n*r
2 楼
想买一台送给国内的长辈,有什么好推荐的吗?
谢谢了。
谢谢了。
r*y
3 楼
我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来(4ml 洗脱
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢
M*s
4 楼
要看什么收入
a*n
6 楼
没有必要去除FLAG吧?跑到胶里面自然就跑出去了
样品不浓缩试试?样品太粘的话说明蛋白浓度过大
bait
10%
【在 r*********y 的大作中提到】
: 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来(4ml 洗脱
: 体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
: G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
: 3FLAG在样品里。
: 另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
: 蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
: Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
: (1) 如何除去多余的3FLAG
: (2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
: 谢谢
样品不浓缩试试?样品太粘的话说明蛋白浓度过大
bait
10%
【在 r*********y 的大作中提到】
: 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来(4ml 洗脱
: 体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
: G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩,发现还有很多
: 3FLAG在样品里。
: 另外我的样品在浓缩之后很粘,上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared(我的bait
: 蛋白最多200ng)。所有纯化,浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
: Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
: (1) 如何除去多余的3FLAG
: (2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
: 谢谢
r*y
8 楼
不浓缩做WB没问题。样品里有总共2mg的3FLAG, 不除去交胶都跑不动。Bait蛋白浓度太
稀,我想 都上到一个well里,在送去做mass spec.
在 ankyrin (漂泊Boston) 的大作中提到: 】
稀,我想 都上到一个well里,在送去做mass spec.
在 ankyrin (漂泊Boston) 的大作中提到: 】
n*r
9 楼
直接在apple网站买好呢,还是到店里买好,价格差别大吗?local店有一段距离。
n*r
18 楼
再问一土问题:在国内没无线上网时,能用网线上网吗?有网线接口吗?
x*l
27 楼
http://store.apple.com/us/browse/home/specialdeals/ipad?mco=OTY2ODY4NQ
It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
computer from apple. Quality is pretty good.
【在 n*****r 的大作中提到】
: 哪里能买到refurbnished的?质量差吗?外观上看得出是旧的吗?
: 谢谢。
It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
computer from apple. Quality is pretty good.
【在 n*****r 的大作中提到】
: 哪里能买到refurbnished的?质量差吗?外观上看得出是旧的吗?
: 谢谢。
n*r
30 楼
哦,就他们自己网站啊,谢谢。
refurbished
【在 x**l 的大作中提到】
: http://store.apple.com/us/browse/home/specialdeals/ipad?mco=OTY2ODY4NQ
: It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
: computer from apple. Quality is pretty good.
refurbished
【在 x**l 的大作中提到】
: http://store.apple.com/us/browse/home/specialdeals/ipad?mco=OTY2ODY4NQ
: It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
: computer from apple. Quality is pretty good.
x*l
31 楼
You are welcome. Also, based on my experience, you should install games,
upload some books, and load lots of
pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
grandparents mainly use it to play games, look at
pictures and listen to music.
【在 n*****r 的大作中提到】
: 哦,就他们自己网站啊,谢谢。
:
: refurbished
upload some books, and load lots of
pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
grandparents mainly use it to play games, look at
pictures and listen to music.
【在 n*****r 的大作中提到】
: 哦,就他们自己网站啊,谢谢。
:
: refurbished
n*r
32 楼
我自己电脑硬件基本空白,我不fan这些。我也没啥时间下载再弄到ipad里面,送一个
表示心意,让他
们自己孩子去弄这些。
谢谢建议。
【在 x**l 的大作中提到】
: You are welcome. Also, based on my experience, you should install games,
: upload some books, and load lots of
: pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
: grandparents mainly use it to play games, look at
: pictures and listen to music.
表示心意,让他
们自己孩子去弄这些。
谢谢建议。
【在 x**l 的大作中提到】
: You are welcome. Also, based on my experience, you should install games,
: upload some books, and load lots of
: pictures and musics on to the iPad before giving it to the elders. My
: grandparents mainly use it to play games, look at
: pictures and listen to music.
n*r
33 楼
这网站买的,从深圳邮寄过来啊?
refurbished
【在 x**l 的大作中提到】
: http://store.apple.com/us/browse/home/specialdeals/ipad?mco=OTY2ODY4NQ
: It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
: computer from apple. Quality is pretty good.
refurbished
【在 x**l 的大作中提到】
: http://store.apple.com/us/browse/home/specialdeals/ipad?mco=OTY2ODY4NQ
: It should look completely new from outside. Lots of people buy refurbished
: computer from apple. Quality is pretty good.
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