真核Fusion Protein，怎么做？自己做还是找公司做？# Biology - 生物学
n*t
1 楼
我要去墨西哥签证了.需要自己证明能付一部分生活费.请问我需要什么证件呢? 银行的
一页reference letter证明我有那个存款是否就够了?还是要前面3个的bank statement
?或者其他形式的证明?谢谢!
一页reference letter证明我有那个存款是否就够了?还是要前面3个的bank statement
?或者其他形式的证明?谢谢!
x*h
2 楼
公司开发部门X大项目组涉及的四个人A,K,Q,J
A是director管所有developer
K是新来team lead的也是刚刚卓拔成为architect,算是空降,一人之下不少人之上
Q是老资格team lead,专管X大项,受A管,没提拔她心里应该小不爽
J是我工作2年多归Q管,K来了以后也时不时帮K干活
K最近的一个想法要实现可是遇到些困难,于是我在帮他调试的时候,我就自己也写了个
差不多的实现,幸运
的是我的实现没有出现K遇到的问题,我试着帮K试图解决可是没什么作用
K就说你要是接手这个小项目当然好,不过要承担责任,程序坏掉了你要负责,他自己反倒
轻松了,因为K说话
一向直接,所以我认为他就是同意用我的实现,但是听起来还是有点怪怪的,究竟他会不
会是对我另起炉灶不
满我心里也没数
由于这个想法是涉及Q管的项目,所以Q也过问,Q要求我给AKQJ群发邮件说清楚两个实现
有什么不同K的
是如何不能用的,我的代码是如何运行的,要开会讨论用那种实现方法
Q这么做让我觉得反常,首先虽然和Q有关系,这个小项目是K管,具体代码如何实现应该用
不着惊动A头,A头
只管大方向从来不看一眼code,做code review也不用这么多人一起讨论; 其次我觉得平
时K太严格对Q的项
目涉足多所以批评也多,会不会是Q找机会要在A面前恶心K
我最关心的是我会不会被当枪使,结果开会的时候直接暴露在K的怒火,或许是我想法太
阴暗了,把事情搞复
杂了?
A是director管所有developer
K是新来team lead的也是刚刚卓拔成为architect,算是空降,一人之下不少人之上
Q是老资格team lead,专管X大项,受A管,没提拔她心里应该小不爽
J是我工作2年多归Q管,K来了以后也时不时帮K干活
K最近的一个想法要实现可是遇到些困难,于是我在帮他调试的时候,我就自己也写了个
差不多的实现,幸运
的是我的实现没有出现K遇到的问题,我试着帮K试图解决可是没什么作用
K就说你要是接手这个小项目当然好,不过要承担责任,程序坏掉了你要负责,他自己反倒
轻松了,因为K说话
一向直接,所以我认为他就是同意用我的实现,但是听起来还是有点怪怪的,究竟他会不
会是对我另起炉灶不
满我心里也没数
由于这个想法是涉及Q管的项目,所以Q也过问,Q要求我给AKQJ群发邮件说清楚两个实现
有什么不同K的
是如何不能用的,我的代码是如何运行的,要开会讨论用那种实现方法
Q这么做让我觉得反常,首先虽然和Q有关系,这个小项目是K管,具体代码如何实现应该用
不着惊动A头,A头
只管大方向从来不看一眼code,做code review也不用这么多人一起讨论; 其次我觉得平
时K太严格对Q的项
目涉足多所以批评也多,会不会是Q找机会要在A面前恶心K
我最关心的是我会不会被当枪使,结果开会的时候直接暴露在K的怒火,或许是我想法太
阴暗了,把事情搞复
杂了?
c*r
3 楼
和大家讨论一些实验的问题
背景：老板要一个融合蛋白，本来在海胆（Sea Urchin）里表达的，分子量~85KDa，叫
Dishevelled，至少有磷酸化的修饰，在Wnt pathway里很重要一蛋白。想和一个tag连
在一起，其实最主要的是想得尽可能多的有正确修饰、折叠的天然蛋白用来做Far-
western blotting研究蛋白相互作用。可是我们都没有表达真核蛋白的经验，用E.
coli肯定不行。in vitro转录可能表达量不够，做一个Far-Western Blotting要1~50
μg的蛋白用量，而且指不定得做多少次来摸条件和重复呢。
要求：1.正确的修饰、折叠等等；2. 表达量大
问题：1. 用什么kit，细胞可以达到以上要求？有人推荐老板用昆虫细胞。
2. 自己做还是找公司做？我倾向于找公司或lab合作做但不知道有哪些公司可以做。大
家推荐一下吧。想合作也可以，嘿嘿。
多谢！
背景：老板要一个融合蛋白，本来在海胆（Sea Urchin）里表达的，分子量~85KDa，叫
Dishevelled，至少有磷酸化的修饰，在Wnt pathway里很重要一蛋白。想和一个tag连
在一起，其实最主要的是想得尽可能多的有正确修饰、折叠的天然蛋白用来做Far-
western blotting研究蛋白相互作用。可是我们都没有表达真核蛋白的经验，用E.
