n*s
2 楼
分别都怎么搜到的？谢谢
BR
3 楼
最近从加拿大回美国，入境官在我的入境章上把until 日期错写成我的visa stamp 有
效日期，而不是H1B 797 表上的日期。我告诉他错了后，他就在护照上把那日期划掉重
写一个，但新写的日期年份不是很清楚到底是哪一年，有可能写早了一年。想问一下，
这个有问题吗？我看他在护照上重写日期的时候，没有任何电脑操作。谢谢！
效日期，而不是H1B 797 表上的日期。我告诉他错了后，他就在护照上把那日期划掉重
写一个，但新写的日期年份不是很清楚到底是哪一年，有可能写早了一年。想问一下，
这个有问题吗？我看他在护照上重写日期的时候，没有任何电脑操作。谢谢！
e*o
4 楼
目前在做一个实验，要求检测到0.01 pg 以下的DNA模板. 现在我在做巢式pcr,大概能
检测到0.01 pg （1000 copy）.但是不稳定。不知道各位大虾有什么好的意见没有。谢
谢。
检测到0.01 pg （1000 copy）.但是不稳定。不知道各位大虾有什么好的意见没有。谢
谢。
i*u
5 楼
同志，我认为你明知故问。
是不是希望大家尊称你一声：“大葛葛”？
【在 r******8 的大作中提到】
: 上个月投了11份，直接拒掉3个，一封致谢要我等消息，3个要推荐信的，4个没有任何
: 回音。这个比例正常吗？
是不是希望大家尊称你一声：“大葛葛”？
【在 r******8 的大作中提到】
: 上个月投了11份，直接拒掉3个，一封致谢要我等消息，3个要推荐信的，4个没有任何
: 回音。这个比例正常吗？
r*d
6 楼
fia card service
【在 n*****s 的大作中提到】
: 分别都怎么搜到的？谢谢
【在 n*****s 的大作中提到】
: 分别都怎么搜到的？谢谢
c*r
7 楼
你的pcr有问题，1000个copy很容易检测。理论上pcr可以检测到一个copy，但是一般到
10个copy以下就不太稳定了。
如果还检测不到，可以pcr之后跑个northern blog。
10个copy以下就不太稳定了。
如果还检测不到，可以pcr之后跑个northern blog。
r*8
8 楼
一点都没有这个意思。我是新手，刚刚开始投简历，一点经验都没有。
【在 i******u 的大作中提到】
: 同志，我认为你明知故问。
: 是不是希望大家尊称你一声：“大葛葛”？
【在 i******u 的大作中提到】
: 同志，我认为你明知故问。
: 是不是希望大家尊称你一声：“大葛葛”？
n*s
9 楼
boa里面好像没有fia这个merchant
【在 r*******d 的大作中提到】
: fia card service
【在 r*******d 的大作中提到】
: fia card service
e*o
10 楼
谢谢，回复。不知你pcr的时候有什么技巧。
对了忘了说一声，我的实验要求高保真。所以一些活性超强的酶不敢用。也不敢多加
mg2+, dmso之类的东西。
对了忘了说一声，我的实验要求高保真。所以一些活性超强的酶不敢用。也不敢多加
mg2+, dmso之类的东西。
g*1
11 楼
3轮巢式PCR灵敏性应该高很多，原理有一点像tail-PCR
c*r
12 楼
你这个pcr做来干嘛用的？检测HIV？还是克隆什么东西？
【在 e***o 的大作中提到】
: 谢谢，回复。不知你pcr的时候有什么技巧。
: 对了忘了说一声，我的实验要求高保真。所以一些活性超强的酶不敢用。也不敢多加
: mg2+, dmso之类的东西。
【在 e***o 的大作中提到】
: 谢谢，回复。不知你pcr的时候有什么技巧。
: 对了忘了说一声，我的实验要求高保真。所以一些活性超强的酶不敢用。也不敢多加
: mg2+, dmso之类的东西。
e*o
13 楼
我需要transfect一些barcode，然后是用来测single barcode序列的。老伴没做过
bench work，天天说能检测到一个copy。不知道有没有法稳定到10copy去。你检测到10
个copy的PCR条件是什么.
【在 c******r 的大作中提到】
: 你这个pcr做来干嘛用的？检测HIV？还是克隆什么东西？
bench work，天天说能检测到一个copy。不知道有没有法稳定到10copy去。你检测到10
个copy的PCR条件是什么.
