用AKATA系统(FPLC)提纯蛋白,NaCl的浓度有讲究吗?# Biology - 生物学e*y2010-03-05 08:031 楼老公公司的律师帮我转H4,I539已经寄走了,但是我下周就要回国,打算9月回美国,要是回来之前老公的h1还没下来我去签证还签F2?入境美国后要重新申请H4,是吗?因为I94表和入境时间都变化了。请了解的朋友告诉我一声吧,谢谢
H*r2010-03-05 08:033 楼完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段唱的时候,我已经没有力气了。深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
s*l2010-03-05 08:034 楼copy form baidu:中国内地女演员,出生于浙江,毕业于北京电影学院(表演系2006级本科班)。2009年因出演《医者仁心》中林秀而受到观众的关 注,随后《下海》《国门英雄》《营盘镇警事》三部影视作品先后登陆央视,作为一个青年演员,在毕业后短短的两年内,连续四部优秀作品登陆央视播放平台,2012年因为在《营盘镇警事》中扮演何雨桐一角而获得了更高的人气,颇受好评的同时,为其赢得大量粉丝。2012年王笛先后拍摄了《兰陵王》《X女特工》等偶像剧。浙江丽水!
m*m2010-03-05 08:036 楼Ni柱,最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什么讲究吗?还有Tris溶液要从头到尾都加吗?这些盐对提纯蛋白有何影响?(PS.我NaCl浓度试过500mM,300mM,100mM)
i*t2010-03-05 08:037 楼回来之前,如果LD的H1批准了,你得在中国申请h4过来如果没有,F2过来,过来你啥也不用干。【在 e****y 的大作中提到】: 老公公司的律师帮我转H4,I539已经寄走了,但是我下周就要回国,打算9月回美国,要: 是回来之前老公: 的h1还没下来我去签证还签F2?: 入境美国后要重新申请H4,是吗?因为I94表和入境时间都变化了。: 请了解的朋友告诉我一声吧,谢谢
h*02010-03-05 08:038 楼你看看发骂人PA贴的人是谁就明白了……本来只要不骂人PA,没什么大事,一骂起来,就什么也没法说了。【在 t******t 的大作中提到】: 斑竹赶快出动删贴: bbs是个大家自由发表意见的地方,搞成骂街有什么意思
y*l2010-03-05 08:0310 楼下海(也是宋秘书的)http://v.netstartv.com/youtubes/730国门英雄http://v.netstartv.com/youtubes/1011
k*u2010-03-05 08:0312 楼NaCl在纯化过程中主要的作用是维持离子强度,离子强度太低了,有些蛋白会沉淀的。是做膜蛋白吗?如果是的话,还可以试试看cobalt的柱子,和Ni差不多的东西,很多做功能的人更喜欢cobalt。【在 m****m 的大作中提到】: Ni柱,最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什: 么讲究吗?还有Tris溶液要从头到尾都加吗?这些盐对提纯蛋白有何影响?(PS.我: NaCl浓度试过500mM,300mM,100mM)
W*e2010-03-05 08:0318 楼会影响蛋白的稳定性或者能否形成复合物Tris是buffer, 不同的pH也会影响蛋白的稳定性和溶解度【在 m****m 的大作中提到】: Ni柱,最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什: 么讲究吗?还有Tris溶液要从头到尾都加吗?这些盐对提纯蛋白有何影响?(PS.我: NaCl浓度试过500mM,300mM,100mM)
p*s2010-03-05 08:0321 楼很好啊,听不出脱力的感觉。。。【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