coli肯定不行。in vitro转录可能表达量不够，做一个Far-Western Blotting要1~50
μg的蛋白用量，而且指不定得做多少次来摸条件和重复呢。
要求：1.正确的修饰、折叠等等；2. 表达量大
问题：1. 用什么kit，细胞可以达到以上要求？有人推荐老板用昆虫细胞。
2. 自己做还是找公司做？我倾向于找公司或lab合作做但不知道有哪些公司可以做。大
家推荐一下吧。想合作也可以，嘿嘿。
多谢！
r*z
4 楼
一般bank statement总是需要的。如果你有奖学金，还可以再提供一下授予你
奖学金的offer letter
statement
【在 n*****t 的大作中提到】
: 我要去墨西哥签证了.需要自己证明能付一部分生活费.请问我需要什么证件呢? 银行的
: 一页reference letter证明我有那个存款是否就够了?还是要前面3个的bank statement
: ?或者其他形式的证明?谢谢!
奖学金的offer letter
statement
【在 n*****t 的大作中提到】
: 我要去墨西哥签证了.需要自己证明能付一部分生活费.请问我需要什么证件呢? 银行的
: 一页reference letter证明我有那个存款是否就够了?还是要前面3个的bank statement
: ?或者其他形式的证明?谢谢!
p*r
5 楼
很容易,私下约K见面,说你老板想做code review,可是你对这个项目也有很多没有搞清
楚的地方,你打算code review写以下几点,问他有什么意见.
【在 x******h 的大作中提到】
: 公司开发部门X大项目组涉及的四个人A,K,Q,J
: A是director管所有developer
: K是新来team lead的也是刚刚卓拔成为architect,算是空降,一人之下不少人之上
: Q是老资格team lead,专管X大项,受A管,没提拔她心里应该小不爽
: J是我工作2年多归Q管,K来了以后也时不时帮K干活
: K最近的一个想法要实现可是遇到些困难,于是我在帮他调试的时候,我就自己也写了个
: 差不多的实现,幸运
: 的是我的实现没有出现K遇到的问题,我试着帮K试图解决可是没什么作用
: K就说你要是接手这个小项目当然好,不过要承担责任,程序坏掉了你要负责,他自己反倒
: 轻松了,因为K说话
楚的地方,你打算code review写以下几点,问他有什么意见.
【在 x******h 的大作中提到】
: 公司开发部门X大项目组涉及的四个人A,K,Q,J
: A是director管所有developer
: K是新来team lead的也是刚刚卓拔成为architect,算是空降,一人之下不少人之上
: Q是老资格team lead,专管X大项,受A管,没提拔她心里应该小不爽
: J是我工作2年多归Q管,K来了以后也时不时帮K干活
: K最近的一个想法要实现可是遇到些困难,于是我在帮他调试的时候,我就自己也写了个
: 差不多的实现,幸运
: 的是我的实现没有出现K遇到的问题,我试着帮K试图解决可是没什么作用
: K就说你要是接手这个小项目当然好,不过要承担责任,程序坏掉了你要负责,他自己反倒
: 轻松了,因为K说话
s*y
6 楼
可以用酵母或者昆虫。酵母表达很容易，但是产量很低。
昆虫细胞表达高，其实也挺容易的，但是没有经验的话会弄不明白。而且从头
建立一个昆虫表达系统还是很麻烦的
如果你们没有经验，那就找别的实验室来合作吧，
我推荐两个实验室：
MD Anderson Cancer center, Texas, Sue-hua Lin
Univ of Guelph, Canada, John Dawson
他们两个实验室都经常用昆虫细胞表达蛋白。不过他们都是做研究的实验室，
不是专门的表达中心，所以会不会跟你们合作是未知数。 如果他们对你们的
项目很感兴趣的话，可能会帮忙，不然就不一定了。找他们表达的好处是
一般是不收钱的（合作项目嘛）
公司我就不知道了，应该是有的，但是可能不便宜。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 和大家讨论一些实验的问题
: 背景：老板要一个融合蛋白，本来在海胆（Sea Urchin）里表达的，分子量~85KDa，叫
: Dishevelled，至少有磷酸化的修饰，在Wnt pathway里很重要一蛋白。想和一个tag连
: 在一起，其实最主要的是想得尽可能多的有正确修饰、折叠的天然蛋白用来做Far-
: western blotting研究蛋白相互作用。可是我们都没有表达真核蛋白的经验，用E.
