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help!dam methylation

help!dam methylation# Biology - 生物学

n*l2016-12-06 08:12

1 楼

I want to use XbaI site on EGFP vector, but it is methylated by dam.
What should I do?
1. grow in dam- E. coli. which strain is the best?
2. change the multiple cloning site of Xba1 by mutagenesis
3. change my DNA fragment using PCR to add an RE site.
Sorry I can not type Chinese with working computer.

C*n2016-12-06 08:12

2 楼

用DH10B. 这个strain是dam-

H*i2016-12-06 08:12

3 楼

1.常规的DH10B不是dam-的 http://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes#DH10B_.28Invitrogen.29
如果要用，一般用的是JM110之类的，或者找公司买他们自己突变的。
2.换位点如果你是大批量要做的话，还可以考虑，如果只是做一次，现在克隆方法很多
，一般都不会考虑专门去搞这么麻烦的事情了。
3. 换insert 位点自然如果你确定对构建/结果没影响（当然很可能有影响），肯定比
改backbone的好。

n*l2016-12-06 08:12

4 楼

Thanks!

【在 C*********n 的大作中提到】

: 用DH10B. 这个strain是dam-

n*l2016-12-06 08:12

5 楼

多谢详细解答，最后我用dam-的细菌做了。

【在 H*******i 的大作中提到】

: 1.常规的DH10B不是dam-的 http://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes#DH10B_.28Invitrogen.29
: 如果要用，一般用的是JM110之类的，或者找公司买他们自己突变的。
: 2.换位点如果你是大批量要做的话，还可以考虑，如果只是做一次，现在克隆方法很多
: ，一般都不会考虑专门去搞这么麻烦的事情了。
: 3. 换insert 位点自然如果你确定对构建/结果没影响（当然很可能有影响），肯定比
: 改backbone的好。