被洗脱了。
: 本想打算先过跟别的柱子，把单体和complex先分开，但是因为过了柱子可能会改变
: complex的组成，老板不推荐这么做。
: 不知道版上各位是否有做过这类实验，求分享经验！谢谢！