l*12010-03-05 08:0323 楼NaCl在Ni柱纯化中是用来避免杂蛋白非特异性地以离子交换方式吸附到介质上。如果没有记错,至少0.3M是必须的。0.5M很多人用。0.1M太低了。【在 m****m 的大作中提到】: Ni柱,最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什: 么讲究吗?还有Tris溶液要从头到尾都加吗?这些盐对提纯蛋白有何影响?(PS.我: NaCl浓度试过500mM,300mM,100mM)
m*m2010-03-05 08:0327 楼谢谢。就是膜蛋白,不过我做结构,暂时不做功能。。【在 k********u 的大作中提到】: NaCl在纯化过程中主要的作用是维持离子强度,离子强度太低了,有些蛋白: 会沉淀的。是做膜蛋白吗?如果是的话,还可以试试看cobalt的柱子,: 和Ni差不多的东西,很多做功能的人更喜欢cobalt。
p*s2010-03-05 08:0329 楼搭车问专业,怎么解决到高音声带就失控的问题? 感觉某个音高凭一时血气之勇可以冲到,但是很难在那个音高上保持住,然后自然就走调了。。。【在 l****y 的大作中提到】: omg!! 你的音色太棒了!一出来我就被震住了,要不是你的口音,我还以为是原唱呢:)
m*m2010-03-05 08:0331 楼有没有情况用0.5M太浓啊?太浓的话会怎么样?是不是从头到尾NaCl都要加呢?【在 l*******1 的大作中提到】: NaCl在Ni柱纯化中是用来避免杂蛋白非特异性地以离子交换方式吸附到介质上。: 如果没有记错,至少0.3M是必须的。0.5M很多人用。0.1M太低了。
l*y2010-03-05 08:0333 楼解决这个问题最根本的问题就是气息,有足够的气息才能支撑住高音,并且保持在高音的位置上。高音是可以一下子冲上去,就像火箭升天,如果没有燃料了,就下来了,如果动力太猛了,就找不到北了,所以高音可以说是滑上去的,用气息支撑上去的,沿着音高的既定轨道,而不是蹭的一下就上去了然后就找不到方向了:)以冲到,但是很难在那个音高上保持住,然后自然就走调了。。。【在 p****s 的大作中提到】: 搭车问专业,怎么解决到高音声带就失控的问题? 感觉某个音高凭一时血气之勇可以冲到,但是很难在那个音高上保持住,然后自然就走调了。。。
l*12010-03-05 08:0335 楼看看Ni-NTA的manual就全有了。【在 m****m 的大作中提到】: 有没有情况用0.5M太浓啊?太浓的话会怎么样?是不是从头到尾NaCl都要加呢?
p*s2010-03-05 08:0336 楼多谢指导,让我好好思量好好揣摩下【在 l****y 的大作中提到】: 解决这个问题最根本的问题就是气息,有足够的气息才能支撑住高音,并且保持在高音: 的位置: 上。: 高音是可以一下子冲上去,就像火箭升天,如果没有燃料了,就下来了,如果动力太猛: 了,就找: 不到北了,所以高音可以说是滑上去的,用气息支撑上去的,沿着音高的既定轨道,而: 不是蹭的: 一下就上去了然后就找不到方向了:): : 以冲到,但
m*r2010-03-05 08:0337 楼演男还是有工作的人,看人家更的数量和质量【在 l***a 的大作中提到】: 真tmd短,还一点内容都没有。就这德性wy敢还装可怜,这病那病的好像病入膏肓一样: 。就一个傻病懒病
q*m2010-03-05 08:0338 楼赞深入浅出!【在 l****y 的大作中提到】: 解决这个问题最根本的问题就是气息,有足够的气息才能支撑住高音,并且保持在高音: 的位置: 上。: 高音是可以一下子冲上去,就像火箭升天,如果没有燃料了,就下来了,如果动力太猛: 了,就找: 不到北了,所以高音可以说是滑上去的,用气息支撑上去的,沿着音高的既定轨道,而: 不是蹭的: 一下就上去了然后就找不到方向了:): : 以冲到,但
T*s2010-03-05 08:0341 楼does he owe you?【在 l***a 的大作中提到】: 真tmd短,还一点内容都没有。就这德性wy敢还装可怜,这病那病的好像病入膏肓一样: 。就一个傻病懒病
