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附:目前公开声明未能重复实验的部分课题组名单
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附:目前公开声明未能重复实验的部分课题组名单# Biology - 生物学
b*y
1
这年头找工作真费劲儿,我严重怀疑一个坑儿估计有1000个人投简历,我找了好久都没
有系,看来只能继续千老薄厚了
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c*9
2
祝贺新的领导班子成立~ 祝花版像花儿一样红红火火~~
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m*d
3
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: brihand (brihand), 信区: Military
标 题: 北京卵子交易黑市揭秘:名校女生捐卵可获数万元
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Nov 13 17:31:52 2011, 美东)
卫生部明确规定,严禁任何形式的商业化赠卵和供卵行为。本报记者调查,在北京
存在由多家中介操控的“卵子黑市”,形成包括体检、取卵、代孕等多环节的黑色产业
链。他们瞄准北京高校,对北大清华等名校的女生卵子更是出价数万元。中介牟利的背
后,凸显国内针对捐卵、代孕等缺乏完善法律法规和系统社会管理的现状。日前,本报
记者已向北京市卫生局举报相关情况。
一间咖啡厅内,沙发上的10余名年轻女孩,都来自于北京多家知名高校。
不远处坐着客户,多是夫妻俩,仔细打量着每位女孩,他们很挑剔,眼皮是单是双
都很在乎。其中一名身穿皮裘大衣,肩挎LV皮包的女性客户还踱步上前挑选。
虽然相隔几米,客户和女孩之间不能对话,有专人负责传话,内容多为女孩身高、
血型、嗜好等信息。
这是一个交易“卵子”的市场,只是北京乃至全国“卵子黑市”的冰山一角。
“求卵”广告紧盯北京知名高校
北师大“蛋蛋网”,一篇帖子称“求爱心捐卵,营养费2万”。
北京交大论坛,两位“美院毕业生”自称为筹钱上学,3万元出售卵子。
近日,北京多家高校的校园论坛内,记者发现不少求购或求捐“卵子”的广告。
8月3日,“人人网”“北京大学生兼职and实习”栏目,有人发帖“急聘清华北大
女生捐献卵子”。帖子要求,应聘者净身高163cm以上,双眼皮等,薪酬是3万,特别注
明“如果你不是清华北大的学生,就请绕道吧”。
记者通过QQ,联系上名叫“墨墨”的发帖人。“墨墨”传来一份“爱心捐卵”表格
,要求填写多项个人信息,包括身高、血型、经期等,除了远近照各四张外,“还要上
传身份证和学生证复印件。”“墨墨”说,必须确保真实身份。
随后,记者将照片和资料传给“墨墨”。
“客户指定要清华北大的,目前没人愿意要你这学校的。你要捐就等一段时间,也
不会给3万那么高的费用”。“墨墨”在电话中语气有点儿急,“而且这批客户只要双
眼皮的女孩,不要单眼皮的。”
事实上,类似“高薪求购卵子”的中介公司在网上很普遍。按照“墨墨”的说法,
中介只帮助联系捐卵者和有需求的客户,整个过程中双方不会有沟通,捐受双方是“互
盲的”。
“营养费”5千元“捐卵”不签合同
10月中旬,记者随机在网上选择了一家设在北京的捐卵中介。
这家名为“阳光代孕网”的公司,对外的宣传更像是一个慈善机构,“帮助全国各
地不孕不育家庭,同时也帮很多家境困难的女大学生”。
记者与“阳光代孕网”负责人QQ联系,表达捐卵意向后,一名自称李尘(化名)的男
子负责跟记者联系。
李尘介绍,公司成立已有7年,为客户提供一条龙服务,包括代孕、捐卵、联系医
院外,还协助亲子鉴定以及办理出生证等。
记者递交相关资料并初审通过后,李尘介绍“捐卵”的大致流程,见面会上捐卵者
被客户选上将进行体检,一切符合要求后,捐卵者接受催卵针,最后进行取卵手术。
李尘爱把“捐卵者”称为“志愿者”,把“报酬”称为“营养费”,但拒绝签订合
同。
“你作为名校学生,应该知道目前国内做这个是违法的。”李尘说,为保证双方的
安全和隐私,交易都没有合同,中介和捐卵者也从来不签合同。
“营养费”要等到取卵手术时才给,李尘说一般都是5000元,“虽然你是名校的,
但现在北京高校的志愿者不少,这个数不低了”。
