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在跑SDS胶做Mass Spec之前如何有效出去elution sample中的3XFLAG肽
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在跑SDS胶做Mass Spec之前如何有效出去elution sample中的3XFLAG肽# Biology - 生物学
f*e
1
谢谢
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n*r
2
想买一台送给国内的长辈,有什么好推荐的吗?
谢谢了。
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r*y
3
我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来(4ml 洗脱
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢
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M*s
4
要看什么收入
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l*j
5
似乎电脑系统是中文 它就自动同步成中文

【在 n*****r 的大作中提到】
: 想买一台送给国内的长辈,有什么好推荐的吗?
: 谢谢了。

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a*n
6
没有必要去除FLAG吧?跑到胶里面自然就跑出去了
样品不浓缩试试?样品太粘的话说明蛋白浓度过大

bait
10%

【在 r*********y 的大作中提到】
: 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来(4ml 洗脱
: 体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
: G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
: 3FLAG在样品里。
: 另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
: 蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
: Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
: (1) 如何除去多余的3FLAG
: (2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
: 谢谢

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n*r
7
啥意思?
有没有类似电脑操作系统那样的东西,电脑的话只有旗舰版的操作系统才能下载语言包。

【在 l***j 的大作中提到】
: 似乎电脑系统是中文 它就自动同步成中文
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r*y
8
不浓缩做WB没问题。样品里有总共2mg的3FLAG, 不除去交胶都跑不动。Bait蛋白浓度太
稀,我想 都上到一个well里,在送去做mass spec.
在 ankyrin (漂泊Boston) 的大作中提到: 】
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n*r
9
直接在apple网站买好呢,还是到店里买好,价格差别大吗?local店有一段距离。
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p*d
10
選settings-general-international。

包。

【在 n*****r 的大作中提到】
: 啥意思?
: 有没有类似电脑操作系统那样的东西,电脑的话只有旗舰版的操作系统才能下载语言包。

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x*l
11
Yes. Setting,general, international, language, change it to simplified
Chinese.

【在 n*****r 的大作中提到】
: 想买一台送给国内的长辈,有什么好推荐的吗?
: 谢谢了。

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n*r
12
确定有这setting吧?谢谢。

【在 p**********d 的大作中提到】
: 選settings-general-international。
:
: 包。

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l*j
13
反正苹果的东西挺难用的 老年人估计用不起来

包。

【在 n*****r 的大作中提到】
: 啥意思?
: 有没有类似电脑操作系统那样的东西,电脑的话只有旗舰版的操作系统才能下载语言包。

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x*l
14
Same. There is sales online for refurbished iPad. Good deals.

【在 n*****r 的大作中提到】
: 直接在apple网站买好呢,还是到店里买好,价格差别大吗?local店有一段距离。
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n*r
15
thanks, should I buy it on apple website or local store?

【在 x**l 的大作中提到】
: Yes. Setting,general, international, language, change it to simplified
: Chinese.

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n*r
16
哪里能买到refurbnished的?质量差吗?外观上看得出是旧的吗?
谢谢。

【在 x**l 的大作中提到】
: Same. There is sales online for refurbished iPad. Good deals.
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n*r
17
我也不知道买啥礼物好,表示下心意就行啦。

【在 l***j 的大作中提到】
: 反正苹果的东西挺难用的 老年人估计用不起来
:
: 包。

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n*r
18
再问一土问题:在国内没无线上网时,能用网线上网吗?有网线接口吗?
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p*d
19
火星人?蘋果的東西就是以好用著稱的,不然也不會這麼受男女老幼的歡迎。

【在 l***j 的大作中提到】
: 反正苹果的东西挺难用的 老年人估计用不起来
:
: 包。

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l*j
20
不能

【在 n*****r 的大作中提到】
: 再问一土问题:在国内没无线上网时,能用网线上网吗?有网线接口吗?
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l*j
21
你把ipad给你妈 让她弄个电影进去看 你看她能不能弄进去

【在 p**********d 的大作中提到】
: 火星人?蘋果的東西就是以好用著稱的,不然也不會這麼受男女老幼的歡迎。
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n*r
22
那在他家估计不能上网。

【在 l***j 的大作中提到】
: 不能
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l*o
23
这个妈要是会下载盗版电影,还会怕学不会用iPad??

【在 l***j 的大作中提到】
: 你把ipad给你妈 让她弄个电影进去看 你看她能不能弄进去
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p*d
24
無線路由器?一百塊就有了。

【在 n*****r 的大作中提到】
: 再问一土问题:在国内没无线上网时,能用网线上网吗?有网线接口吗?
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p*d
25
我們家電腦上的電影都是我下載的。用ipad直接去網上看就好了,為啥還要通過電腦?

【在 l******o 的大作中提到】
: 这个妈要是会下载盗版电影,还会怕学不会用iPad??
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l*j
26
你和他是一个妈? 知道的这么清楚

【在 l******o 的大作中提到】
: 这个妈要是会下载盗版电影,还会怕学不会用iPad??
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n*r
28
不知道,我想没有,长辈又不经常上网。不想特地问这个问题,送礼物还是事先不透露
为佳。

【在 p**********d 的大作中提到】
: 無線路由器?一百塊就有了。
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x*l
29
That is not true. I showed my iPad to my parents and my grandpa, they all
found it easy to learn. Especially for old
people. Touch interface much easier to learn than a mouse. Also they can
zoom it in easily.

【在 l***j 的大作中提到】
: 反正苹果的东西挺难用的 老年人估计用不起来
:
: 包。

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x*l
31
You are welcome. Also, based on my experience, you should install games,
upload some books, and load lots of
pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
grandparents mainly use it to play games, look at
pictures and listen to music.

【在 n*****r 的大作中提到】
: 哦,就他们自己网站啊,谢谢。
:
: refurbished

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n*r
32
我自己电脑硬件基本空白,我不fan这些。我也没啥时间下载再弄到ipad里面,送一个
表示心意,让他
们自己孩子去弄这些。
谢谢建议。

【在 x**l 的大作中提到】
: You are welcome. Also, based on my experience, you should install games,
: upload some books, and load lots of
: pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
: grandparents mainly use it to play games, look at
: pictures and listen to music.

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