F*4
2 楼
本人F1学生，5月20-23要随老板去台湾开会。得到开会通知之前打算回国休假一个月，
并已订好机票，4月22回国，5月26返美。所以现在的计划是我按原计划回国，在国内办
理入台证，然后买国内到台湾的往返机票，最后再从国内返美。不知道这个行程可不可
行，我是以美国学校学生的身份去开会，台湾的邀请函也是发到美国，所以想请教一下
我是否可以以美国学生的身份在国内办理入台证。如果入台证能够办下来，是否就能保
证一定可以出入台湾，会不会在海关因为某些原因而禁止入境。
如果以上计划不可行，我就要考虑改变回国计划，从美国出发去台湾。
谢谢！
并已订好机票，4月22回国，5月26返美。所以现在的计划是我按原计划回国，在国内办
理入台证，然后买国内到台湾的往返机票，最后再从国内返美。不知道这个行程可不可
行，我是以美国学校学生的身份去开会，台湾的邀请函也是发到美国，所以想请教一下
我是否可以以美国学生的身份在国内办理入台证。如果入台证能够办下来，是否就能保
证一定可以出入台湾，会不会在海关因为某些原因而禁止入境。
如果以上计划不可行，我就要考虑改变回国计划，从美国出发去台湾。
谢谢！
w*o
3 楼
【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
标 题: 公司同事过生日，搞party，送什么好呢
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
同事，男，30来岁，单身，老美
大家说说送啥好
发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
标 题: 公司同事过生日，搞party，送什么好呢
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
同事，男，30来岁，单身，老美
大家说说送啥好
s*m
4 楼
呵呵
n*e
5 楼
(1)韭菜地里长了青苔，是啥原因？该怎么去除？刚割了一茬韭菜，还没有施肥料。是
先除青苔还是先施肥？
(2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
品种原因还是怎么的？
(3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
主要是很密，根估计都挨着。
谢谢
先除青苔还是先施肥？
(2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
品种原因还是怎么的？
(3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
主要是很密，根估计都挨着。
谢谢
s*d
6 楼
我昨天把键盘上的键拆下来洗，结果A键掉进下水道了。有谁做做好人，寄个A键给我啊？
愿意出钱购买。
愿意出钱购买。
x*8
7 楼
本人比较菜，作GV3101的电转感受态细胞。懒，先过夜小培养5ml LB，在第二日下午扩
大培养又过夜，第三天早上开始作感受态，没有测od值。用10%甘油洗3次，最后重悬。
结果用一质粒验证，电转2kv，25UF，200欧密嘎，4.4ms电击时间。最后发现一个转化
子都没有。不知问题在哪？大家都是怎么作的啊？求指点，谢谢。
大培养又过夜，第三天早上开始作感受态，没有测od值。用10%甘油洗3次，最后重悬。
结果用一质粒验证，电转2kv，25UF，200欧密嘎，4.4ms电击时间。最后发现一个转化
子都没有。不知问题在哪？大家都是怎么作的啊？求指点，谢谢。
M*s
8 楼
和做饭差不多。
很多人都会作，水平有些差别而已。
还要看时间是否值得。
很多人都会作，水平有些差别而已。
还要看时间是否值得。
i*i
9 楼
关注下，没参加过，关键是没被邀请过，嘿嘿
B*g
10 楼
没受到呀
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
l*d
11 楼
1）潮湿的原因，没有关系，松松土施肥就行了；
2,3）赶快吃了吧，如果不是抗热品种，很快就开花了。
【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔，是啥原因？该怎么去除？刚割了一茬韭菜，还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥？
: (2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
: 品种原因还是怎么的？
: (3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
: 主要是很密，根估计都挨着。
: 谢谢
2,3）赶快吃了吧，如果不是抗热品种，很快就开花了。
【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔，是啥原因？该怎么去除？刚割了一茬韭菜，还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥？
: (2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
: 品种原因还是怎么的？
: (3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
: 主要是很密，根估计都挨着。
: 谢谢
f*j
12 楼
找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
啊？
【在 s*******d 的大作中提到】
: 我昨天把键盘上的键拆下来洗，结果A键掉进下水道了。有谁做做好人，寄个A键给我啊？
: 愿意出钱购买。
啊？
【在 s*******d 的大作中提到】
: 我昨天把键盘上的键拆下来洗，结果A键掉进下水道了。有谁做做好人，寄个A键给我啊？
: 愿意出钱购买。
x*8
13 楼
顶
i*t
14 楼
所谓专业人士，很多都瞎弄，全退的都有，最后等audit补交罚款的不少
【在 s****1 的大作中提到】
: 怎么好多人跑到外面找专业人士报，能退很多呀，这有很多技巧吗？
【在 s****1 的大作中提到】
: 怎么好多人跑到外面找专业人士报，能退很多呀，这有很多技巧吗？
i*a
15 楼
Group gift
otherwise gift card.
otherwise gift card.
