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分子小白请教fusion protein
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分子小白请教fusion protein# Biology - 生物学
l*j
1
呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
金银蛋饺
珍珠虾丸
啤酒陈皮烧鸭
莞爆鱿鱼
虾皮紫菜豆腐
响油芦笋
南乳藕片
藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
荷塘小炒
放了马蹄,玉米笋,藕片,荷兰豆,胡萝卜,黑木耳
韭菜炒香干
干贝鸡汤豆腐羹
干贝洗净,用温水泡发,水留着,干贝加料酒上火蒸熟,搓成细丝
青豆,嫩豆腐,干贝,冬笋(切小片),鱼丸(切小丁),加鸡汤,大火烧开,小火30
分钟,转大火,加clam,撒鸡精、白胡椒、水淀粉,出锅前滴几滴香油
干贝已经有咸味,可不加盐
皮蛋瘦肉粥
熬了2个多小时,完全水米相溶
虾肉三鲜水饺
和面的时候加了鸡蛋,面特别筋斗
馅用了多半的虾肉,少半的猪肉,盐,糖,鸡精,葱末,姜粉,蒜粉,白胡椒,鸡蛋,
生粉,生抽,料酒,蚝油,香油,花椒油,虾米,香菇,木耳,马蹄
椰奶红豆年糕
这个味道很赞,很软很香且不甜
用料:
1:糯米粉150克,糖1/4杯,泡打粉(Baking Powder)1/2茶匙。
2:鸡蛋1只,玉米油3大勺,椰浆coconut cream 160ml。
3:红豆
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l*o
2
多多少少带了些干货。大家都是怎么填的?
如果填是,肯定要被抽查。如果填否,被抽查到会罚款么?没有肉和水果蔬菜。
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s*r
4
第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体,不知
道中间需要加个linker呢,还是直接按ORF接上就好呢?pcDNA3.1的vector。没有现成
的linker给我用,如果要加的话,是不是得设计到primer上去,那这primer也太长了吧
,能P出来吗。。。。
谢谢指导^^
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q*i
5
mm太能干了,所有菜都好复杂,pf呢

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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l*o
6
没人知道么?
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Z*i
7
真这么改就没这么多东方MM的粉丝了。大家谁不是因为她无结果的感情悲剧因怜生爱啊
,如果她对令狐虫的爱有了回报,大家就该开始讨论她作为魔教教主杀人于无形的手段
毒辣了。

【在 t*z 的大作中提到】
: 豆瓣上有高人对37集以后的改写,估计很多人会喜欢的。
: http://movie.douban.com/review/5785903/?start=0&post=ok#last

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C*e
8
光说引物
引物长没问题哈
做过很多七十几到八十左右的引物,其中跟模板配对的部分是18左右,P起来完全没问题

【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体,不知
: 道中间需要加个linker呢,还是直接按ORF接上就好呢?pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用,如果要加的话,是不是得设计到primer上去,那这primer也太长了吧
: ,能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^

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l*j
9
a?mm 还没睡啊?难道也是西部时间?:P
我这个是唐僧版,其实不是很麻烦的:)

【在 q****i 的大作中提到】
: mm太能干了,所有菜都好复杂,pf呢
:
: 菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

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p*u
10
一般好像都填否,及时抽到就说是自己用的,但是量一定不能多。
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Z*i
11
还不如干脆改成令狐冲与任我行等人联手,当场干掉东方MM。事后才知道送她上灵鹫寺
,为救她舍己,而定义也不是她杀的,然后羞愧交加,为东方MM引刀自宫,然后终于在
独孤九剑之外又连成葵花宝典,终成一代绝世高手,但却在孤山梅庄孤了此残生。后来
有一个少年名叫穆人清,凭令狐的一个信物找到他,才知道是他和东方MM山洞那一晚的
结晶,所以就收自己儿子为徒,日后穆人清再次凭绝世武功重振华山派,又收袁承志,
那是后话了。