记者以急用钱为理由,要求立刻进行下一流程——见客户。李尘说,公司每周六都
会安排一次客户和志愿者的见面会,一般有10余名客户和20多名志愿者。
“购卵”见面会客户挑剔单眼皮
10月22日下午,李尘约记者在海淀区大运村一家肯德基见面。
见面后,李尘带记者来到丽亭华苑酒店一层中央的咖啡厅,“你就坐在这儿,要喝
什么随便点,其他都不用管。”李尘说完走开。
十几分钟内,李尘频繁往返于酒店和附近地铁口,陆续领来四五名20岁左右的女孩。
此时,客户陆续赶到,坐满咖啡厅20多个座位,一些客户只能到二层,寻找靠楼梯
的空位。
记者发现,这些客户多是一对对夫妇,都在40岁以上,有的已年过50。从穿着看,
并不是都很富足,有的甚至可以用朴素形容。他们只是静静地看着对面的女孩们,偶尔
夫妻轻声低语几句。一个多小时的见面会中,记者几乎没有看到一个客户笑过。
每桌客户至少配有一名中介人员,拿着材料,帮客户审视着每一名女孩。他们穿梭
在客户与女孩间传话,内容大多是女孩的身高、血型、嗜好等信息。
客户冷漠的目光下,这些“捐卵志愿者”们少言寡语,无所事事。有的拿出手机把
玩,有的托着下巴发呆。记者曾主动询问身边女孩的学校等信息,但对方很谨慎。
期间,李尘走到记者面前,拿出相机拍照,“留着(照片)给客户再仔细看看。”他
的手机里面都是年轻女孩的照片。
下午3时许,客户和女孩们都陆续离开。“你最大的弱势是单眼皮。”李尘告知记
者,这次未被选上。
记者被选上中介嘱咐“少熬夜”
10月29日下午,记者再次被“阳光代孕网”邀请,参加见面会。
这次是在苏州街新岛咖啡厅,李尘说有20多名“志愿者”和30多个客户参加,每个
客户需交300元活动费才能入场。
这次,记者着重注意中介与客户沟通的内容,发现客户的要求五花八门。
有的客户只要某某高校的学生;有的客户只要皮肤白皙、双眼皮的女孩,希望下一
代样貌好看;有的客户夫妇俩是单眼皮,特意要求单眼皮的女孩;有的客户要求“B型
或者O型血,不要A型的”,避免孩子将来发现非亲生引发麻烦;有的客户家在西北,要
求找南方的女孩,降低下一代子女的近亲婚配概率……
一名中年女子缓步走到记者近处,上下打量约15分钟。她身穿皮裘大衣,肩挎LV皮
包,戴着珍珠项链,抹着暗红的唇膏,始终默而不语。
随后,中年女子将李尘叫到咖啡厅包厢。片刻后,李尘出来再次确认记者的血型、
年龄和籍贯,并将这些信息用短信发出。
“你应该被选上了。”记者身边一名女孩说,“上次我也是这样的情况,后来就被
选中了。”
当日见面会结束,李尘并未透露结果,但再三嘱咐记者,一来例假就通知他。
两天后,李尘突然来电,“你被选上了,来例假马上告诉我,夜里来你也可以发个
短信,我们要给你安排体检。”
李尘还嘱咐,最近几天多喝豆浆等高蛋白食物,少熬夜劳累,以免检查不过关。
中介分工明确带“捐卵”女孩体检
一名曾“捐卵”成功的女孩透露,体检主要包括抽血和阴道B超检查,检测是否有
遗传病,肝功能、卵巢功能是否健全等,其中卵巢功能需要在月经2至5天内进行。
11月1日,记者给李尘发短信,告知可安排体检。李尘回电,安排次日进行,提醒
空腹前去。
11月2日上午9时30分,记者跟随李尘来到建德门附近一家公立医院。
“到医院你就叫张玉。”李尘叮嘱,会有专人帮忙挂号,不需要体检者本人任何证
件。他说,生殖中心的病人有权保护自己隐私,可以用假名字就诊。
到医院后,记者看到该院生殖中心内,已有四五名见面会上的女孩在等待体检。前
来的七八名中介各有分工,一人专门替所有女子挂号,一人守住西侧小门,剩下的几人
陪伴志愿者。
体检内容的确为抽血和阴道B超检查等,体检开始前,记者借故上厕所溜出医院。
几分钟后,记者手机上显示李尘来电,多次被拒接后,他发来短信,希望把事情讲
清楚,并指责“一走了事,很不负责任”。
11月4日,李尘在QQ中留言威胁,“让你在学校呆不下去”,“也不看看你惹的是
谁,我要让你什么都得不到”,还发来四个带血的菜刀图案。
大大的眼睛,白净的皮肤,匀称的身材,笑起来露出浅浅的酒窝,19岁的张婷(化
名)也是参加体检的“捐卵志愿者”。
因为营养不良,她未能通过体检,目前正在家中调养,“中介希望我尽快体检过关
,好进行取卵手术。”
连续注射催卵针后用管取出卵子
“打电话前先发个短信。”李青(化名)说,“我现在有男朋友,提这些事不方便”。
今年20岁的女孩李青,就读于北京一所大学,2010年年初通过一家中介做了捐卵手
术。
她回忆,体检合格后就打催卵针,“连着8天,一天1针”,李青说,打针那几天身
体没什么特别的感觉,就是针扎的胳膊有些痛。
