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该如何分开与insert大小相近的vector呢？
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该如何分开与insert大小相近的vector呢？# Biology - 生物学
y*o
1 楼
我做我自己老板的TA.他问我你要不要上课，我说不要。他马上生气了，说你怎么可以
说不要呢？
然后批评了一大通。我很委屈，首先我以前做别人的TA就不要上课。然后TA的职责里也
没有规定必须要上课。最后，他既然问我要不要，那我当然有可能说不要了，他如果认
为我必须要上，又何必要问我？又何必要批评我？
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b*n
2 楼
以下为签经:
V:你们这次去美国做什么?
P:看望儿子媳妇
V:他们在美国做什么?
P:他们在...........
V:你们还有孩子在美国么?
P:没有.
V:你们的签证通过了,可以买飞机票去美国了.
感谢本版提供的各种总结经验.
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m*r
3 楼
突然发现h1b预约,九月份的只有ottawa了
vancounva 可能还有最近有预约吗?
ottawa飞过去太远了
大家怎么看?
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M*m
5 楼
酶切后我的gene 是3.3 vector是 3.4，该怎么跑胶才能把他俩分开我好回收我的片断
？我用的PcR-XL-TOPO，vector其他区域有没有可以被酶切的这样vector size变小就可
以回收我的片断了？或者跑0.5%的DNA gel跑远些 可行吗？
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f*h
6 楼
You boss was in a bad mood.
I nerve sit in the class I was taing.
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m*r
7 楼
Trip Purpose: Persons in Specialty Occupation (H-1B and/or related H4) [
Edit]
Consulate: Vancouver [Edit]
DHL Branch: Richmond [Edit]
Next Available Appointment is in 151 day(s)
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b*t
8 楼
那个link里不是说得很清楚了么
"I used a Dremel to cut out the backend of the slot. This way I could fit
any PCIe card into a x1 PCIe slot. The advantage of this is that you won't
be voiding the motherboard or video card warranty. "
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m*z
9 楼
should increase gel concentration not decrease ba
vector usually has other restriction sites you can use for your purpose

【在 M****m 的大作中提到】
: 酶切后我的gene 是3.3 vector是 3.4，该怎么跑胶才能把他俩分开我好回收我的片断
: ？我用的PcR-XL-TOPO，vector其他区域有没有可以被酶切的这样vector size变小就可
: 以回收我的片断了？或者跑0.5%的DNA gel跑远些 可行吗？
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F*y
10 楼
lab不要，recitation还是去上课的好，起码不会跟学生讲和上课冲突的东西。

【在 y******o 的大作中提到】
: 我做我自己老板的TA.他问我你要不要上课，我说不要。他马上生气了，说你怎么可以
: 说不要呢？
: 然后批评了一大通。我很委屈，首先我以前做别人的TA就不要上课。然后TA的职责里也
: 没有规定必须要上课。最后，他既然问我要不要，那我当然有可能说不要了，他如果认
: 为我必须要上，又何必要问我？又何必要批评我？
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d*e
11 楼
每天不断刷,有可能有人取消了那你就可以填上.

【在 m*********r 的大作中提到】
: 突然发现h1b预约,九月份的只有ottawa了
: vancounva 可能还有最近有预约吗?
: ottawa飞过去太远了
: 大家怎么看?
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p*r
12 楼
一直没想明白，早上在frys看了一眼主板，豁然开朗

【在 b***t 的大作中提到】
: 那个link里不是说得很清楚了么
: "I used a Dremel to cut out the backend of the slot. This way I could fit
: any PCIe card into a x1 PCIe slot. The advantage of this is that you won't
: be voiding the motherboard or video card warranty. "
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y*8
13 楼
cut the vector into halves.
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y*o
14 楼
问题是我不需要讲课啊，我也不需要答疑之类的，我主要做的事情就是改改作业（有标
准答案的那种）。他就说我必须要在那每一节课都听着。是不是很过分？
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M*m
15 楼
3。5 kb呀，胶浓度大不是分不开大片段了么，要是小于200的好像浓度大对，哪里可以
找到酶切位点呢，网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。

