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如何大量buffer exchange ssDNA

如何大量buffer exchange ssDNA# Biology - 生物学

A*y2019-03-13 07:03

1 楼

是那种有粘性的塑胶条吗？应该叫什么啊？网上能买到吗？谢谢！

G*12019-03-13 07:03

2 楼

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Comments (10) ›Add Comments
04/07/2010, 12:09pm By anonymous
Good Wings? :)
04/07/2010, 12:17pm By anonymous
Awesome wings!!! Wings are so good you might fly!!
04/07/2010, 01:04pm By anonymous
Fly to Pandora
04/07/2010, 01:54pm By anonymous
Does the buffalo have wings?
04/07/2010, 02:14pm By anonymous
wings are gooooood. but your chole

t*o2019-03-13 07:03

3 楼

最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
伤ssDNA分子。
试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
概是60%。我得用50个柱子才行。
在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
多谢了。

F*Q2019-03-13 07:03

4 楼

let me google that for you:
http://bit.ly/u8FQ8v

B*62019-03-13 07:03

5 楼

乙醇沉淀？

【在 t*******o 的大作中提到】

: 最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
: 有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
: 掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
: 伤ssDNA分子。
: 试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
: 概是60%。我得用50个柱子才行。
: 在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
: 只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
: 暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
: 多谢了。

A*y2019-03-13 07:03

6 楼

haha，这么好玩，谢谢

【在 F***Q 的大作中提到】

: let me google that for you:
: http://bit.ly/u8FQ8v

M*g2019-03-13 07:03

7 楼

dialysis?

f*02019-03-13 07:03

8 楼

去WALMART 买WEATHER STRIP，回来一贴就好了。

r*d2019-03-13 07:03

9 楼

用Amicon,买分子量cut off 3000那种，一管子15ml,一次离心就可以同时装6管还是8管

【在 t*******o 的大作中提到】

p*y2019-03-13 07:03

10 楼

我感觉此地的房子不仅是窗缝，简直是到处透风。。。:(

f*e2019-03-13 07:03

11 楼

超滤，G25柱脱盐，透析都可以

t*o2019-03-13 07:03

12 楼

多谢楼上几位。
乙醇沉淀考虑过，怕DTT和乙醇弄不干净，影响下一步的应用。
dialysis需要的时间比较长，可能需要overnight才能除干净。已经reduced的oligo可
能又被氧化了。不过可以考虑。
desalting受体积的影响，需要大量的柱子。或者请问有什么比较大的柱子能一次
desalting比较大的volume? 还是说需要自己pack柱子？
超滤的话有什么装置可以推荐的吗?

【在 f****e 的大作中提到】

: 超滤，G25柱脱盐，透析都可以

g*x2019-03-13 07:03

13 楼

amicon 15
100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的

【在 t*******o 的大作中提到】

: 多谢楼上几位。
: 乙醇沉淀考虑过，怕DTT和乙醇弄不干净，影响下一步的应用。
: dialysis需要的时间比较长，可能需要overnight才能除干净。已经reduced的oligo可
: 能又被氧化了。不过可以考虑。
: desalting受体积的影响，需要大量的柱子。或者请问有什么比较大的柱子能一次
: desalting比较大的volume? 还是说需要自己pack柱子？
: 超滤的话有什么装置可以推荐的吗?

A*y2019-03-13 07:03

14 楼

True, Amicon spin column is the best way if you don't want to do dialysis.

【在 g*****x 的大作中提到】

: amicon 15
: 100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的

t*o2019-03-13 07:03

15 楼

Amicon还真不行。我能找到的最小的3KDa, 过滤5KDa的ssDNA，基本上都会漏掉。

【在 g*****x 的大作中提到】

: amicon 15
: 100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的

N*n2019-03-13 07:03

16 楼

你是一次性的实验，还是要重复？cost不一样，方法会不同。

【在 t*******o 的大作中提到】

g*x2019-03-13 07:03

17 楼

那自己买1 kDa的UF membrane去TFF吧

【在 t*******o 的大作中提到】

: Amicon还真不行。我能找到的最小的3KDa, 过滤5KDa的ssDNA，基本上都会漏掉。

t*o2019-03-13 07:03

18 楼

就一次性的实验。所以如果是disposable的东西最好。

【在 N****n 的大作中提到】

: 你是一次性的实验，还是要重复？cost不一样，方法会不同。

t*o2019-03-13 07:03

19 楼

UF还真没用过。请问如果我想买500Da cutoff, vol 50-200mL 的超滤膜，哪里能买到
，有什么可以推荐的吗？

【在 g*****x 的大作中提到】

: 那自己买1 kDa的UF membrane去TFF吧

g*x2019-03-13 07:03

20 楼

Koch, 500 Da我不知道属于他们UF还是NF
也未必有现成的cartridge

【在 t*******o 的大作中提到】

: UF还真没用过。请问如果我想买500Da cutoff, vol 50-200mL 的超滤膜，哪里能买到
: ，有什么可以推荐的吗？

t*o2019-03-13 07:03

21 楼

anyway, Thanks a lot!

【在 g*****x 的大作中提到】

: Koch, 500 Da我不知道属于他们UF还是NF
: 也未必有现成的cartridge