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请教一下关于Lentivirus Packaging
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请教一下关于Lentivirus Packaging# Biology - 生物学
t*n
1
自家的,大概三百颗,都是雕成各种形态的把玩件,还有少量原石,都不是特高级的那
种(国内市场也就是3000-8000人民币不等),要报关吗?一般要交多少钱? 带过来是
自己的项目用的,不是卖的。哪位了解的,先谢谢。
我前年随身带过几十颗,没什么事。
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K*o
2
我正在做Lentivirus,但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
公司的Plat-A细胞,他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
胞。
我的做法是:第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好,然后转染,我直接把
Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
Transfection以后,第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死,但是就黏在
一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后,我把所有的液体收集起来后离心,
然后用上清infect breast cancer cells,效果很差。我觉得应该是Transfection的问
题。版上有人碰过类此的问题么?这到底是怎么回事呀?为什么我的细胞总是转染后漂
起来呢?平常传代的时候它们看着都挺正常的。
有没有其他的办法?或者大家用什么细胞或Reagent做Lentivirus Packaging效果好的
,分享一下?
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d*i
3
你是说总价值3000-8000人民币还是3000-8000一颗?
最安全就是如实申报.
你既然这么问就是想不申报.那总是有风险的,即使100个人告诉你他们没事,碰到你给海
关截了就有事了.

【在 t****n 的大作中提到】
: 自家的,大概三百颗,都是雕成各种形态的把玩件,还有少量原石,都不是特高级的那
: 种(国内市场也就是3000-8000人民币不等),要报关吗?一般要交多少钱? 带过来是
: 自己的项目用的,不是卖的。哪位了解的,先谢谢。
: 我前年随身带过几十颗,没什么事。

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h*n
4
不要换medium,一换293就浮起来了
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x*3
5
要求出口退税
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a*d
6
coat plate with gelatin, that may help
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t*n
7
谢谢楼上两位。
这出口退税是怎么回事?
进一步说明一下,玉石是单件 3000-8000人民币, 那是他们卖给别人的,成本比这少得
多,又因为是当年和人合伙用原石加工得来,都不知道该怎么算这成本。 现在他们不
做这档次的玉石了,而我正想用来做个工艺文化作品,这不,又是自家人,就说让我回
国时自己把东西带来美国,我不用不出一分钱,而且用完后,除了我想留一点,其他的
我还会带回去给回他们。
这么一想,难道我进出都交税?按市价可是一两百万的东西,这怎得了,要是不按,又
该是怎样算合适?再说我是免费得来的,到时候还会还回去。

【在 x**3 的大作中提到】
: 要求出口退税
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h*n
8
polylysin 效果比这个好

【在 a****d 的大作中提到】
: coat plate with gelatin, that may help
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K*o
9
可我有时候没换,他们也浮起来了。这是不是很不正常?
你也是用293细胞么?我看到有些公司卖专门用来Packaging Lentivirus 的细胞,广告
上倒是写的不错,但也不知道到底好不好用。
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K*o
10
我倒是试过Gelatin coating,但好像效果差别不大。明天我去试试PolyLysine,希望
能成
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a*n
11
转染的时候细胞密度太大了

Labs

【在 K*o 的大作中提到】
: 我正在做Lentivirus,但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
: 公司的Plat-A细胞,他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
: 胞。
: 我的做法是:第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好,然后转染,我直接把
: Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
: Transfection以后,第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死,但是就黏在
: 一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后,我把所有的液体收集起来后离心,
: 然后用上清infect breast cancer cells,效果很差。我觉得应该是Transfection的问
: 题。版上有人碰过类此的问题么?这到底是怎么回事呀?为什么我的细胞总是转染后漂
: 起来呢?平常传代的时候它们看着都挺正常的。

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s*a
12
我没coat ATCC买的
第一次就怎么都要飘
写信骂了他们一顿 给我换了一批 长的就特别好 也不怎么飘

【在 K*o 的大作中提到】
: 我倒是试过Gelatin coating,但好像效果差别不大。明天我去试试PolyLysine,希望
: 能成

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b*k
13
细胞密度可能太高了。293细胞很容易浮起。任何动作都要温柔。
我们用TRANSIT,转了以后1.5-2天后,直接收集media,每12小时一次(收旧的,换新的
),共3-4次。然后,离心。

Labs

【在 K*o 的大作中提到】
: 我正在做Lentivirus,但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
: 公司的Plat-A细胞,他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
: 胞。
: 我的做法是:第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好,然后转染,我直接把
: Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
: Transfection以后,第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死,但是就黏在
: 一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后,我把所有的液体收集起来后离心,
: 然后用上清infect breast cancer cells,效果很差。我觉得应该是Transfection的问
: 题。版上有人碰过类此的问题么?这到底是怎么回事呀?为什么我的细胞总是转染后漂
: 起来呢?平常传代的时候它们看着都挺正常的。

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K*o
14
那10cm的盘,细胞密度大概种的时候该是多少比较合适呢?
你说的TransIT是指TransIT2010 还是TransIT-293?还是都一样?
每12个小时换液,细胞不会浮起来么?
不好意思,问的比较细,实在是被这个问题困扰了太久。
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r*r
15
这个牛:)

【在 s****a 的大作中提到】
: 我没coat ATCC买的
: 第一次就怎么都要飘
: 写信骂了他们一顿 给我换了一批 长的就特别好 也不怎么飘

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