接下来是取卵手术,李青说其实并不需要开刀,只是从阴道插入一根管子,通到卵
巢后把卵子取出,并立即冷冻。李青坦言,手术时很不舒服,但休息了几天就恢复正常
了,手术之前李青拿到营养费。
“现在回想也不后悔。”李青说,但决不能让身边的任何人知道。
中介内部人士透露,卵子取出后采用人工方法让卵细胞和精子在体外受精,并进行
早期胚胎发育,随后植入女方客户或代孕者体内,“国内这方面管得比较严,一般都在
私立医院或是国外的医院操作。”
如今,李青并不知道自己的卵子去了哪里,“我也不想知道,想慢慢淡忘这件事。
”她说。
■ 调查
黑色产业链向国外蔓延
事实上,卫生部对捐卵有明确规定,只能使用试管婴儿治疗周期未用完的卵子。赠
卵者仅限于接受人类辅助生殖治疗周期中取卵的妇女,严禁任何形式的商业化赠卵和供
卵行为。
对此,北大妇产儿童医院妇科副主任医师薛晴解释,简单地说,就是赠卵者本身也
必须是需要做试管婴儿的妇女,而且在相关手术中还有多余的卵子,再经其本人同意,
才能有合法捐赠的卵子。
捐卵者只得客户出价1/10
记者以“捐卵志愿者”身份暗访的同时,还以需要求购卵子和代孕的客户身份,联
系这家“阳光代孕网”的中介公司。
多次QQ联系后,中介公司发来一份名为《相关费用》的文档。文档中对捐卵、代孕
相关费用,以及支付给医院、捐卵志愿者、代孕妈妈的金额,都有明确规定。
该文档显示,一般需要他人捐卵的客户,需要支付中介5万到10万,其中8000元为
中介费,其余4万到8万为支付给捐卵志愿者的补偿,1万左右支付给医院。如果还需代
孕服务,客户需再多支付20万余元,分别给代孕妈妈、医院和中介。
但记者调查,仅购买卵子一项,中介一般支付给捐卵者5000元左右的报酬,医院方
体检、打针、手术等费用8000元,难道中介牟取至少70%以上利益?
“中介支付的费用远不止这些。”从事捐卵、代孕等中介服务8年的王超(化名)说
,由于是违规操作,医院这块风险较大,医院、医生、护士,凡是知情的都需要打点,
“听说医生做这个,一年收入几百万。”王超透露,客户中意在校女大学生,因为她们
年轻,卵子库存量多,质量高。同时,她们能考上大学,各方面素质相对较高,卵子的
基因也比较好,“越是名牌大学,卵子的价格越高”。
中介国内“取卵”国外手术
除了捐卵业务外,“阳光代孕网”中介公司称,应征代孕妈妈可获得14万元的报酬。
“付出跟回报肯定是成正比的。”王超说,代孕妈妈的付出比捐卵志愿者多,所以
报酬自然也高。代孕妈妈每个月都能领到一部分生活费,孩子生下来后一次性支付余款。
王超称,客户并非都是有钱人,需求也不同。有些中介提供更高端的服务,有赴美
代孕套餐,可使用美国代孕妈妈,价格都在百万元以上,包括签证费、捐卵费、代孕费
,孩子出生后的签证,甚至都包括国际驾照等。
王超透露,国内从事捐卵、代孕等业务的中介至少有数百家,工作人员有上万人,
每年服务一万余户家庭。他说,目前国内不孕不育的妇女有10%以上,对卵源的需求很
大,“但在国内获得合法捐赠的卵子几乎是不能的”。
北大妇产儿童医院妇科副主任医师薛晴证实,“使用试管婴儿治疗周期未用完的卵
子”的情况几乎没有,“至少北大妇幼医院没碰到过”。
目前,王超所在的中介公司都在国内寻找卵源和代孕者,然后选在香港、泰国等地
进行捐卵者的取卵手术,以及代孕,“这样可以规避风险”。
■ 争议
大学生捐卵是否有伤害
记者暗访中,中介对每位“捐卵志愿者”都称没有损伤,多名“捐卵”成功志愿者
也表示“身体未见异常”。
北大妇产儿童医院妇科副主任医师薛晴称,“非法取卵手术”和做试管婴儿取卵手
术是一样的,需要用激素类药物抑制卵巢活动,同时将闭锁的卵泡“催熟”,促排卵,
存在引起多种并发症的风险,比如卵巢过度刺激症,引发水肿、腹水、肺栓塞等,严重
的可能致死。此外,一般情况下,女性22岁以后,卵细胞才完全发育成熟,过早或频繁
的“催熟”,还有提早绝经的可能性。
也有专家指出,中介的违规操作,私下里进行手术,一旦发生医疗事故,志愿者很
难维权。同时,由于中介审查等机制相比正规医院十分薄弱,在“捐购”双方互盲的情
况下,存在发生伦理悲剧的风险。
国内是否应建卵子库
按照王超的说法,目前国内不孕不育的妇女有10%以上,但通过正规渠道获得赠卵
很难,“应该扩大捐卵者的范围,可以模仿精子库,建立卵子库”。
薛晴称,目前不孕不育的妇女确实有10%左右,但大部分人可以通过药物或者手术
治疗,真正需要做试管婴儿,甚至需要别人赠卵的还是少数。2004年北大第一附属医院
