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Streptavidin求问

Streptavidin求问# Biology - 生物学

A*12015-06-21 07:06

1 楼

谢谢！如果不方便直接贴的话，发邮箱也好。
多谢！！

g*s2015-06-21 07:06

2 楼

各位前辈，
小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
这种脱落，谢了！

S*R2015-06-21 07:06

3 楼

加热到这么高稳定，biotin-steptavidin肯定会断吧。

【在 g*****s 的大作中提到】

: 各位前辈，
: 小弟最近用magnetic beads (coated with steptavidin)去pull down biotin ssDNA.
: 在pulldown以后，我有一步工序是加热beads到80摄氏度。我发现streptavidin会从
: bead上脱落下来。我洗过很多遍，都是一样的问题。我想知道有没有什么方法能够阻止
: 这种脱落，谢了！

g*s2015-06-21 07:06

4 楼

我做过实验 biotin-streptavidin断的不多问题是streptavidin被denature了

【在 S*R 的大作中提到】

: 加热到这么高稳定，biotin-steptavidin肯定会断吧。

H*s2015-06-21 07:06

5 楼

你的问题是pull down之后，streptavidin还处在二聚体状态，这是导致streptavidin
在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的，
加热到100度都未必能够导致streptavidin变性（Fidelio GD，1999）。补救措施，在
pull down之后，加入过量biotin，是反应饱和，然后在加热。

【在 g*****s 的大作中提到】

f*e2015-06-21 07:06

6 楼

streptavidin 从 bead 上脱落是不太可能的。
加热 80C 在正常的 buffer 里面，时间不是太长的话应该也没有问题。即使有问题也
是 denature 了，脱落是不应该的。

【在 g*****s 的大作中提到】

g*s2015-06-21 07:06

7 楼

我在pulldown的时候就是加的过饱和的biotin。不过incubation之后，我在常温下洗
了几遍然后加热的。

streptavidin

【在 H****s 的大作中提到】

: 你的问题是pull down之后，streptavidin还处在二聚体状态，这是导致streptavidin
: 在后面的加热过程中变性的原因。形成四聚体的streptavidin应该是非常非常稳定的，
: 加热到100度都未必能够导致streptavidin变性（Fidelio GD，1999）。补救措施，在
: pull down之后，加入过量biotin，是反应饱和，然后在加热。