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请推荐好用的streptavidin beads/resin/cartridge
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请推荐好用的streptavidin beads/resin/cartridge# Biology - 生物学
j*g
1
本人是F1签证,想暑假回国,但是就怕回美的时候怕人家大使馆查到我老公有了绿卡,
会认为我有移民倾向不让我回美国了。我好多年都没有回去了,非常想在暑假的时候回
国。所以求问版上的XDJM,我这样的情况,签证会不会有问题?
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s*p
2
李察浑然不觉,甚至都不知道自己刚才是怎么把刚德打发走的。他心中充满了嘈杂的声
音,以至于自己真实的心意都被压了下去。
“我只是想在军营里巡回看看而已……”李察对自己说。然后一仰头,用力灌了几
大口烈酒下肚。
如火般的烈酒下肚后,李察才怔怔地看着自己手中的酒瓶,实在想不起来这东西是
怎么出现在自己手里的。他可没有随身带酒的习惯,营帐里也不会有。
身为全军统帅,在军营中喝酒可不是个好主意。李察一向很注意这些细节,于是想
把酒瓶扔掉,可是想了想,却又塞进怀里,信步走着。
长刀灭绝拖在地上,刀鞘不时跳动,在小石子上砸出火花。
在另一座营帐里,刚德和奥拉尔正凑在一起,研究着地图。说到一半,刚德忽然觉
得有些口渴,于是随手在怀里一摸,却是一怔。怀中的酒瓶已不翼而飞。
染血之地的夜很寒冷,可是风中却偶尔还会吹来属于白昼的燥热。李察的视线从哨
兵、马厩、篝火上一一扫过,然后落在前方不远处的一座营帐上。
不知不觉,他还是走到流砂的营帐前了。
营帐中还亮着灯火,流砂仍然没有睡。可是投在帐壁上的人影,却是两个。
李察定在当场,心中的嘈杂一时尽去,化为寂静。
哗,营帐的门帘被拉开,流砂探出头,向李察招了招手,然后对帐内的人说:“好
了,先这样。你先回去吧。”
“好的。”营帐内响起的果然是伊俄的声音!
李察的心忽然感到一阵刺骨的寒冷,手不自觉的握紧了灭绝的刀柄。
伊俄从流砂的营帐中钻了出来,向李察笑了笑,就向自己的营帐走去。他的一笑,
依然完美灿烂,但是看在李察眼中却是富含深义。
李察差点把刀拔出来。
他强行控制着自己,走进流砂的营帐,坐下,把视线的焦点盯在对面的帐壁上。刚
刚如果再多看一眼伊俄,李察就会觉得控制不住会做点什么出来。
流砂回转身,放下帘布,然后坐到李察面前,似笑非笑地看着他。随后流砂发现李
察的表情僵硬,目光更是死盯着对面一块营帐的帐壁看,就象那里有一张五阶构装图纸
一样。她嗤的一声笑出来,伸手在李察视线上摇晃了好几下,才算把他的注意力抓了回
来。
“找我有事?”流砂始终带着玩味的淡笑,盯着李察看。
“不……没事。只是在军营里随意巡视一下。”李察有些支吾地说。他一张嘴,就
喷出一股酒气。流砂笑得更加明显了。
“巡视军营?那可不是你应该干的事。你想巡视什么?”
面对如此露骨的问题,李察完全不知该如何回答。他强作镇静,分辨说:“我是领
主,巡视军营不是职责所在吗?”
“那是刚德、奥拉尔该干的事,甚至你那几只大蝙蝠也可以胜任。”流砂毫不客气
地说。
李察无语。
流砂脸色一正,说:“对了,今天你的指挥犯了好几次错误,临场应战也不是很恰
当。”
李察皱眉,他也知道自己今天指挥不是平时的水准,可是刚刚点头承认,没想到流
砂补充了一句:“这是伊俄说的。”
李察全身一硬,可是刚刚已经点头承认了错误,此刻却是无法反悔。他面带寒霜,
冷冷地说:“伊俄,他不是战斗神官吗?也懂得打仗?”
“永恒龙殿的战斗神官都需要研究战略战术的。”流砂说。
李察忽然觉得气往上涌,冷笑着说:“那么下一场让他来指挥好了!”
“他也这么……”流砂说到一半,看了看李察脸色,立刻住口。
李察忽然平静了,双手抚着长刀灭绝,淡淡地替流砂补全了没有出口的话:“伊俄
想要我的指挥权是吧?他还想要什么?”
流砂吐了吐舌头,靠了过来,说:“好了好了!我刚才只是想气气你的。其实是这
样,我和他说过你在临战指挥上几乎完美无缺。然后刚才我和他在检讨今天的战斗,才
觉得有几处需要改进的地方。但我知道,这不是你正常的水准。”
李察依然沉默着。
流砂看到有些不对,于是索性靠在了他怀里,用力抚摸了下李察的脸,说:“身为
战斗神官,和指挥官战术配合得好,才能真正发挥出他们的作用。一个大范围增益或者
是驱散神术,早一分钟晚一分钟施法,对战局的影响可是大不一样呢!”