曾实验性地尝试过建立卵子库,因为捐卵者少,冻卵技术不成熟停止了。卵子的捐赠与
捐精相比要复杂的多,保存也更困难,最主要的是捐赠者少,没有卵源,“很多人过不
了自己这关。”
同时,也有专家认为,卵子库存在伦理问题。目前这方面缺乏完善的法律法规和系
统管理,国家亟须弥补。
北京博圣律所律师白小勇认为,在现行法律法规下,专门从事捐卵的个人和单位,
涉嫌非法经营。如果把卵子当作人体器官来看,这种卵子黑市还涉嫌触犯出卖人体器官
罪。
黑市流程图
捐卵者接受手术取卵,并从中介处获得报酬
体检通过后,捐卵者需要连续数日注射催卵针
选上的捐卵者在中介的安排和带领下进行体检
中介定期组织捐卵者与客户见面,客户进行挑选
中介在高校内寻找卵源,价格数千到数万不等
A12—A13版采写/本报记者
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P*R
4
1 北京大学生命科学学院魏文胜课题组
我们使用了文章中报道的高效ssDNA,同时自己设计了其他2条针对体内其他基因位点的
ssDNA,与NgAgo表达质粒共转HEK293T细胞与HeLa细胞,2天及5天后,用T7E1检测切割
效率,这三条针对2个不同基因的ssDNA,在HEK293T和HeLa两个细胞系中,无论转染一
次还是在8到12小时后再转染一次ssDNA,都没有检测到切割。
针对敲除后能使细胞有表型变化的某特定基因,我们设计了ssDNA,与NgAgo表达质粒共
转HeLa细胞5天后,发现细胞表现出了一定的对应表型,但是把这部分细胞收集起来提
取基因组,对靶位点测序,没有发现基因组序列的任何改变。
我们针对某特定基因设计了6种ssDNA,用特异的荧光报告系统检测是否有靶点DSB产生
,结果显示所有实验组均没有检测到对靶位点DNA序列的切割活性。
2 中科院动物研究所王皓毅课题组
我们在293T细胞中表达带有Flag标签的NgAgo ,在不同时间点检测NgAgo蛋白表达。发
现转染6小时后开始检测到目的蛋白,随着时间的延长蛋白量增加。在人类293T细胞系
中重复原文章中Figure 4b中NgAgo对DYRK1A和GATA4两个位点的基因编辑,使用文章中
发表的guide DNA (gDNA)。具体实验方法为NgAgo分别与相应的gDNA共转染细胞,6h、
12h后进行相应gDNA的再次转染。转染后3-4天收集细胞进行Surveyor assay,未检测到
目标位点目的条带的切割, 测序也未发现突变。结果未能重复Figure 4b。
我们也进行了原文章里的Figure 3切割GFP质粒的实验,使用文章中的eGFP gDNA G3,
转染2天后,观察荧光表达和进行流式检测, NgAgo+gDNA G3,NgAgo+ 靶向其他位点的
gDNA ,pUC19+G3, pUC19+5’端没有磷酸化修饰的gDNA,以及单独转染gDNA 都能够明
显降低eGFP表达。针对质粒目标位点的genotyping(Surveyor assay,PCR以及测序)
,未检测出任何突变。结果未能重复Figure 3 .
我们所使用的细胞定期进行支原体检测,未发现任何细胞污染。
3 中科院上海生科院生化与细胞所李劲松课题组
我们主要做了两方面的实验:一个是在Oct4-EGFP的小鼠受精卵中进行NgAgo mRNA和
gDNA的注射,尝试了不同的浓度组合,在囊胚的时候也有看到不亮或者发光很弱的情况
,但是测序发现序列并没有突变;另一个是在细胞水平,我们最初是在Oct4-EGFP的单
倍体细胞共转NgAgo和gDNA载体,分选双阳性的细胞直接测序或者培养后测序,均没有
突变。我们开始怀疑NgAgo的表达窗口比较窄,就改造载体建立了稳定表达Ago的细胞系
,依然没有突变。后面我们就完全按照NBT文章里的实验,在293T细胞中打靶hDYRK1基
因,gDNA的长度位置都和文章一样,还是没有能突变。
4 浙江大学声明科学研究院王立铭课题组
我们实验室在韩春雨论文发表一周内就索取了NgAgo的DNA载体,并立刻计划了对NgAgo
方法的测试。在两个月多达上百次的实验中,在我们测试的所有条件中,我们都没有观
察到NgAgo方法对果蝇基因组的编辑活性。
5 北京大学生命科学学院孙育杰课题组
我们使用了原始菌里来源的和人工合成的密码子优化的NgAgo,尝试了公司合成的磷酸
化gDNA和自己使用PnK磷酸化的gDNA切割MDA_MB-231细胞中的laminB1和LBR基因,每个
