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问一个蛋白磷酸化的问题

问一个蛋白磷酸化的问题# Biology - 生物学

v*p2015-04-30 07:04

1 楼

中国文科PhD，美国Master.原在国内出版社工作.现为O1身份，在美从事中、英文出版
工作。
1. 专著一部,文章20多,均为中文,引用40多.
2. 与人合作论文获中国教育部人文社科优秀成果二等奖.
3. 编辑(review)图书过百种。主编图书30种。（中文）
4. 编辑图书获中国"国家图书奖"和"五个一工程奖"各一次.
5. 编辑图书最多的发行过百万册.
6. 获奖图书教育部有一本书介绍.
7. 编辑和主编图书在中国图书评论和人民日报介绍,但没提名.
不知道应该以Scientist还是以Publisher（education）上报，还是以两个上报。
请高人看看有可能吗？

s*s2015-04-30 07:04

2 楼

【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: abcdefghij (abcdefghij), 信区: WaterWorld
标题: 包子问什么专业的master读出来就业好~~~~~~~~~~~~~~
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 21 03:06:16 2011, 美东)
我亲戚在国内小本毕业，工作一两年，出来读master。他在国内成绩不太好，英文不好。所以像physician assistant什么的可能考不上。
他本科CS，但是不喜欢CS，想读mba。但是以他的能力上不了好学校的mba。我觉得烂学校mba毕业没出路。
他可能会想要留在美国。请问什么专业比较适合他，毕业后有一份稳定的工作，收入稳定就好，不用太高，最好清闲一点。我本来很支持他读CS，因为周围CS码工至少能找到工作。但他坚决不要。

L*g2015-04-30 07:04

3 楼

问一个蛋白磷酸化的问题
要从6孔板里提蛋白，检测磷酸化，由于细胞密度比较低，能否直接把大约200 ul的2 X
laemmli buffer加到孔里，迅速刮下来，然后煮5分钟？整个过程很快，从加buffer到
放到heat block上，在1分钟内完成。
请问，这样做可以么？会不会导致磷酸化消失？
如果这样做不好，还有别的什么办法？
谢谢。

d*32015-04-30 07:04

4 楼

能弄到O1签证基本上弄EB1没啥难度了，大概把申请O1 的材料改改就可以用在EB1上面
了，

z*n2015-04-30 07:04

5 楼

修车。

好。所以像physician assistant什么的可能考不上。
学校mba毕业没出路。
稳定就好，不用太高，最好清闲一点。我本来很支持他读CS，因为周围CS码工至少能找
到工作。但他坚决不要。

【在 s***s 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: abcdefghij (abcdefghij), 信区: WaterWorld
: 标题: 包子问什么专业的master读出来就业好~~~~~~~~~~~~~~
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 21 03:06:16 2011, 美东)
: 我亲戚在国内小本毕业，工作一两年，出来读master。他在国内成绩不太好，英文不好。所以像physician assistant什么的可能考不上。
: 他本科CS，但是不喜欢CS，想读mba。但是以他的能力上不了好学校的mba。我觉得烂学校mba毕业没出路。
: 他可能会想要留在美国。请问什么专业比较适合他，毕业后有一份稳定的工作，收入稳定就好，不用太高，最好清闲一点。我本来很支持他读CS，因为周围CS码工至少能找到工作。但他坚决不要。

f*d2015-04-30 07:04

6 楼

这个样做其实对于磷酸化是最好了，这样可以迅速denature所有的蛋白，包括
phosphotase, 从而最大程度上preserve post-translational modification. 只是我
还是会在laemmli buffer里加上protease inhibitors, 煮完之后sonicate, spin down
, bradford，load supernatant.

z*c2015-04-30 07:04

7 楼

女孩我会推荐嫁人，专攻家政。男孩难度比较大。

d*i2015-04-30 07:04

8 楼

X
这个办法我试过，但不是做磷酸化。可能我操作慢，感觉把6个well全部在1min内完成
很困难，很紧张。要不你放在35mm的小dish分别操作？

【在 L*********g 的大作中提到】

: 问一个蛋白磷酸化的问题
: 要从6孔板里提蛋白，检测磷酸化，由于细胞密度比较低，能否直接把大约200 ul的2 X
: laemmli buffer加到孔里，迅速刮下来，然后煮5分钟？整个过程很快，从加buffer到
: 放到heat block上，在1分钟内完成。
: 请问，这样做可以么？会不会导致磷酸化消失？
: 如果这样做不好，还有别的什么办法？
: 谢谢。

c*72015-04-30 07:04

9 楼

读会计呗。。。

v*m2015-04-30 07:04

10 楼

培养基洗洗干净，再加SDS buffer 当然没有问题，体积要调整好。

X

【在 L*********g 的大作中提到】

t*b2015-04-30 07:04

11 楼

re

【在 c*******7 的大作中提到】

: 读会计呗。。。

L*g2015-04-30 07:04

12 楼

我上次做只有2个well，做完第一个再做第二个，每个不超过一分钟。
以后样品多的话就需要用35mm dish了。

【在 d****i 的大作中提到】

:
: X
: 这个办法我试过，但不是做磷酸化。可能我操作慢，感觉把6个well全部在1min内完成
: 很困难，很紧张。要不你放在35mm的小dish分别操作？

x*s2015-04-30 07:04

13 楼

这算讽刺码工吗

L*g2015-04-30 07:04

14 楼

第一次做没洗，主要想节约时间。以后打算还是洗一洗。
洗的期间不会去磷酸化吧？

【在 v**********m 的大作中提到】

: 培养基洗洗干净，再加SDS buffer 当然没有问题，体积要调整好。
:
: X

c*72015-04-30 07:04

15 楼

哦，恍然大悟。。。

【在 x**********s 的大作中提到】

: 这算讽刺码工吗

e*s2015-04-30 07:04

16 楼

我们一般在PBS里面放点Phosphatase 和Protease的inhibitors，再洗。

【在 L*********g 的大作中提到】

: 第一次做没洗，主要想节约时间。以后打算还是洗一洗。
: 洗的期间不会去磷酸化吧？

y*n2015-04-30 07:04

17 楼

会计起薪低啊，3万多。
而且到时办绿卡perm也不容易啊。

【在 c*******7 的大作中提到】

: 读会计呗。。。

r*k2015-04-30 07:04

18 楼

我晕这么讲究。。。我有的时候用有phos-stop和 protease inhibitor的pbs洗，有
的时候就是用普通的ice cold pbs洗。然后加lysis buffer，还超声。。。。。。。
。。感觉要是有的还是有要是没有怎么都没有。。。嘻嘻
而且楼主做磷酸化不用BCA定量吗？其实我觉得磷酸化没那么容易就去掉，不然大家干
嘛还要有lambada phosphotase去磷酸化做control呢