请教3T3 cell做immunostaining的问题 - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

请教3T3 cell做immunostaining的问题

请教3T3 cell做immunostaining的问题# Biology - 生物学

l*l2010-05-13 07:05

1 楼

这票选的, 刚刚的! 真心点赞!

t*r2010-05-13 07:05

2 楼

我在考虑自己要不要给自己买3个月的保险先。美国看病看不起。
有推荐的这方面保险么？
还有，我这公司的这种作法普遍么？？还是我们公司小气啊？

j*g2010-05-13 07:05

3 楼

一般养在P-D-L coated cover slip上，用PBS洗两次，用4%PFA fix for 20min.
问题是PBS一洗细胞很容易缩，等到全部staining做完已经没有剩几个了。试过不同的
density好像都有这个问题。想请教一下有没有人有这方面的经验，能拿到如同culture
medium里面同样长得漂亮的细胞，谢谢。

j*52010-05-13 07:05

4 楼

天道酬勤啊~~~~我希望股友不要指望老是从大妈这儿得到鱼，而是要动脑筋自己学会如
何钓鱼，我也不可能一直陪你们玩儿，
我在这个版上之前分享了那么多，唉，希望有心人能自己去看，虽然我废话也比较多，
可能挑选贴子的工作比较费时间~~~~~~~

d*s2010-05-13 07:05

5 楼

不普遍，很小气

j*g2010-05-13 07:05

6 楼

补充，是NIH/3T3 cells.

culture

【在 j****g 的大作中提到】

: 一般养在P-D-L coated cover slip上，用PBS洗两次，用4%PFA fix for 20min.
: 问题是PBS一洗细胞很容易缩，等到全部staining做完已经没有剩几个了。试过不同的
: density好像都有这个问题。想请教一下有没有人有这方面的经验，能拿到如同culture
: medium里面同样长得漂亮的细胞，谢谢。

l*l2010-05-13 07:05

7 楼

赞dama好人品!

B*g2010-05-13 07:05

8 楼

你不是我们公司的吧

【在 t**r 的大作中提到】

: 我在考虑自己要不要给自己买3个月的保险先。美国看病看不起。
: 有推荐的这方面保险么？
: 还有，我这公司的这种作法普遍么？？还是我们公司小气啊？

S*e2010-05-13 07:05

9 楼

coated the dish with ECM such as Fn

D*a2010-05-13 07:05

10 楼

嗯嗯，一直从大妈还有班上各位大牛各种帖子里学习哈
感觉比以前有思路
话说大学我还修了证券投资，都没有学会。。。。

s*e2010-05-13 07:05

11 楼

错，很普遍。

【在 d*****s 的大作中提到】

: 不普遍，很小气

s*y2010-05-13 07:05

12 楼

Easy, fixed then first, then wash.

culture

【在 j****g 的大作中提到】

w*82010-05-13 07:05

13 楼

赞天道酬勤

【在 j**********5 的大作中提到】

: 天道酬勤啊~~~~我希望股友不要指望老是从大妈这儿得到鱼，而是要动脑筋自己学会如
: 何钓鱼，我也不可能一直陪你们玩儿，
: 我在这个版上之前分享了那么多，唉，希望有心人能自己去看，虽然我废话也比较多，
: 可能挑选贴子的工作比较费时间~~~~~~~

R*i2010-05-13 07:05

14 楼

Do you have an option for COBA coverage from the last job?

S*s2010-05-13 07:05

15 楼

你用 4% PFA fix 20 分钟是不是顺便破细胞了？如果是的话你可以考虑用 BD
Biosciences 的 CytoFix/CytoPerm。我同时染两组细胞，一组用 1% PFA fix 15 分钟
染细胞表面蛋白，另一组用 CytoFix/CytoPerm fix 15 分钟染全细胞，CytoFix 处理
的细胞贴壁非常好，PFA fix 的细胞还是很容易掉。我用的是 glass bottom dish，
poly-L-ornithine 37C 处理过夜，第二天用水洗三次。