基因五条gDNA,通过T7 assay均未见切割。同时,我们切割整合在基因组的gfp基因,
使用韩春雨文章所用的gDNA,流式检测也无gfp荧光的下降。我们还将NgAgo融合了荧光
蛋白,使用靶向telomere的gDNA,使用高倍荧光显微镜没有发现NgAgo在telomere处的
富集。
6 中科院动物研究所李伟课题组
我们在哺乳动物细胞和胚胎水平进行了基于NgAgo的基因组靶向突变实验,采用了包括
韩文章中报道的293细胞和4个完全相同的guide序列和,结果均为阴性,均没有检测到
靶向DNA突变产生。具体进行的实验包括:1、利用体外原核表达纯化的NgAgo和韩文章
中报道的4个guide序列进行37°单链DNA切割,结果:37°没有检测到DNA切割。2、哺
乳动物细胞实验。按照文章附件中的方法,在293细胞分别转染韩文章中的 G5,G10,G27
,G28和自己设计的Mecp2基因guide序列,T7EI酶切检测没有检测到靶位点突变。进行
guide-DNA连续转染实验,在转染后8h,12h 补充转染guide 依然没有检测到靶位点的突
变。3、小鼠胚胎实验:选取Mecp2和stella 位点分别设计若干guide序列,连同NgAgo
mRNA一起进行细胞质注射,收取囊胚检测,T7EI和测序分析均没有检测到靶位点突变。
7 中科院上海生科院神经科学研究所研究员杨辉课题组
我们针对小鼠胚胎的GFP基因、Tyr基因分别设计了四个gDNA(在三家公司都试过合成了
),NgAgo用了三种不同版本(密码子优化或者NLS在N端、C端),操作几百个胚胎,生
了三百多只小鼠,都没有检测到敲除。之后我们又在细胞水平针对猴的Tyr基因、293的
GFP基因、N2A的Tyr基因进行操作,也没有检测到任何基因编辑。最后我们完全按照韩
文章中fig4的DYRKIA基因进行操作,也完全没有效果。
8 上海交通大学吴强课题组
TtAgo被发现在高温下可以在体外通过gDNA指引内切单链DNA,PfAgo在高盐条件下可以
切DNA单链,NgAgo可能是一种嗜盐碱古杆菌中含有类似RNaseH结构域的单链RNA内切酶
,但也可能内切DNA单链。我们利用密码子优化后合成的NgAgo做了以下体内编辑实验,
我们没有做体外实验:
1 单位点:不管是人工合成的5‘端磷酸化gDNA,还是利用T4 PNK磷酸激酶磷酸化5’端
羟基得到的gDNA,在小鼠胚胎、小鼠N2A细胞、人HEC-1B细胞中均没检测到活性。
2. 双位点:三个学生花的力气最大。至少做了三个不同的DNA片段,做了不同温度、盐
离子浓度、多次转染、先体外合成NgAgo蛋白再转染、不同的Tag或核定位序列,也试了
不同的细胞系。我们是用PCR检测DNA大片段敲除,这个方法很灵敏(用CRISPR/Cas9很
容易做出来),因为只有在片段敲除的情况下才能扩增出PCR产物,哪怕效率很低也应
该能检测出来。PCR产物经过克隆再测序,但从没有检测出片段敲除的正确结果。
9 温州医科大学谷峰课题组
我们利用携带GFP的人类细胞,同时导入磷酸化的gRNA和NgAgo表达质粒(做了多个不同
浓度梯度和重复),希望特异的看GFP敲除,以CRISPR/Cas9做阳性对照,但是NgAgo组
我们没有能够检测到GFP的失活。这个实验我们后面又重复了,但是仍然没有看到切割
。所以此时,我们高度怀疑NgAgo的活性,该项目就先停了。
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c*e
5
第一个offer花了10天时间。
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x*2
6
WOW,美美美,,,喜庆啊!!
谢谢CHEERY MM!!
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w*n
7
how about students from Harvard?
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l*k
8
总结就是无论in vitro还是in vivo,无论质粒还是内源基因,没一个结果能重复出来
。怪不得这么多人实名出来说,这结果比我想象的还糟糕。我还以为他做出体外才编的
体内,这特么从头到尾都是脑补的啊。
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b*y
9
啊,我受打击了!

