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同一个蛋白用两种抗体为什么WB条带不重叠
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同一个蛋白用两种抗体为什么WB条带不重叠# Biology - 生物学
t*o
1
我前阵子做了485体检,很多疫苗以前出国的时候都打过了,这次只打了另外两针,具
体名字我也忘了,好像是什么hepatitis A和 hepatitis B,然后也做了TB test,结果
是 positive。收到TB test结果以后,那个移民局指定的医生(Dr. L)让我做两件事
情:
(1)做 chest X-ray,并且把报告发给Dr. L; X-ray的结果是negative,说明不具有
传染性。Dr. L也说了,其实绝大多数中国人都是这样的结果。现在Dr. L已经有了我TB
test和 chest X-ray的结果。
(2) Dr. L同时又给了我另外一个order,约见 Pulmonary and Sleep Consultant里面
的一个医生 Dr. F. 我上个星期二去见了Dr. L,她就简单对我做了一些咨询,建议我
吃6个月的药。我看了P Jiang的博客,说我们中国人不要去吃那个药,我当时也就没有
答应。直到今天,我询问Dr. L那边,有没有收到Dr. F的report,那边还是说没收到。
我想不通的是,为什么这么一个简单的report,一个星期都提交不了?
请问这里做过485体检,并且TB test positive,chest X-ray做过以后,是不是也像我
一样,必须要去见一个consultant的医生,而且也要等很久才能收到报告?只有等这个
consultant的报告提交给移民局指定的医生,我的I-693表才能complete?
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t*n
2
嗯。。
土问,银行可以么。。。
轻拍。。
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g*n
3
我FLAG IP了一个蛋白,然后跑western,用anti FLAG得到blot之后strip membrane,
然后用抗蛋白本身的抗体再probe一遍,结果发现两次得到的条带不重叠 (相差不远,
但很明显不重叠)。FLAG抗体出现两条带,高的带明显,低的带比较浅。但抗蛋白本身
的抗体得到一条带,和低的那条带差不多重叠。
本来是想用两个抗体各检测一遍更严谨点,没想到出了这样的结果反而麻烦了。请问大
家这是怎么回事。
谢谢
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t*o
4
刚才又看了一下PJIANG的博客,里面又说TB test和X-ray做完以后就是等693表格了,
怎么我的这个医生还安排见什么consultant医生呢?是不是想要多赚我一些钱?
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h*n
5
银行可以。一般要提前打电话预约。银行应该有个人专门是负责换外币的。
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C*4
6
首先排除抗体本身的中轻链(~50和25kD), 其次Flag在~35kDa左右能拉和反应对一条
非特异带。很常见。要甄别一下。
[在 geosmin (Little+Monkey) 的大作中提到:]
:我FLAG IP了一个蛋白,然后跑western,用anti FLAG得到blot之后strip membrane,
:然后用抗蛋白本身的抗体再probe一遍,结果发现两次得到的条带不重叠 (相差不远
,但很明显不重叠)。FLAG抗体出现两条带,高的带明显,低的带比较浅。但抗蛋白本
身的抗体得到一条带,和低的那条带差不多重叠。
:...........
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H*7
7
patpat, Bless!
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t*n
8
看了BOA的rate,太可怕了

【在 h******n 的大作中提到】
: 银行可以。一般要提前打电话预约。银行应该有个人专门是负责换外币的。
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t*y
9
应该是蛋白形成二聚体,外源蛋白和内源蛋白一起ip下来,flag的外源蛋白分子量大在
上面,内源蛋白本身在下面。蛋白的抗体可能识别的位点是和flag相连的末端,因为连
上flag反而不能识别外源蛋白了,所以只看到低一点的条带。
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v*b
10
bless
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h*n
11

恩,他们的rate应该是按当日的市场行情。

【在 t******n 的大作中提到】
: 看了BOA的rate,太可怕了
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w*e
12
能仔细解释一下“其次Flag在~35kDa左右能拉和反应对一条非特异带”, 我最近碰到
了这个问题,不知道怎么解释?谢谢

membrane,

【在 C*******4 的大作中提到】
: 首先排除抗体本身的中轻链(~50和25kD), 其次Flag在~35kDa左右能拉和反应对一条
: 非特异带。很常见。要甄别一下。
: [在 geosmin (Little+Monkey) 的大作中提到:]
: :我FLAG IP了一个蛋白,然后跑western,用anti FLAG得到blot之后strip membrane,
: :然后用抗蛋白本身的抗体再probe一遍,结果发现两次得到的条带不重叠 (相差不远
: ,但很明显不重叠)。FLAG抗体出现两条带,高的带明显,低的带比较浅。但抗蛋白本
: 身的抗体得到一条带,和低的那条带差不多重叠。
: :...........

