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慢病毒转两个基因

慢病毒转两个基因# Biology - 生物学

l*12016-03-15 07:03

1 楼

想往一个细胞里转两个基因，除了使用拥有两个启动子的慢病毒表达载体外，由于实验
需要，我更希望把两个基因分别放到两个慢病毒表达载体（puro和hyg）中。现有两个
问题请教：
1）看到有人说先筛puro，再筛hyg，效率会比较高？有这样的理论依据吗？
2）能不能等比例预混两种病毒，MOI(0.5~1）侵染细胞，同时加Hyg和Puro，筛选双转
的细胞系？
感谢各位大神

g*12016-03-15 07:03

2 楼

I think you can use a single promoter in a single vector by link these two
genes with a 2A sequence (google P2A or F2A sequence), so these two genes
will be cleaved automatically after the two genes expression. However, you
cannot use the stop codon for the first gene.
Good luck.

【在 l*********1 的大作中提到】

: 想往一个细胞里转两个基因，除了使用拥有两个启动子的慢病毒表达载体外，由于实验
: 需要，我更希望把两个基因分别放到两个慢病毒表达载体（puro和hyg）中。现有两个
: 问题请教：
: 1）看到有人说先筛puro，再筛hyg，效率会比较高？有这样的理论依据吗？
: 2）能不能等比例预混两种病毒，MOI(0.5~1）侵染细胞，同时加Hyg和Puro，筛选双转
: 的细胞系？
: 感谢各位大神