李察叹了口气,伸手揉了揉流砂的头,僵硬的身体放松了一点。
“另外,伊俄认为,你现在的个人实力还是太低了一点,才十二级的大魔法师,不
足以震慑手下。”
李察的身体又硬了。他险些脱口而出:“是不足以震慑一个十二级的战斗神官吧!
”千忍万忍,他才把这句话吞了下去。
流砂这次似乎没有看明白李察的反应,一把把他拉了起来,然后一脚把灭绝踢到角
落里,说:“这件事好解决!来,我现在就把永恒龙殿的神官格斗术教给你。这东西很
厉害的。”
不用流砂说,李察也知道永恒龙殿神官格斗术的厉害,之前他已经很多次亲身领教
过了。不过他还没来得及继续别扭下去,流砂忽然靠了上来,在李察身上一贴一震,李
察就忽然腾空而起,在空中剧烈翻滚,然后脸朝下平平地拍在地上!
流砂再把李察拉了起来,这次开始详细讲解一个个分解动作要领,发力技巧。
时间不知不觉的溜走。
深夜,李察不知道被摔了多少下,全身酸痛,迈着僵硬的脚步离开了流砂的营帐。
流砂倒是神采奕奕,还向李察用力挥手告别,这才放下帘布。李察带着混乱复杂的
心情回去,直到走进自己的营帐,才想起来有一个最重要的问题一直没有找到机会问。
伊俄究竟和流砂是什么关系?
而流砂还没睡,她托着腮,不知道在想着什么,有时则会心的笑一笑。灯光照耀在
她脸上,竟激起一圈圈光晕。
“你啊!你的未来中,可是没有我呢……”流砂轻声自语。
第二天。
嘹亮的军号把战士们从睡梦中唤醒,军队迅速**。李察上了战马,远远看到伊俄。
战斗神官依然光彩夺目,回望李察一眼,两人目光差点碰撞出火花。
经过一个上午不急不徐的行军,李察的部队出现在黄昏城堡之下。黄昏城堡上飘扬
的是方丹男爵家族的旗帜,城墙上守军数量稀少,看到李察大军出现,城堡甚至连大门
都没有关。
“你们看,希姆的人果然撤走了。”李察微笑着对周围的追随者说。
苍鹿伯爵驻扎在黄昏城堡的部队连夜撤走,带上了李察专门派人送过来的尸体。
等回到驻地后,拉图伯爵必然会把一切罪责都推到霍根爵士的头上,毕竟他是不战
而逃。实际上霍根做出的是正确决定,如果不是他撤退得坚决,那一千步兵也会被李察
留下。
一千平均只有三级、且事先没有充分准备,又在急行军中跑到筋疲力尽的战士,对
上李察多达六百的九级人形战士,只有被屠杀的份。
但政治并不是这样看问题的,奥多姆力战身死,霍根却根本没去救援。奥多姆尸体
上的战痕越多,霍根就死得越快。
这就是李察送还奥多姆尸体的目的。
透过精英蝙蝠的侦察,李察已经了解了霍根的作战风格。这是李察最讨厌的对手,
他宁可和奥多姆这样的敌人大战十场,也不愿意和霍根打一仗。即使他手里剩下的兵力
等级不高,但是如果靠着黄昏城堡的防御工事,还是必然会给李察造成损失。
城头上一名军官高声叫道:“这是方丹男爵的领地,私人武装未经许可不得通过和
停留!你们若再不尽快离开的话,就触犯了王国律法!”
李察微眯着眼睛,对身边的传令兵说:“告诉他们,就说有批匪徒刚刚逃进了黄昏
城堡,我们要进去搜查。”
传令兵放开喉咙,把李察的话吼了出去。
那名军官大怒,一脚踏上城头,指着李察怒吼着:“这里不是你家的后花园!一个
开拓骑士,也敢在男爵大人的领地上撒野!”
李察根本不想和这位热血上头的军官理论,只是淡淡地叫了一声:“奥拉尔。”
精灵诗人即刻开弓,一枝魔法追踪箭就直奔军官心口而去!那名军官惊骇欲绝,抢
过身边卫兵的重盾挡在身前。扑的一声,魔法箭生生穿透重盾,但被带偏了方向,插进
了军官的肩头。
李察看了奥拉尔一眼,摇了摇头,说:“你得好好练习一下了,连个废物都射不死
。”
“是,主人!”精灵诗人也一脸惭愧。那军官才八级而已,反应却不是一般的快。
李察这时放了一个扩音魔法,对城堡上守卫的战士说:“去告诉小方丹男爵,或者
老男爵夫人,如果不让我们进去搜查的话,那么我就攻城了。我没时间跟你们浪费!”
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m*i
3
我想把没有biotin的DNA(400bp)从有biotin的DNA(100bp)中分离出来。 之前做small
-scale的时候用的是NEB的streptavidin magnetic bead,效果非常好,而且很方便。
但是现在做large-scale, 感觉太贵了。之后试了pierce的streptavidin cartridge 和
resin, 都没有NEB的分得干净,而且还有20-30%的损失。我不确定是我操作不得法,还
是pierce确实没有NEB好用。
烦请前辈给推荐个好用的产品或者指点一下方法。
不胜感激。
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F*u
4