R*s
16 楼
请去wbcenter申请提高上限到50，像这个贴
http://www.mitbbs.com/article_t/WBCenter/12526405.html
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
http://www.mitbbs.com/article_t/WBCenter/12526405.html
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
n*e
17 楼
韭菜根还在地里，怎么翻土啊？可以加石灰改善吗？
y*n
18 楼
聪明。
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
g*4
19 楼
靠，现代人！
M*s
20 楼
可别随便打击一大片哦。
瞎弄的你可以叫他们骗子。
就别提专业人士这几个字了。
【在 i*****t 的大作中提到】
: 所谓专业人士，很多都瞎弄，全退的都有，最后等audit补交罚款的不少
瞎弄的你可以叫他们骗子。
就别提专业人士这几个字了。
【在 i*****t 的大作中提到】
: 所谓专业人士，很多都瞎弄，全退的都有，最后等audit补交罚款的不少
e*e
21 楼
amazon gc
amount enough to cover your cost
【在 w********o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
: 发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
: 标 题: 公司同事过生日，搞party，送什么好呢
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
: 同事，男，30来岁，单身，老美
: 大家说说送啥好
amount enough to cover your cost
【在 w********o 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
: 发信人: wokaowokao (GaN), 信区: Boston
: 标 题: 公司同事过生日，搞party，送什么好呢
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 30 15:15:23 2011, 美东)
: 同事，男，30来岁，单身，老美
: 大家说说送啥好
c*6
22 楼
财主啊！排包子
L*1
23 楼
松土，不是翻土。
【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里，怎么翻土啊？可以加石灰改善吗？
【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里，怎么翻土啊？可以加石灰改善吗？
x*n
24 楼
F12有用啊, 选择启动设备
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
a*o
25 楼
脓杆菌电转感受态很简单，过夜的菌液，很浓，不需在意OD，用冷水洗5遍，（10%甘油
洗一下），10%甘油重悬。10毫升菌液可以最后重悬在500ul里。电转2.5kv, 400欧，~
7ms. 加1ml培养基，复苏2小时。对于质粒转化，涂1ul就可以得到很多colony.
【在 x******8 的大作中提到】
: 本人比较菜，作GV3101的电转感受态细胞。懒，先过夜小培养5ml LB，在第二日下午扩
: 大培养又过夜，第三天早上开始作感受态，没有测od值。用10%甘油洗3次，最后重悬。
: 结果用一质粒验证，电转2kv，25UF，200欧密嘎，4.4ms电击时间。最后发现一个转化
: 子都没有。不知问题在哪？大家都是怎么作的啊？求指点，谢谢。
洗一下），10%甘油重悬。10毫升菌液可以最后重悬在500ul里。电转2.5kv, 400欧，~
7ms. 加1ml培养基，复苏2小时。对于质粒转化，涂1ul就可以得到很多colony.
【在 x******8 的大作中提到】
: 本人比较菜，作GV3101的电转感受态细胞。懒，先过夜小培养5ml LB，在第二日下午扩
: 大培养又过夜，第三天早上开始作感受态，没有测od值。用10%甘油洗3次，最后重悬。
: 结果用一质粒验证，电转2kv，25UF，200欧密嘎，4.4ms电击时间。最后发现一个转化
: 子都没有。不知问题在哪？大家都是怎么作的啊？求指点，谢谢。
i*t
26 楼
呵呵，看看几年前的帖子就知道了技巧，都是所谓专业帮弄得，F1那点钱+协议，居然
还能弄出窍门，那就是免税的窍门啦，最后audit罚款的一大堆。
【在 M*******s 的大作中提到】
: 可别随便打击一大片哦。
: 瞎弄的你可以叫他们骗子。
: 就别提专业人士这几个字了。
还能弄出窍门，那就是免税的窍门啦，最后audit罚款的一大堆。
【在 M*******s 的大作中提到】
: 可别随便打击一大片哦。
: 瞎弄的你可以叫他们骗子。
: 就别提专业人士这几个字了。
w*o
27 楼
gc，这么直接啊
【在 i****a 的大作中提到】
: Group gift
: otherwise gift card.