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I*t
13
bless, 祝早拿到693
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g*n
14
谢谢回复。我的蛋白分子量175KDa,所以可以排除轻重链。另外我的蛋白是在null
mutant的背景里在另一条染色体上插入一个FLAG tagged gene,所以应该不是和内源蛋
白行程二聚体。
请问还有其他什么可能吗?谢谢
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b*r
15
我也是TB POSITIVE,有小黄本记录,周五直接做的胸透,周一就拿到报告了。
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e*s
16
这个蛋白有PTM? 如果这个Modification 正好在抗体的识别Epitope 上或者附近,会影
响抗体的识别吧?
把蛋白本身抗体曝光长点,说不定也能看见两条带?这个我倒遇见过,就是抗体对同一
蛋白不同状态有不同的敏感性。

【在 g*****n 的大作中提到】
: 我FLAG IP了一个蛋白,然后跑western,用anti FLAG得到blot之后strip membrane,
: 然后用抗蛋白本身的抗体再probe一遍,结果发现两次得到的条带不重叠 (相差不远,
: 但很明显不重叠)。FLAG抗体出现两条带,高的带明显,低的带比较浅。但抗蛋白本身
: 的抗体得到一条带,和低的那条带差不多重叠。
: 本来是想用两个抗体各检测一遍更严谨点,没想到出了这样的结果反而麻烦了。请问大
: 家这是怎么回事。
: 谢谢

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p*h
17
bless!你最好找中国医生,了解中国国情的,大凡中国人小时候都打了疫苗的,TB的结
果都是positive的。我找了个中国医生,skip TB (save 3 days)直接上胸透,结果当
然是negative的,医生直接签字,封上信封就给我了。
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g*n
18
这个是正解。

【在 e****s 的大作中提到】
: 这个蛋白有PTM? 如果这个Modification 正好在抗体的识别Epitope 上或者附近,会影
: 响抗体的识别吧?
: 把蛋白本身抗体曝光长点,说不定也能看见两条带?这个我倒遇见过,就是抗体对同一
: 蛋白不同状态有不同的敏感性。

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l*d
19
对,找中国医生,皮式,过后两天再去看医生,positive,当时直接上X-ray, X-ray之
后10分钟拿到信封。从开始预约去体检,到拿到信封,共三天。
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m*2
20
还有个终极办法就是把两条带都切了mass spec
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t*o
21
谢谢楼上的祝福。
请问我这种情况下,应该怎么办呢?难道就是等吗?已经打过两次电话催结果了,都快
把自己气哭了。
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C*4
22
可能这个蛋白不稳定,一部分有降解,但FLAG还都在。抗其自己的抗体因为要检测的那
一段缺失了,就不能检测到。试一试抗另一边的抗体。如原来的是抗N端序列,换一个C
端的试一试。
[在 geosmin (Little+Monkey) 的大作中提到:]
:我FLAG IP了一个蛋白,然后跑western,用anti FLAG得到blot之后strip membrane,
:然后用抗蛋白本身的抗体再probe一遍,结果发现两次得到的条带不重叠 (相差不远
,但很明显不重叠)。FLAG抗体出现两条带,高的带明显,低的带比较浅。但抗蛋白本
身的抗体得到一条带,和低的那条带差不多重叠。
:...........
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y*o
23
像楼上的各位,你看能不能换医生从新来一次啊。
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g*n
24
谢谢大家的回复,我试试把曝光时间弄长点看能不能看到两条带。有可能是PTM导致了
其中一条带不容易被我的抗体识别。
可惜我们只有一个自己的抗体,否则可以按照culater94的建议试试两端不同的。
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s*n
25
做blood test,我儿子刚做,直接pass。
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