【在 c*****e 的大作中提到】
: 第一个offer花了10天时间。
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L*A
10
真火爆!赞。
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c*3
11
很好嘛
充分使优秀基因扩散
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c*n
12
【再贴一次】
对于韩春雨NBT文章无法重复的问题
需要从Figure 1 开始一步步看
作者的contributions
1. C.H. conceived the study and designed the experiments.
文章 “Story” “Idea” 的设计与发起人
2. X.Z.S. provided intellectual advice on the project and experimental
design.
实验设计, “One guide-faithful” -Figure 2d?
3. C.H. performed mammalian genome editing.
(Figure 4,5)
文章里让科研界最感兴趣的结果,也是无法被重复验证的主要问题
4. F.G. performed the BLAST search and the in vitro cleavage experiments.
(Figure 1, Figure 2?,Figure 3a,supplementary figure 2)
大肠杆菌E coli 表达的蛋白
NgAgo 基因编辑功能的初步 in vitro 数据支持
注:文章中缺乏蛋白表达纯化的数据
注:按韩春雨NBT文章一样的条件设置,中国研究人员无法重复Figure 3
5. F.G., F.J. and Y.W. designed and constructed the clones under the
supervision of C.H.
在韩春雨指导下,学生们设计并做的constructs
注:文章中所有的constructs 看来都是学生们在韩春雨指导下做出来的
6. F.J. and Y.W. performed the in vivo cleavage experiments.
(Figure 3b,3c, 3d)
哺乳细胞表达的蛋白
NgAgo 基因编辑功能的初步 in vitro 及 in vivo 数据支持
注:文章中缺乏蛋白表达纯化的数据
注:文章中缺乏蛋白细胞内定位的数据以及实验详细步骤
注:按韩春雨NBT文章一样的条件设置,中国研究人员无法重复Figure 3
7. X.Z.S. and C.H. wrote the manuscript.
“Story”的编写者们
文章图片分析:
1. Figure 1 E coli GST-NgAgo,in vitro assay
- E coli 表达纯化的是 GST-NgAgo, NBT正文以及supplementary中,存在有关于蛋白
表达的数据吗? - 没有找到
- Figure 1b:
E coli expressed NgAgo with either FW or RV guide DNA: nicked target
plasmid (Lanes 5,6)
E coli expressed NgAgo with both FW and RV guide DNA: linearized target
plasmid (Lane 7)
- 支持Figure 1 的数据有 supplementary Figure 2
E coli NgAgo (assuming GST-NgAgo) 55C preloaded with guide
(没有注明是FW or RV guide), 只能nick plasmid
2. Figure 2 Mammalian, FLAG-NgAgo-HA?
- HEK293T 表达纯化的是 FLAG-NgAgo-HA, NBT正文以及supplementary中,存在有关于
蛋白表达的数据吗? - 没有找到
- 这张图是“one guide faithful”原理的数据来源
- Figure 2a ssDNA很泛泛,没有注明是否是 FW+RV
- Figure 2b 注明了是FW guide
3. Figure 3 Mammalian FLAG-NgAgo-HA
- Figure 3a:
HEK293T expressed NgAgo preloaded with FW guide alone: linearized plasmid
(Lanes 1,2,3)
这和Figure 1b 矛盾 也和supplementary figure 2 有矛盾
- 支持Figure 3a 的数据有 supplementary Figure 1
也是只要preloaded with FW guide就可以 linearized plasmid
这和Figure 1b 矛盾 也和supplementary figure 2 有矛盾
- HEK293T 表达纯化的是 FLAG-NgAgo-HA, NBT正文以及supplementary中,存在有关于
蛋白表达的数据吗? - 没有找到
4. Supplementary Figure 4
文章中唯一的关于NgAgo 在哺乳细胞中定位的数据
- Hela cell 表达的NLS-NgAgo蛋白localized to nucleus
- 这个NLS-NgAgo 蛋白是如何被检测到的?
- 原文引用
“NgAgo is directed into nucleus by NLS.
The engineered NLS-NgAgo was transfected to Hela cells and it shows that the
expressed NLS-NgAgo was compartmented in the
nucleus (DAPI+) and the cells maintained normal morphology. Scale bar = 100
μm. Representative figure of 20 independent
experiments.”
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r*t
13
表被他打击,现在正式渠道的大公司从开始到发 offer 3 个月正常,6个月常见。