【在 t*z 的大作中提到】
: 豆瓣上有高人对37集以后的改写,估计很多人会喜欢的。
: http://movie.douban.com/review/5785903/?start=0&post=ok#last

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p*i
12
中间加linker有时候是为了防止后加上的TAG影响原来蛋白的功能
可以参考pcDNA6.2 fusion GFP系列的linker
不过以前貌似很多人都是直接加个GFP……

【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体,不知
: 道中间需要加个linker呢,还是直接按ORF接上就好呢?pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用,如果要加的话,是不是得设计到primer上去,那这primer也太长了吧
: ,能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^

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j*1
13
第一次看到中国人做clam chowder, 哈哈~ 厉害!佩服!
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t*z
14
问题不在东方爱的无结果,而是剧情转折得莫名其妙,人物(特指令狐)转变得毫无道
理。
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n*w
15
我正在做一个fusion protein,我就是设计引物,然后p。。。引物大概35个碱基吧。
。。overlap。。。还是比较好p的。。。
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m*e
16
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Z*i
17
在另一个贴子已经说过,山洞一晚之后,令狐虫连人带心该得到的都得到,开始厌倦了
,特别是东方处处都比他强,远不如盈盈像小鸟依人,所以始滥终弃。估计只有东方MM
挂了以后,他才会再怀念对方的好。

【在 t*z 的大作中提到】
: 问题不在东方爱的无结果,而是剧情转折得莫名其妙,人物(特指令狐)转变得毫无道
: 理。

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s*r
18
谢谢^^
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l*m
19
你家gg叫我来顶
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t*z
20
我看也未必。是,悲剧给人更多的震撼,可这也不是要阐述什么高深的人生哲理,不过
就是一消遣、娱乐,何必闹得这么虐心呢。我看多数人也是看了前面的觉得创意不错,
可突然发现后半部整个一人格分裂,完全不合逻辑,变化来得过于生硬、突兀。如果他
能把东方、令狐反目成仇交待得合理些,也不会这么遭骂了。
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w*s
21
像GFP这么大的蛋白很可能会影响定位.一般我还是会加一个Linker。 比如GGSG。
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U*y
22
me too :-(

【在 l*******m 的大作中提到】
: 你家gg叫我来顶
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K*C
23
我最近做了一些fusion proteins.我的建议是你不要在引物里面加linker。
最好先做出一个Target protein-non coding region-Fluorescent protein(FP)的
prototype来,然后用Site-directed mutagenesis往里加linker。 FP加在N端还是C端
,是要试的。linker用多长的,什么样的,也是要选的。否则会对蛋白折叠有影响。

【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体,不知
: 道中间需要加个linker呢,还是直接按ORF接上就好呢?pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用,如果要加的话,是不是得设计到primer上去,那这primer也太长了吧
: ,能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^

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t*r
24
仅看菜名就是一种享受和折磨了

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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l*m
25
鸭子做好不容易,啤酒陈皮烧鸭很赞,陈皮去油腻和腥味很好

菜都没有来
得及做。上周末才补做了一些。
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【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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l*j
26
哈哈,谢谢谢谢

【在 l*******m 的大作中提到】
: 你家gg叫我来顶
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l*j
27
谢谢:P

【在 U**********y 的大作中提到】
: me too :-(
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l*j
28
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a*z
29
zan

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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b*1
30
太赞了!!
真的,很赞!
你那么苗条,为了你家gg做这么多菜,那个人真有福气啊;更难得是某人说的为了爱情
长体重也值了的话。
想起以前有人吃完了一抹嘴说“害我又长胖了”。咋就那么同人不同命捏 //sour
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j*1
31
哈哈哈哈~ 让你们能顶这么好的菜都是给你们面子了~

【在 U**********y 的大作中提到】
: me too :-(
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m*f
32
太赞了,心头好,菜也美味,漂亮。
赞双色蛋饺的巧妙构思。
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r*e
33
南乳藕片,那个南乳是啥啊?
啤酒鸭能上个方子不?
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v*e
34
看起来都很好吃,
荷塘小炒和莞爆鱿鱼最吸引我,
这个水准可以开个饭店了。