t*r2010-03-05 08:0342 楼这个唱得太牛了,五体投地中 …………screencolor=ffffff&controlbarsize=80&repeat=always&file=http://www.gcbar.net/hower/myFutureIsNotADream_mix_v0.mp3【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
p*s2010-03-05 08:0344 楼我想再给你设个挑战,当然当然不能老是张雨生张信哲老在他们老张家打转也太那啥了,换到老庾家吧,挑战下何如?你行的,加油, 好吗【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
H*r2010-03-05 08:0346 楼同学们都太Nice罗,这首歌我都只能给自己打个最多75分。录了三遍,就是因为老不满意,最后还是将就这个第二版了。因为实在唱不动了。那个高潮的“我的未来不是梦我认真的过每一分钟”是无法换气的,又是最高的音,真的要唱死人。小金鱼提到的气息问题体现在这里,就是个活生生的例子。谢谢大家欣赏【在 q*****m 的大作中提到】: co-惊艳!: 第二遍是能听出来有些疲惫,唱这首歌是个体力活。。。
H*r2010-03-05 08:0349 楼普鲁图斯,这个 《靠近》又是啥?我已经挑战极限了,难道还真要过限死么?上次你点的另外那个老张家的 忘情忘爱,我这个星期每天开车都在学呢,难度不成问题,和这个未来不是梦比,音不算高,我只是要现学并熟悉一下旋律,这个周末争取给你录了,【在 p****s 的大作中提到】: 我想再给你设个挑战,当然当然不能老是张雨生张信哲老在他们老张家打转也太那啥了,: 换到老庾家吧,挑战下何如?: 你行的,加油, 好吗
p*s2010-03-05 08:0350 楼这个呢, 和张信哲的白马纯美派基本是截然不同的风格, 你可以叫它呐喊咆哮派.用了一些变调.靠近原音重现:http://www.1ting.com/player/34/player_414168.html【在 H***r 的大作中提到】: 普鲁图斯,这个 《靠近》又是啥?: 我已经挑战极限了,难道还真要过限死么?上次你点的另外那个老张家的 忘情忘爱,我: 这个星期每天开车都在学呢,难度不成问题,和这个未来不是梦比,音不算高,我只是: 要现学并熟悉一下旋律,这个周末争取给你录: : 了,
H*r2010-03-05 08:0351 楼嗯,我觉得我适合咆哮派,先听听看【在 p****s 的大作中提到】: 这个呢, 和张信哲的白马纯美派基本是截然不同的风格, 你可以叫它呐喊咆哮派.: 用了一些变调.: 靠近原音重现:: http://www.1ting.com/player/34/player_414168.html
p*s2010-03-05 08:0352 楼先来说说为什么我喜欢这首, 因为里面有这么一段词:世界如此忙忙得你和我都失去了判断赢了所有失去最初的梦最爱的人最好时光一切不能重来三个四字连着的那段, "最初的梦, 最爱的人, 最好时光" 被老庾在第二段变调上去唱得荡气回肠, 联系到歌词本身, 如果生活经历有感触的话真的很打动人.【在 H***r 的大作中提到】: 嗯,我觉得我适合咆哮派,先听听看
H*r2010-03-05 08:0353 楼蛮好听的,好多变调。不算太咆哮,还是Beyond 的歌我唱的时候觉得吼得爽唱得荡气回肠, 联系到歌词本身, 如果生活经历有感触的话真的很打动人.【在 p****s 的大作中提到】: 先来说说为什么我喜欢这首, 因为里面有这么一段词:: 世界如此忙: 忙得你和我都失去了判断: 赢了所有失去: 最初的梦: 最爱的人: 最好时光: 一切不能重来: 三个四字连着的那段, "最初的梦, 最爱的人, 最好时光" 被老庾在第二段变调上去唱得荡气回肠, 联系到歌词本身, 如果生活经历有感触的话真的很打动人.