【在 b********y 的大作中提到】
: 啊,我受打击了!
avatar
f*c
14
哦哦,好漂亮,谢谢
avatar
g*a
15
change the currency to dollar.

【在 w**********n 的大作中提到】
: how about students from Harvard?
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l*7
16
谁批准这些人做这些项目的,这些资金从哪些项目里出的?资金被挪用没法交代了,现
在找主席的要钱。
avatar
G*a
17
谢谢!回赠给妹妹俺家的几朵小花。

【在 c******9 的大作中提到】
: 祝贺新的领导班子成立~ 祝花版像花儿一样红红火火~~
avatar
w*a
18
娶大胸美女,生高IQ儿子.非此不可
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S*g
19
坐等佘山仇子龙七进七出,勇救韩主席
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M*7
20
这就是大名鼎鼎的虎斑百合吧?

【在 c******9 的大作中提到】
: 祝贺新的领导班子成立~ 祝花版像花儿一样红红火火~~
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a*g
21
你不发现,不等于别人没发现,这个道理还是明白吧

【在 P****R 的大作中提到】
: 1 北京大学生命科学学院魏文胜课题组
: 我们使用了文章中报道的高效ssDNA,同时自己设计了其他2条针对体内其他基因位点的
: ssDNA,与NgAgo表达质粒共转HEK293T细胞与HeLa细胞,2天及5天后,用T7E1检测切割
: 效率,这三条针对2个不同基因的ssDNA,在HEK293T和HeLa两个细胞系中,无论转染一
: 次还是在8到12小时后再转染一次ssDNA,都没有检测到切割。
: 针对敲除后能使细胞有表型变化的某特定基因,我们设计了ssDNA,与NgAgo表达质粒共
: 转HeLa细胞5天后,发现细胞表现出了一定的对应表型,但是把这部分细胞收集起来提
: 取基因组,对靶位点测序,没有发现基因组序列的任何改变。
: 我们针对某特定基因设计了6种ssDNA,用特异的荧光报告系统检测是否有靶点DSB产生
: ,结果显示所有实验组均没有检测到对靶位点DNA序列的切割活性。