【在 j*********g 的大作中提到】
: 本人是F1签证,想暑假回国,但是就怕回美的时候怕人家大使馆查到我老公有了绿卡,
: 会认为我有移民倾向不让我回美国了。我好多年都没有回去了,非常想在暑假的时候回
: 国。所以求问版上的XDJM,我这样的情况,签证会不会有问题?

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w*w
5
流砂故意刺激李察?没必要吧。
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T*t
6
我一直用invitrogen的Dynal beads,不过没比较过别家的,不知道是贵还是便宜。我
觉得不便宜就是了。magnetic beads肯定比普通的beads方便,损失也小一点。
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f*n
7
老公有绿卡不等于你有移民倾向。你老公帮你申请了I-130也不等于你有移民倾向。移
民倾向的意思就是你打算进去了之后就不走,直接申请移民。只要你去了美国之后打算
会回去中国,就没有移民倾向。当然你现在会更难证明这个,但是不是不可能
的。
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T*s
8
天选卫士也是个不能说的神殿秘密吧

【在 w**w 的大作中提到】
: 流砂故意刺激李察?没必要吧。
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T*t
9
另外,你分离400bp和100bp的DNA,为什么不用胶?虽然没有beads方便,不过便宜太多
了。
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j*g
10
哎,我也想不出有什么很好的理由说明我以后会回国。估计很有可能被CHECK。看来还
是苦逼的待在这边了。谢谢版上大家的回复!
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f*e
11
李察在女人身上没什么天赋啊,到现在都没发现问题所在

【在 T*********s 的大作中提到】
: 天选卫士也是个不能说的神殿秘密吧
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m*i
12
多谢多谢。
我也想过用胶。 如果我需要处理10mg的DNA, 怎么能把这么大量的DNA跑上胶然后提出
来呢?我以前只用过kit处理个几ug.
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F*u
13
很可能会check?别逗了,基本没有通过的希望
配偶在美国绿卡定居,说你去过去学习不打算逾期居留,谁信啊

【在 j*********g 的大作中提到】
: 哎,我也想不出有什么很好的理由说明我以后会回国。估计很有可能被CHECK。看来还
: 是苦逼的待在这边了。谢谢版上大家的回复!

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w*e
14
why not recycle the beads afterwards?

small

【在 m**i 的大作中提到】
: 我想把没有biotin的DNA(400bp)从有biotin的DNA(100bp)中分离出来。 之前做small
: -scale的时候用的是NEB的streptavidin magnetic bead,效果非常好,而且很方便。
: 但是现在做large-scale, 感觉太贵了。之后试了pierce的streptavidin cartridge 和
: resin, 都没有NEB的分得干净,而且还有20-30%的损失。我不确定是我操作不得法,还
: 是pierce确实没有NEB好用。
: 烦请前辈给推荐个好用的产品或者指点一下方法。
: 不胜感激。

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m*i
15

真的可以recycle吗? 我到从来没有试过。谢谢。

【在 w******e 的大作中提到】
: why not recycle the beads afterwards?
:
: small

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w*e
16
I never tried myself either hehe. theoretically, there is a kd involved
(though it's very very low) so you can compete the DNA off. or some
harsh condition (heat, NaOH, etc) may elute the DNA off. don't know
whether you can still use the beads after that thou hehe