n*r2010-03-05 08:0354 楼太牛了!!!怎么可以这么轻松就唱上去呢?【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
a*72010-03-05 08:0355 楼强赞! 很牛!【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
k*m2010-03-05 08:0358 楼再次赞美版三高亢清亮的嗓音。“我的未来不是梦”好像张雨生唱的是di,版三唱的是de。对这歌还比较耳熟所以一听就听出来了。。。【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
f*s2010-03-05 08:0360 楼赞细心,我以前唱di,后来听了楼主的好几遍,也被影响了改唱de了。:)也跟着赞美下楼主,功力真的非常深厚。【在 k*m 的大作中提到】: 再次赞美版三高亢清亮的嗓音。: “我的未来不是梦”好像张雨生唱的是di,版三唱的是de。对这歌还比较耳熟所以一听: 就听出来了。。。
l*y2010-03-05 08:0362 楼哈哈,只能偷偷换气啦,快吸。你说你游泳很厉害,这个应该就是小菜一盘了。继续努力,勇攀“高峰”!【在 H***r 的大作中提到】: 同学们都太Nice罗,这首歌我都只能给自己打个最多75分。录了三遍,就是因为老不满: 意,最后还是将就这个第二版了。因为实在唱不动了。那个高潮的“我的未来不是梦我: 认真的过每一分钟”是无法换气的,又是最高的音,真的要唱死人。小金鱼提到的气息: 问题体现在这里,就是个活生生的例子。: 谢谢大家欣赏
T*a2010-03-05 08:0363 楼板三动作好快呀,太谢了.唱得太棒了! 才听了一句,我就知道这歌点对了,充分显示楼主的功力,象那句"对爱的执著",高亮又悠长,多漂亮的男高音啊!!这歌把我带回到那爱作梦的年轻时代,一晃这么多年过去了,还在太阳下低头流着汗水默默辛苦的工作...受了冷漠也不放弃自己想要的生活...我的心仍然跟着希望在动...
t*52010-03-05 08:0368 楼MM的这个解释太精辟了。确实俺很多时候高音可以冲上去,但是hold不住,还是气息是根本啊!MM还是教教我们,除了锻炼身体增加肺活量外,有没有什么练气的小方法,我们可以平时有事没事的练练,呵呵。【在 l****y 的大作中提到】: 解决这个问题最根本的问题就是气息,有足够的气息才能支撑住高音,并且保持在高音: 的位置: 上。: 高音是可以一下子冲上去,就像火箭升天,如果没有燃料了,就下来了,如果动力太猛: 了,就找: 不到北了,所以高音可以说是滑上去的,用气息支撑上去的,沿着音高的既定轨道,而: 不是蹭的: 一下就上去了然后就找不到方向了:): : 以冲到,但
t*52010-03-05 08:0369 楼Hower的声线还真是很高亢啊!张雨生是天赋异禀,他的歌没几个人可以唱上去的。你这翻得已经八九不离十了,呵呵。另外,要注意保护嗓子啊,这种歌如果硬喊上去,会很伤喉咙的。
H*r2010-03-05 08:0371 楼oops, 又被小雪梨顶出来这贴了。我实在不忍听自己的嚎叫了。一并谢谢netmaster, 气龙,灵灵偶像,砸松,小麦,贝格子,齐美人,小金鱼,luma , week11, 还有远空大师和天天的鼓励。另外特别感谢天天的提醒,我还算注意保护。以前喝了酒去K歌的时候,有硬吼然后第二天会觉得嗓子痛,所以学乖了【在 s*********0 的大作中提到】: 不错哦!听了lz很多歌了,这个最适合你了
E*s2010-03-05 08:0373 楼版三,我发现你的几首歌都连不上啊:(【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快
Q*f2010-03-05 08:0376 楼hower兄,一直在缓冲听不了啊【在 H***r 的大作中提到】: 完成天麻兄点的作业,同时也是挑战下自己的极限。音是可以上去,但是要带感情已经: 很难很难了。那个“每一分钟”唱得我差点晕死过去,细心的同学可以听出来第二回段: 唱的时候,我已经没有力气了。: 深呼吸下,然后点 play 吧,祝大家周末愉快