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请教RNAi导致细胞死亡

请教RNAi导致细胞死亡# Biology - 生物学

KV2010-08-31 07:08

1 楼

70年代的人很少有不喜欢周润发片子的。上中学的时候，路边录像厅最受欢迎的影片就
是周润发的片子，兄弟情谊，恩怨分明，都深深吸引着一代青少年。虽然大部分是黑帮
片，但那种有情有义精神是一个社会应有的道德基础，无论是黑帮，还是在现代社会的
人际交往中。
我们那个年代，没有装b或者装13的说法，或许今天这一代青少年看来，周润发的片子
是装13的典型，不知道社会学家们怎么看待这个问题，当你心中什么都不信的时候，也
许看什么都能看透，没有什么所谓有情有义，没有什么所谓道德正义，都是装13。
影片的内容一定程度上反映社会的审美观，社会的审美观也影响着影片的走向，葛大爷
冯大爷的片子王朔大爷的文学我也爱看，很多是字字珠玑，话里有话，混社会吃透社会
的宝典，可是看的越多，人和人交往功利性目的性就越多，情谊就越少。
可是，每个人都需要关爱，得不到真的来假的也行，用句我兄弟的话说：不掏心但要掏
布袋，这样也能交往。问题是，现在人和人之间的关系，更多的是既不掏心更不掏口袋
，更不用说为你两肋插刀了。
回过头看看周润发的影片，你需要葛大爷那样的兄弟，还是周润发这样的兄弟？一个神
算子，还是一份情谊？我觉得我都需要，不过现在周润发们太少了。
现在的港片也没法看，很怀念周润发那个时代的香港影片。

j*o2010-08-31 07:08

2 楼

最近在做一课题，在两种人的肿瘤细胞系中瞬转siRNA knock down了某个基因，结果第
二天就发现细胞大量死亡，到第三天细胞基本死光光，同时做的non-targeting siRNA
control细胞生长正常，初步确认是这个基因的下调导致了细胞死亡。
但问题是，细胞死的太快了，试了好几个浓度，要么太低了没有RNAi效果，高了细胞就
翘了，导致无法具体分析细胞死亡的原因和后面的分子机制。
想过tet-on诱导性RNAi，但目前公司卖的tet系统基本都是用cmv promoter,似乎不能指
导shRNA的转录，但是可以知道microRNA转录，不知能否设计针对该基因的microRNA来
做诱导性的knock down? 至于如何设计不太了解，
没方向了，想请教一下在这方面有经验的同志，任何建议都欢迎！！
多谢先！

c*g2010-08-31 07:08

3 楼

你文章不错，好多都是不矫情不装逼的影评，剧透，但是俺喜欢。后来看到那个大雪的
事情，更觉得是个性情中人，希望以后能多见。

【在 KV 的大作中提到】

: 70年代的人很少有不喜欢周润发片子的。上中学的时候，路边录像厅最受欢迎的影片就
: 是周润发的片子，兄弟情谊，恩怨分明，都深深吸引着一代青少年。虽然大部分是黑帮
: 片，但那种有情有义精神是一个社会应有的道德基础，无论是黑帮，还是在现代社会的
: 人际交往中。
: 我们那个年代，没有装b或者装13的说法，或许今天这一代青少年看来，周润发的片子
: 是装13的典型，不知道社会学家们怎么看待这个问题，当你心中什么都不信的时候，也
: 许看什么都能看透，没有什么所谓有情有义，没有什么所谓道德正义，都是装13。
: 影片的内容一定程度上反映社会的审美观，社会的审美观也影响着影片的走向，葛大爷
: 冯大爷的片子王朔大爷的文学我也爱看，很多是字字珠玑，话里有话，混社会吃透社会
: 的宝典，可是看的越多，人和人交往功利性目的性就越多，情谊就越少。

O*e2010-08-31 07:08

4 楼

Off-target effects might have contributed to what you got. I would try
several
more siRNA oligos targeting different regions of your gene to confirm the
death phenotype. At the same time, try to rescue with resistant constructs.

siRNA

【在 j*********o 的大作中提到】

: 最近在做一课题，在两种人的肿瘤细胞系中瞬转siRNA knock down了某个基因，结果第
: 二天就发现细胞大量死亡，到第三天细胞基本死光光，同时做的non-targeting siRNA
: control细胞生长正常，初步确认是这个基因的下调导致了细胞死亡。
: 但问题是，细胞死的太快了，试了好几个浓度，要么太低了没有RNAi效果，高了细胞就
: 翘了，导致无法具体分析细胞死亡的原因和后面的分子机制。
: 想过tet-on诱导性RNAi，但目前公司卖的tet系统基本都是用cmv promoter,似乎不能指
: 导shRNA的转录，但是可以知道microRNA转录，不知能否设计针对该基因的microRNA来
: 做诱导性的knock down? 至于如何设计不太了解，
: 没方向了，想请教一下在这方面有经验的同志，任何建议都欢迎！！
: 多谢先！