Re: 紧急求助# Biology - 生物学
t*s
1 楼
我用one fly prep做过几次不同的PCR, 都一次PCR拿到target。
一直用这个website设计引物：
http://www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi
我一般用20bp左右的引物， 带GC clamp(3'末端是C或G)1-2个。
最好2个GC clamp. Tm 60C左右, 最后PCR的退火温度也是60C.
设计好引物后，到这里来去除不合适（hairpin, self-dimer)的引物。
http://www.idtdna.com/program/oligocalc/oligocalc.asp
good luck!
55
thin.
一直用这个website设计引物：
http://www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi
我一般用20bp左右的引物， 带GC clamp(3'末端是C或G)1-2个。
最好2个GC clamp. Tm 60C左右, 最后PCR的退火温度也是60C.
设计好引物后，到这里来去除不合适（hairpin, self-dimer)的引物。
http://www.idtdna.com/program/oligocalc/oligocalc.asp
good luck!
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thin.