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N*r
22
大爱的百合花!
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P*R
23
你国科学家虽然不懂怎样重复自己发表的实验,但是显然很懂中国:混进政协有了护身
符,弟子评上副教授,校长要升官,科研经费也套下来了。成功绑架体制,一损俱损,
一荣俱荣。于是可以理直气壮地宣布:俺辛辛苦苦凭本事造假,为什么要自证清白?!

【在 a*****g 的大作中提到】
: 你不发现,不等于别人没发现,这个道理还是明白吧
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f*y
24
这个是香水百合~

【在 M****7 的大作中提到】
: 这就是大名鼎鼎的虎斑百合吧?
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l*7
25
这几个当中那个赔钱赔的最多?偷鸡不成蚀把米。尤其是上海神经所的那位简直就是一
神经X,真有钱,就是没脑子,还好意思写出来丢人显眼。别人都是做个关键试验不成
功就放下了,他这是赌徒心理,想干票大的,没想到被忽悠到裤衩都露出来了,可惜做
试验的那些孩子啦。
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c*9
26
已经没了,这两天有点热~~

【在 x******2 的大作中提到】
: WOW,美美美,,,喜庆啊!!
: 谢谢CHEERY MM!!

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P*R
27
从仇发表的方式看,这个人的科学基本训练很差,怎么混进神经所去的?

【在 l********7 的大作中提到】
: 这几个当中那个赔钱赔的最多?偷鸡不成蚀把米。尤其是上海神经所的那位简直就是一
: 神经X,真有钱,就是没脑子,还好意思写出来丢人显眼。别人都是做个关键试验不成
: 功就放下了,他这是赌徒心理,想干票大的,没想到被忽悠到裤衩都露出来了,可惜做
: 试验的那些孩子啦。

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c*9
28
谢谢小裴!问好!

【在 L****A 的大作中提到】
: 真火爆!赞。
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l*7
29
让手下做老鼠和猴子实验那位更离谱,一群神马鸟人。

【在 P****R 的大作中提到】
: 从仇发表的方式看,这个人的科学基本训练很差,怎么混进神经所去的?
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c*9
30
谢谢包子:D:D

【在 f*****c 的大作中提到】
: 哦哦,好漂亮,谢谢
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g*0
31
说明中国科研人员缺乏独立思考,全靠山寨和盲目试错的落后科研方式。
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c*9
32
谢谢高妈!太阳花是向日葵的一种吗?很特别的。小铁种在盆里的?花花很漂亮!

【在 G********a 的大作中提到】
: 谢谢!回赠给妹妹俺家的几朵小花。
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c*9
33
很香很香的百合~~

【在 M****7 的大作中提到】
: 这就是大名鼎鼎的虎斑百合吧?
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c*9
34
谢谢!这个很香的,都不能走近~

【在 N*******r 的大作中提到】
: 大爱的百合花!
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c*9
35
谢谢!

【在 f******y 的大作中提到】
: 这个是香水百合~
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R*m
36
我的百合花开几天就谢了.水不够?

【在 c******9 的大作中提到】
: 祝贺新的领导班子成立~ 祝花版像花儿一样红红火火~~
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l*d
37
跟我家的一样,第一天摘了一朵就把我熏晕了。

【在 c******9 的大作中提到】
: 很香很香的百合~~
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