【在 m**z 的大作中提到】
: should increase gel concentration not decrease ba
: vector usually has other restriction sites you can use for your purpose
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c*n
16 楼
The way you respond is probably not right. Probably you should express that
you "want" to be there, but due to other schedule conflicts, you may not be
available for every class although you will try.
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M*m
17 楼
用啥切？@@。。。。

【在 y******8 的大作中提到】
: cut the vector into halves.
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F*y
18 楼
哦这样啊，那就自认倒霉吧，我也说不出来了

【在 y******o 的大作中提到】
: 问题是我不需要讲课啊，我也不需要答疑之类的，我主要做的事情就是改改作业（有标
: 准答案的那种）。他就说我必须要在那每一节课都听着。是不是很过分？
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c*r
19 楼
多数vector的p/k gene里面都有一个切点，你找找看

【在 M****m 的大作中提到】
: 用啥切？@@。。。。
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y*o
20 楼
I guess so...thank you!

that
be

【在 c********n 的大作中提到】
: The way you respond is probably not right. Probably you should express that
: you "want" to be there, but due to other schedule conflicts, you may not be
: available for every class although you will try.
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y*8
21 楼
check the PcR-XL-TOPO vector sequence.

【在 M****m 的大作中提到】
: 用啥切？@@。。。。
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n*p
22 楼
你老板怎么批评你的？也许你老板有合理的理由，比如让你学习一下讲课的技巧，
或者复习一下课程里的基础知识。

【在 y******o 的大作中提到】
: 我做我自己老板的TA.他问我你要不要上课，我说不要。他马上生气了，说你怎么可以
: 说不要呢？
: 然后批评了一大通。我很委屈，首先我以前做别人的TA就不要上课。然后TA的职责里也
: 没有规定必须要上课。最后，他既然问我要不要，那我当然有可能说不要了，他如果认
: 为我必须要上，又何必要问我？又何必要批评我？
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M*m
23 楼
如何找呢？我google了没找到还。。。

【在 c******r 的大作中提到】
: 多数vector的p/k gene里面都有一个切点，你找找看
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y*o
24 楼
嗯，我觉得他说的也不是没有道理，首先他说我不假思索就说不去（这个只能怪我反应
太快了，也是因为我没有觉得这会成为问题），对他很不尊重；这是他教了许多年的课
（他当然非常自豪），我却如此坚决地不去，很不给他面子。。。然后他又说我学一
下这方面的知识会很有好处（虽然我的研究并不是这个方向，增长一下知识还是很好得
）。
现在我觉得其实我老板挺可爱的，能够当面跟我说他觉得我没有尊重他，也算是很坦率
的一个人。
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a*k
25 楼
是应该浓度大一点来分，前阵子也遇到同样的问题，Topo-XL和一个3kb多一点的基因，
我们postdoc试了0.6%左右的胶，结果根本分不开，反而后来我们用了1%还是稍微再高一
点的就分开了。另外，vector的sequence网上没有吗？

【在 M****m 的大作中提到】
: 3。5 kb呀，胶浓度大不是分不开大片段了么，要是小于200的好像浓度大对，哪里可以
: 找到酶切位点呢，网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。
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p*c
26 楼
我给本科生当TA不用去上课
就是答疑，写答案改作业
给博士生当TA要去上课。。。。

【在 y******o 的大作中提到】
: 我做我自己老板的TA.他问我你要不要上课，我说不要。他马上生气了，说你怎么可以
: 说不要呢？
: 然后批评了一大通。我很委屈，首先我以前做别人的TA就不要上课。然后TA的职责里也
: 没有规定必须要上课。最后，他既然问我要不要，那我当然有可能说不要了，他如果认
: 为我必须要上，又何必要问我？又何必要批评我？
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M*m
27 楼
哪里有呢？还没找到全长的，而且不知道这种conmercial的人家给不给你全场 ，，，

【在 y******8 的大作中提到】
: check the PcR-XL-TOPO vector sequence.
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s*c
28 楼
如果只是改作业 那不是reader么？
我们系里TA的话还要带课后的习题课 然后有专门的TA hours 还要带lab
但是改作业是reader做的 不是TA
另外crazyhaydn君的回复相当妙 学习了
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a*e
29 楼

------------
0.6% ?


