从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（二十一）# Biology - 生物学
r*o
1 楼
本文献给YL
（二十一）离子交换层析
做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后，下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单，利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样，属于
absorption/desorption型的层析方法，与gel filtration完全不一样，其中
一个最大的优点是，样品体积可以很大，最后的洗脱样品的体积可以小很
多，这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是，离子交换层
析其实不需要柱子，可以用batch 的方法（在离心管里面混合beads和样
品）。当然如果beads量多情况下，batch方法平衡得不是很好，导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会，以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化，原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团，所以实际上可以看成是
（二十一）离子交换层析
做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后，下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单，利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样，属于
absorption/desorption型的层析方法，与gel filtration完全不一样，其中
一个最大的优点是，样品体积可以很大，最后的洗脱样品的体积可以小很
多，这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是，离子交换层
析其实不需要柱子，可以用batch 的方法（在离心管里面混合beads和样
品）。当然如果beads量多情况下，batch方法平衡得不是很好，导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会，以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化，原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团，所以实际上可以看成是