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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l*j
35
谢谢大厨~
在你面前我可不敢卖弄

【在 m**f 的大作中提到】
: 太赞了,心头好,菜也美味,漂亮。
: 赞双色蛋饺的巧妙构思。

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l*j
36
美眉,南乳就是红豆腐乳,推荐王致和的玫瑰腐乳或者香辣腐乳
啤酒鸭,就是平时烧肉菜的做法,鸭腿剁成小块,烧开冲去浮沫
油烧热,下冰糖,中小火至冰糖溶化,下鸭腿翻炒,然后下葱姜八角陈皮辣椒翻炒,加
啤酒,盐,少许生抽,大火烧开,转入砂锅中小火40分钟左右,大火烧开收汁

【在 r********e 的大作中提到】
: 南乳藕片,那个南乳是啥啊?
: 啤酒鸭能上个方子不?

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l*j
37
谢谢:)

【在 v******e 的大作中提到】
: 看起来都很好吃,
: 荷塘小炒和莞爆鱿鱼最吸引我,
: 这个水准可以开个饭店了。
:
: 菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

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l*j
38
//blush
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l*j
39
亲爱的mm,你太sweet啦~
其实某人也有小担心啊,所以我做的越来越素了......
话说我也不舍得某人哪天overweight不健康:P

【在 b********1 的大作中提到】
: 太赞了!!
: 真的,很赞!
: 你那么苗条,为了你家gg做这么多菜,那个人真有福气啊;更难得是某人说的为了爱情
: 长体重也值了的话。
: 想起以前有人吃完了一抹嘴说“害我又长胖了”。咋就那么同人不同命捏 //sour

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a*l
40
赞!丰盛的很啊。
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r*q
41
好饭不怕晚!super zan!
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k*i
42
好多好吃的啊~~太厉害了~~~
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E*A
43
做得很漂亮,摄影水平很不错,那个丸子好可爱,每一颗米粒都很倔强
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l*j
44
哈哈,我觉得我的糯米有问题,泡了很久都很不容易熟
谢谢亲爱的~~

【在 E*A 的大作中提到】
: 做得很漂亮,摄影水平很不错,那个丸子好可爱,每一颗米粒都很倔强
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L*e
45
赞勤劳的mm
掩面退下
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E*A
46
我就喜欢这样弹性很好的糯米,我还故意做成这样才满意

【在 l*****j 的大作中提到】
: 哈哈,我觉得我的糯米有问题,泡了很久都很不容易熟
: 谢谢亲爱的~~

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i*e
47
crab cake看着好诱人。。。
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c*k
48
zan!
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A*a
49
真不錯!!
口水滿鍵盤了

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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d*g
50
oh,my~~~~~~
太牛了~~~
看得我口水直流啊~~~
好看又好吃~~~~
mm太厉害了
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j*a
51
Mark Mark Mark

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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A*F
52
太赞了
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y*e
53
mm太牛了,每次来food版都很有做饭欲望那
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G*S
54
mm做得真好~~
今天在food版又收集了不少菜谱:)
以后有空学习~~
不过我为什么觉得每天都很忙呢,无心做这么复杂的饭菜呀-_-"

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】
: 呵呵,赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party,很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒,味道咸香,很赞
: 荷塘小炒

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l*j
55
谢谢,blush//
我每次看美食博客也有这种感觉

【在 y*******e 的大作中提到】
: mm太牛了,每次来food版都很有做饭欲望那
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l*j
56
谢谢
我平时也没时间心情,就周末有:)

【在 G*S 的大作中提到】
: mm做得真好~~
: 今天在food版又收集了不少菜谱:)
: 以后有空学习~~
: 不过我为什么觉得每天都很忙呢,无心做这么复杂的饭菜呀-_-"
:
: 菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

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a*r
57
拍的太好了!
亮晶晶的
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k*u
58
她gg?

【在 m*****e 的大作中提到】
: 顶
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m*l
59
做得有滋有味的!
金饺颜色真好!
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