【在 a****k 的大作中提到】
: 是应该浓度大一点来分，前阵子也遇到同样的问题，Topo-XL和一个3kb多一点的基因，
: 我们postdoc试了0.6%左右的胶，结果根本分不开，反而后来我们用了1%还是稍微再高一
: 点的就分开了。另外，vector的sequence网上没有吗？
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M*m
30 楼
啊，根我很类似呀，我用的1%也没分开，还有你前面说的6%是不是0.6%[email protected]@
他们网站只有MCS。。。能再帮我问问么，郁闷死了，赫赫

【在 a****k 的大作中提到】
: 是应该浓度大一点来分，前阵子也遇到同样的问题，Topo-XL和一个3kb多一点的基因，
: 我们postdoc试了0.6%左右的胶，结果根本分不开，反而后来我们用了1%还是稍微再高一
: 点的就分开了。另外，vector的sequence网上没有吗？
avatar
a*k
34 楼
您老人家眼力真好啊。。

【在 a***e 的大作中提到】
:
: ------------
: 0.6% ?
:
avatar
c*r
36 楼
ft，你没有什么DNA分析酶切软件？看看有啥酶就好了嘛。
要是你实在没有好用的，就凑合试试这个：
http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php

【在 M****m 的大作中提到】
: 如何找呢？我google了没找到还。。。
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T*t
37 楼
commercial的vector也应该给全序列的，不给的话谁敢用。。。
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M*m
38 楼
有软件没找到序列啦现在解决了~~~thanks~

【在 c******r 的大作中提到】
: ft，你没有什么DNA分析酶切软件？看看有啥酶就好了嘛。
: 要是你实在没有好用的，就凑合试试这个：
: http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php
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a*e
39 楼
等你开始在显微镜下挑一段时间突变体就知道眼力好是多么重要。 ：）

【在 a****k 的大作中提到】
: 您老人家眼力真好啊。。
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c*r
40 楼
正是commrecial的才有全序列。home made的多数都是手画一张图，哈哈哈
不过有时候commercial的序列藏得比较深，不好找哈

【在 T**********t 的大作中提到】
: commercial的vector也应该给全序列的，不给的话谁敢用。。。
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a*k
41 楼
我原先在显微镜底下剖两个小时果蝇都觉得站起来之后看不清东西了。。
你们做虫子的screen每天要看多少小时的啊？

【在 a***e 的大作中提到】
: 等你开始在显微镜下挑一段时间突变体就知道眼力好是多么重要。 ：）
avatar
c*r
42 楼
解决就好啦，哈哈

【在 M****m 的大作中提到】
: 有软件没找到序列啦现在解决了~~~thanks~
avatar
m*z
43 楼
usually higher concentration gives you better resolution, but will run very
slowly

【在 M****m 的大作中提到】
: 3。5 kb呀，胶浓度大不是分不开大片段了么，要是小于200的好像浓度大对，哪里可以
: 找到酶切位点呢，网上只有MCS的那些 没有其他部位的sequence。。。
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h*g
44 楼
把vector给chop了，再收insert，我上次也是一不小心没注意，搞得那么相近，最后筛
选可苦了我，老有污染，最后实在受不了了，就直接pcr产物进终极vector。
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a*o
45 楼
There is usually Pvu II and Sca I site in the backbone of vectors. Many
vectors were from pBR322 or pUC19.
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