【在 m**i 的大作中提到】
:
: 真的可以recycle吗? 我到从来没有试过。谢谢。

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T*t
17
怎么recycle啊?streptavidin-biotin的binding很紧的,PCR都掉不下来,要洗下来除
非吧streptavidin denature了,可是那样一来不就没法recycle了?
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T*t
18
10mg,太生猛了,沉淀下来都会是一大坨吧。
不过用大胶,制备胶,多跑几块应该也能搞定吧。。。就是纯粹是个体力活了。
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w*e
19
I agree:) the half-life should be ~10days, so if you add 100X excessive
biotin you might be able to recover your DNA after a month? hehe
but I thought PCR should be good? remember reading somewhere
ppl use heating for elution.
anyway, probably not worth it (though I'm indeed curious:)

【在 T**********t 的大作中提到】
: 怎么recycle啊?streptavidin-biotin的binding很紧的,PCR都掉不下来,要洗下来除
: 非吧streptavidin denature了,可是那样一来不就没法recycle了?

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m*i
20
我看了NEB家的elution的条件是75C的Tris-HCl (pH 7.5),也许streptavidin
denature了等凉了之后还能在refold? pierce家的让用Guanidine-HCl,肯定就没法
recycle了。
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w*e
21
I tried gel extraction kit w/ 10ug+ DNA and worked fine.
I tried even higher amount w/ YM columns and got great recovery. they can
be reused too. but don't know whether that's compatible w/
gel extraction buffer

【在 T**********t 的大作中提到】
: 10mg,太生猛了,沉淀下来都会是一大坨吧。
: 不过用大胶,制备胶,多跑几块应该也能搞定吧。。。就是纯粹是个体力活了。

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o*4
22
我用的是invitrogen的SAbeads
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T*t
23
对了,这么大量的DNA,跑胶不如跑柱子了。跑个sephadex柱子,400bp和100bp应该很好
分吧,洗下来乙醇沉淀一下。
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T*t
24
用heating来elute是要加变性剂比如SDS的,光是加热掉不下来。正常PCR cycling上百
个循环都没事。

【在 w******e 的大作中提到】
: I agree:) the half-life should be ~10days, so if you add 100X excessive
: biotin you might be able to recover your DNA after a month? hehe
: but I thought PCR should be good? remember reading somewhere
: ppl use heating for elution.
: anyway, probably not worth it (though I'm indeed curious:)

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m*i
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之前也有想过用柱子,但是怕recover的不好。那10mgDNA我是做了几千个PCR得到的,
感觉超级珍贵。。。不过实在不行,也是值得试的方法。谢谢 :)

【在 T**********t 的大作中提到】
: 对了,这么大量的DNA,跑胶不如跑柱子了。跑个sephadex柱子,400bp和100bp应该很好
: 分吧,洗下来乙醇沉淀一下。

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T*t
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可以先跑个small scale的看看。我刚才说错了,用sephadex估计分不了,你的样品估
计要用Superdex 200来分,我没跑过DNA的制备柱,但是理论上应该比蛋白难不了多少
吧。

【在 m**i 的大作中提到】
:
: 之前也有想过用柱子,但是怕recover的不好。那10mgDNA我是做了几千个PCR得到的,
: 感觉超级珍贵。。。不过实在不行,也是值得试的方法。谢谢 :)

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m*i
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多谢。superdex 200看起来好像能work。到时候不行就试试这个。

【在 T**********t 的大作中提到】
: 可以先跑个small scale的看看。我刚才说错了,用sephadex估计分不了,你的样品估
: 计要用Superdex 200来分,我没跑过DNA的制备柱,但是理论上应该比蛋白难不了多少
: 吧。

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T*t
28
就是不知道一次上样量能多少。你可以先少上一点,然后慢慢加。反正柱子是反复用的
,绝对renewable。最后就是洗脱体积大一点。用concentrator浓缩一下再乙醇沉淀,
应该recovery也不会太差吧。总的来说比beads便宜,比跑胶方便。

【在 m**i 的大作中提到】
: 多谢。superdex 200看起来好像能work。到时候不行就试试这个。
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m*i
29
说起这个concentrator, 有没有什么好用的东西呀?我每次都用QIAGEN的Maxi prep去
除蛋白,浓缩 DNA,但是产量从来没有超过60%。
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