: coli肯定不行。in vitro转录可能表达量不够，做一个Far-Western Blotting要1~50
: μg的蛋白用量，而且指不定得做多少次来摸条件和重复呢。
: 要求：1.正确的修饰、折叠等等；2. 表达量大
: 问题：1. 用什么kit，细胞可以达到以上要求？有人推荐老板用昆虫细胞。
: 2. 自己做还是找公司做？我倾向于找公司或lab合作做但不知道有哪些公司可以做。大
昆虫细胞表达高，其实也挺容易的，但是没有经验的话会弄不明白。而且从头
建立一个昆虫表达系统还是很麻烦的
如果你们没有经验，那就找别的实验室来合作吧，
我推荐两个实验室：
MD Anderson Cancer center, Texas, Sue-hua Lin
Univ of Guelph, Canada, John Dawson
他们两个实验室都经常用昆虫细胞表达蛋白。不过他们都是做研究的实验室，
不是专门的表达中心，所以会不会跟你们合作是未知数。 如果他们对你们的
项目很感兴趣的话，可能会帮忙，不然就不一定了。找他们表达的好处是
一般是不收钱的（合作项目嘛）
公司我就不知道了，应该是有的，但是可能不便宜。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 和大家讨论一些实验的问题
: 背景：老板要一个融合蛋白，本来在海胆（Sea Urchin）里表达的，分子量~85KDa，叫
: Dishevelled，至少有磷酸化的修饰，在Wnt pathway里很重要一蛋白。想和一个tag连
: 在一起，其实最主要的是想得尽可能多的有正确修饰、折叠的天然蛋白用来做Far-
: western blotting研究蛋白相互作用。可是我们都没有表达真核蛋白的经验，用E.
: coli肯定不行。in vitro转录可能表达量不够，做一个Far-Western Blotting要1~50
: μg的蛋白用量，而且指不定得做多少次来摸条件和重复呢。
: 要求：1.正确的修饰、折叠等等；2. 表达量大
: 问题：1. 用什么kit，细胞可以达到以上要求？有人推荐老板用昆虫细胞。
: 2. 自己做还是找公司做？我倾向于找公司或lab合作做但不知道有哪些公司可以做。大
n*t
7 楼
谢谢,bank statement是最近一个月的就够了,还是要3个月的?xiexie
【在 r*****z 的大作中提到】
: 一般bank statement总是需要的。如果你有奖学金，还可以再提供一下授予你
: 奖学金的offer letter
:
: statement
【在 r*****z 的大作中提到】
: 一般bank statement总是需要的。如果你有奖学金，还可以再提供一下授予你
: 奖学金的offer letter
:
: statement
p*8
8 楼
ＬＺ被当枪使是肯定的了.这招借花献佛也是常见的招数.
ＬＺ要看清形势而后动.如果确定自己老板强,就勇敢跳出去抡胳膊突突Ｋ.
如果人家Ｋ有取代你老板的趋势，或者Ｋ要你过去他那里的话,现在就要尽量拖，缩着
不动.
如果实在搞不清,最好捣浆糊.两头不要得罪．具体操作可以装傻,就说自己能力有限,只
清楚自己这块怎么做的,弄不明白Ｋ那里有什么问题.
有人的地方就有江湖,这种空降和老牌的斗争什么结果都有可能.ＬＺ千万不要耍小聪明.
其实LＺ到今天这个地步已经是因为自作主张帮Ｋ帮过头的结果．吃一堑要长一智．
ＬＺ要看清形势而后动.如果确定自己老板强,就勇敢跳出去抡胳膊突突Ｋ.
如果人家Ｋ有取代你老板的趋势，或者Ｋ要你过去他那里的话,现在就要尽量拖，缩着
不动.
如果实在搞不清,最好捣浆糊.两头不要得罪．具体操作可以装傻,就说自己能力有限,只
清楚自己这块怎么做的,弄不明白Ｋ那里有什么问题.
有人的地方就有江湖,这种空降和老牌的斗争什么结果都有可能.ＬＺ千万不要耍小聪明.