【在 i****a 的大作中提到】
: Group gift
: otherwise gift card.
m*y
28 楼
http://www.mitbbs.com/article_t1/EB23/31356219_0_48.html
发信人: myhoney (dear), 信区: EB23
标 题: Re: 普天同庆，发包子
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 12 01:03:51 2011, 美东)
发信人: myhoney (dear), 信区: EB23
标 题: Re: 普天同庆，发包子
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 12 01:03:51 2011, 美东)
y*8
29 楼
青苔本身就是绿肥，可以忽略不计直接施肥。
青江菜和油菜都是冬菜，现在不是季节。
【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔，是啥原因？该怎么去除？刚割了一茬韭菜，还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥？
: (2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
: 品种原因还是怎么的？
: (3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
: 主要是很密，根估计都挨着。
: 谢谢
青江菜和油菜都是冬菜，现在不是季节。
【在 n********e 的大作中提到】
: (1)韭菜地里长了青苔，是啥原因？该怎么去除？刚割了一茬韭菜，还没有施肥料。是
: 先除青苔还是先施肥？
: (2)中国店买的青江菜种子，现在大概长到5到10cm高了。但是发现很多开始开花了，是
: 品种原因还是怎么的？
: (3)油菜开始是撒的种子，很密。现在也到5cm高了，可以移植吧？移植会伤的利害吗？
: 主要是很密，根估计都挨着。
: 谢谢
s*d
30 楼
idea不错，我扣了个小键盘上的键下来，反正也用不着小键盘。感谢。
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
【在 f***j 的大作中提到】
: 找个不用的键替代(F12 Pause ScrLk Insert 之类)
:
: 啊？
J*n
31 楼
被你电死了吧，转农杆菌超简单
w*o
32 楼
这玩意太赤裸了吧
【在 e**e 的大作中提到】
: amazon gc
: amount enough to cover your cost
【在 e**e 的大作中提到】
: amazon gc
: amount enough to cover your cost
l*e
33 楼
GX
n*e
34 楼
xiexie. 那5区农民夏天吃啥青菜啊?
【在 y*****8 的大作中提到】
: 青苔本身就是绿肥，可以忽略不计直接施肥。
: 青江菜和油菜都是冬菜，现在不是季节。
【在 y*****8 的大作中提到】
: 青苔本身就是绿肥，可以忽略不计直接施肥。
: 青江菜和油菜都是冬菜，现在不是季节。
I*9
35 楼
我这个傻逼dell键盘连个没用的键都找不到
用的最少的是insert...
用的最少的是insert...
h*e
36 楼
>20kb的质粒是不是很难转进去啊？ 还有大家是怎么鉴定的？我每次都用酶切，不好判
断，因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢
断，因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢
s*e
37 楼
gongxi
y*8
38 楼
夏天应该是种瓜点豆：黄瓜，丝瓜，冬瓜等，四季豆，豇豆，扁豆等，还可以种青椒，
蕃茄，茄子等等。
夏天可种的叶子菜不多，我只知道几种：空心菜，红薯叶，龙须菜（佛手瓜的嫩芽）。
【在 n********e 的大作中提到】
: xiexie. 那5区农民夏天吃啥青菜啊?
蕃茄，茄子等等。
夏天可种的叶子菜不多，我只知道几种：空心菜，红薯叶，龙须菜（佛手瓜的嫩芽）。
【在 n********e 的大作中提到】
: xiexie. 那5区农民夏天吃啥青菜啊?
x*8
39 楼
thank you guys! I feel shameful about myself after reading your notes.:)
Anyway, how about the quality of plasmid? Is there some special requirement
for it?
Anyway, how about the quality of plasmid? Is there some special requirement
for it?
O*2
40 楼
did not get baozi :(
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
l*6
41 楼
不用管青苔，不影响你收韭菜。
【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里，怎么翻土啊？可以加石灰改善吗？
【在 n********e 的大作中提到】
: 韭菜根还在地里，怎么翻土啊？可以加石灰改善吗？
x*8
42 楼
And,
1. how about the difference between different isolates, e.g. LBA4404 or
GV3101 etc.?
2. Can I use the isolate that is grown on LB plate and put in 4 degrees for
2 weeks?
3. Do I need add some antibiotics, such as rafimycin or gentamycin for
GV3101 when I prepare overnight culture?
Thanks a lot.
1. how about the difference between different isolates, e.g. LBA4404 or
GV3101 etc.?
2. Can I use the isolate that is grown on LB plate and put in 4 degrees for
2 weeks?
3. Do I need add some antibiotics, such as rafimycin or gentamycin for
GV3101 when I prepare overnight culture?
Thanks a lot.
r*r
43 楼
???
i*e
44 楼
油菜快吃！！！！
我家阿姨种错了，结果10cm 开花。
夏菜增加： 木耳菜，南瓜秧子，枸杞菜
我家阿姨种错了，结果10cm 开花。
夏菜增加： 木耳菜，南瓜秧子，枸杞菜
x*8
45 楼
让您见笑了。那我降低电压试试？
您可以具体指点下不？
【在 J****n 的大作中提到】
: 被你电死了吧，转农杆菌超简单
您可以具体指点下不？
【在 J****n 的大作中提到】
: 被你电死了吧，转农杆菌超简单
z*0
46 楼
GX
x*8
47 楼
我的11k多，是否也是原因？找个小的试验下。
我觉得鉴定的话是否可以作pcr？
【在 h***e 的大作中提到】
: >20kb的质粒是不是很难转进去啊？ 还有大家是怎么鉴定的？我每次都用酶切，不好判
: 断，因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢
我觉得鉴定的话是否可以作pcr？
【在 h***e 的大作中提到】
: >20kb的质粒是不是很难转进去啊？ 还有大家是怎么鉴定的？我每次都用酶切，不好判
: 断，因为本身都有农杆菌本身就自带质粒。谢谢
o*e
48 楼
when can I get Baozi?
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
h*e
49 楼
小的很好转的 一般只要抗性有就OK，最好抗生素浓度调高点。PCR也可以的，但是只能
检测部分序列。不过我感觉还是酶切放心，但就是容易降解，带很难分辨。
【在 x******8 的大作中提到】
: 我的11k多，是否也是原因？找个小的试验下。
: 我觉得鉴定的话是否可以作pcr？
检测部分序列。不过我感觉还是酶切放心，但就是容易降解，带很难分辨。
【在 x******8 的大作中提到】
: 我的11k多，是否也是原因？找个小的试验下。
: 我觉得鉴定的话是否可以作pcr？
y*n
50 楼
没收到啊？
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
【在 s*****m 的大作中提到】
: 呵呵
c*7
51 楼
难道我最土么？我咋记得OD一定要测，很关键
H*S
52 楼
pai
x*8
53 楼
化学感受态成功了，呵呵
o*x
54 楼
gx
x*8
55 楼
自己上来更新下。
我重新设置了对照，使用了一个小的质粒7k左右，验证我的感受态细胞是没有问题的，
效率还可以；但是我的目的质粒是11k多点，这样的话，就很难转进去了。同一批次的
感受态，转对照没有任何问题，也就是大家说的'转农杆菌很容易‘的说法。但是我的
大质粒是很难转进去，即使转了有几个克隆长出来，效率是很低了。大家展开说说转大
质粒有什么方法吗？楼上的一个说转20k的，你作的如何？
我重新设置了对照，使用了一个小的质粒7k左右，验证我的感受态细胞是没有问题的，
效率还可以；但是我的目的质粒是11k多点，这样的话，就很难转进去了。同一批次的
感受态，转对照没有任何问题，也就是大家说的'转农杆菌很容易‘的说法。但是我的
大质粒是很难转进去，即使转了有几个克隆长出来，效率是很低了。大家展开说说转大
质粒有什么方法吗？楼上的一个说转20k的，你作的如何？
o*y
56 楼
等
h*e
57 楼
>20k的效率很低，长很多的克隆有可能不对
反正我转的都不怎么好 不好验证对不对
反正我转的都不怎么好 不好验证对不对
w*4
58 楼
pai baozi
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