其实LＺ到今天这个地步已经是因为自作主张帮Ｋ帮过头的结果．吃一堑要长一智．
c*r
9 楼
多谢多谢！多方打听后准备用昆虫细胞表达。先自己看看文章和这本书（http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%2318066%232009%23995369999%231553090%23FLA%23&_cdi=18066&_pubType=BS&_auth=y&_acct=C000038378&_version=1&_urlVersion=0&_userid=687815&md5=7730b91bf58e8c41c7ee53569b79f494），有点概念之后和一些实验室联系联系看怎么做可行，合作当然做好不过了。
又是一个艰巨的任务啊。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 可以用酵母或者昆虫。酵母表达很容易，但是产量很低。
: 昆虫细胞表达高，其实也挺容易的，但是没有经验的话会弄不明白。而且从头
: 建立一个昆虫表达系统还是很麻烦的
: 如果你们没有经验，那就找别的实验室来合作吧，
: 我推荐两个实验室：
: MD Anderson Cancer center, Texas, Sue-hua Lin
: Univ of Guelph, Canada, John Dawson
: 他们两个实验室都经常用昆虫细胞表达蛋白。不过他们都是做研究的实验室，
: 不是专门的表达中心，所以会不会跟你们合作是未知数。 如果他们对你们的
: 项目很感兴趣的话，可能会帮忙，不然就不一定了。找他们表达的好处是
又是一个艰巨的任务啊。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 可以用酵母或者昆虫。酵母表达很容易，但是产量很低。
: 昆虫细胞表达高，其实也挺容易的，但是没有经验的话会弄不明白。而且从头
: 建立一个昆虫表达系统还是很麻烦的
: 如果你们没有经验，那就找别的实验室来合作吧，
: 我推荐两个实验室：
: MD Anderson Cancer center, Texas, Sue-hua Lin
: Univ of Guelph, Canada, John Dawson
: 他们两个实验室都经常用昆虫细胞表达蛋白。不过他们都是做研究的实验室，
: 不是专门的表达中心，所以会不会跟你们合作是未知数。 如果他们对你们的
: 项目很感兴趣的话，可能会帮忙，不然就不一定了。找他们表达的好处是
x*h
10 楼
明.
更新一下状况:
我决定这个时候不要逞能,K的项目还用K的实现,最近貌似他改了些东西也没啥大问题了
,决定两头捣浆糊
了,至于他们谁技术强很明显是K,可是Q仗着资格老和K硬抗,我看K也拿Q没办法,不过公
司最近找的senior
全是K的人, Q有恐江山不保啊
过两天再看这次小风波结果如何,反正现在局面比较乱,希望我不要成为KQ战争的牺牲品
,最后两个人为了
和解把责任全推到我身上
【在 p******8 的大作中提到】
: ＬＺ被当枪使是肯定的了.这招借花献佛也是常见的招数.
: ＬＺ要看清形势而后动.如果确定自己老板强,就勇敢跳出去抡胳膊突突Ｋ.
: 如果人家Ｋ有取代你老板的趋势，或者Ｋ要你过去他那里的话,现在就要尽量拖，缩着
: 不动.
: 如果实在搞不清,最好捣浆糊.两头不要得罪．具体操作可以装傻,就说自己能力有限,只
: 清楚自己这块怎么做的,弄不明白Ｋ那里有什么问题.
: 有人的地方就有江湖,这种空降和老牌的斗争什么结果都有可能.ＬＺ千万不要耍小聪明.
: 其实LＺ到今天这个地步已经是因为自作主张帮Ｋ帮过头的结果．吃一堑要长一智．
r*r
11 楼
为什么不考虑直接用293表达？这个现在已经不是什么难事了，公司可以做的啊，但自
己做还是比较麻烦，要表达量大方便纯化的话，需要悬浮培养。
如果用昆虫表达，系统建起来没有那么麻烦。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 多谢多谢！多方打听后准备用昆虫细胞表达。先自己看看文章和这本书（http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%2318066%232009%23995369999%231553090%23FLA%23&_cdi=18066&_pubType=BS&_auth=y&_acct=C000038378&_version=1&_urlVersion=0&_userid=687815&md5=7730b91bf58e8c41c7ee53569b79f494），有点概念之后和一些实验室联系联系看怎么做可行，合作当然做好不过了。
: 又是一个艰巨的任务啊。。。
己做还是比较麻烦，要表达量大方便纯化的话，需要悬浮培养。
如果用昆虫表达，系统建起来没有那么麻烦。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 多谢多谢！多方打听后准备用昆虫细胞表达。先自己看看文章和这本书（http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%2318066%232009%23995369999%231553090%23FLA%23&_cdi=18066&_pubType=BS&_auth=y&_acct=C000038378&_version=1&_urlVersion=0&_userid=687815&md5=7730b91bf58e8c41c7ee53569b79f494），有点概念之后和一些实验室联系联系看怎么做可行，合作当然做好不过了。
: 又是一个艰巨的任务啊。。。
p*d
12 楼
有什么问题先问老板再行动，不能自做主张．当然你能力强，打得扯旗
单干的谱另当别论．
单干的谱另当别论．
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