【在 c******r 的大作中提到】
: 你这个pcr做来干嘛用的？检测HIV？还是克隆什么东西？
c*r
14 楼
哦，酱紫
可是一般barcode都要先在clone细胞系，然后把扩增的细胞系拿来测序吧？不带直接一
个copy就测序的啊
这个吧，非常技术的问题，很难别人给troubleshooting，因为不知道技术细节。即使
知道，你也明白啦，有时候就是看手。比如你ld可能这个这个办法不行，但是换一个就
非常好，我可能正好相反。有时候就是很难说。
建议先把细胞clone了，这样多养点细胞就很容易测了。
10
【在 e***o 的大作中提到】
: 我需要transfect一些barcode，然后是用来测single barcode序列的。老伴没做过
: bench work，天天说能检测到一个copy。不知道有没有法稳定到10copy去。你检测到10
: 个copy的PCR条件是什么.
可是一般barcode都要先在clone细胞系，然后把扩增的细胞系拿来测序吧？不带直接一
个copy就测序的啊
这个吧，非常技术的问题，很难别人给troubleshooting，因为不知道技术细节。即使
知道，你也明白啦，有时候就是看手。比如你ld可能这个这个办法不行，但是换一个就
非常好，我可能正好相反。有时候就是很难说。
建议先把细胞clone了，这样多养点细胞就很容易测了。
10
【在 e***o 的大作中提到】
: 我需要transfect一些barcode，然后是用来测single barcode序列的。老伴没做过
: bench work，天天说能检测到一个copy。不知道有没有法稳定到10copy去。你检测到10
: 个copy的PCR条件是什么.
e*o
15 楼
院长同志！ ：）
谢谢回复。我就是要做单细胞，单barcode测序，用solexa测。但首先要扩增一下看看
，做control。你说的ld是指什么呢？
谢谢回复。我就是要做单细胞，单barcode测序，用solexa测。但首先要扩增一下看看
，做control。你说的ld是指什么呢？
c*r
16 楼
哈哈，ld是老伴的简称啊，呵呵
哦，酱紫，那真的只有一个copy啊。。。试试楼上说的，nest三轮吧。别的真的没啥好
办法了。
另外，可以中间加个probe，用qPCR做个test，看看amplification efficiency。
你看，DNA的平均分子量是330g/mol，如果100bp的product，那么平均分子量是660g/
mol。agarose gel加EtBr，100ng的DNA应该可以detect了吧？那么100ng大概合10e11个
copy的DNA double strand分子。
咱们如果assume PCR的效率是100%，那么就是那么一个copy要amplify到10e11大概需要
37个cycles。。。
如果PCR效率比较差，比如只有50%，那么需要62个cycles，所以啊，你看，最好先测一
下你的amplification efficiency。
【在 e***o 的大作中提到】
: 院长同志！ ：）
: 谢谢回复。我就是要做单细胞，单barcode测序，用solexa测。但首先要扩增一下看看
: ，做control。你说的ld是指什么呢？
哦，酱紫，那真的只有一个copy啊。。。试试楼上说的，nest三轮吧。别的真的没啥好
办法了。
另外，可以中间加个probe，用qPCR做个test，看看amplification efficiency。
你看，DNA的平均分子量是330g/mol，如果100bp的product，那么平均分子量是660g/
mol。agarose gel加EtBr，100ng的DNA应该可以detect了吧？那么100ng大概合10e11个
copy的DNA double strand分子。
咱们如果assume PCR的效率是100%，那么就是那么一个copy要amplify到10e11大概需要
37个cycles。。。
如果PCR效率比较差，比如只有50%，那么需要62个cycles，所以啊，你看，最好先测一
下你的amplification efficiency。
【在 e***o 的大作中提到】
: 院长同志！ ：）
: 谢谢回复。我就是要做单细胞，单barcode测序，用solexa测。但首先要扩增一下看看
: ，做control。你说的ld是指什么呢？
e*o
17 楼
再次感谢回复。受益匪浅。我现在扩大概50个循环。但是已经开始有很多的非特异带。
不敢再往上增加了。不知道怎么除去。对了你说的10个copy，是指质粒吗？是怎么扩的
，用的什么酶啊。
不敢再往上增加了。不知道怎么除去。对了你说的10个copy，是指质粒吗？是怎么扩的
，用的什么酶啊。
e*o
18 楼
再次感谢回复。受益匪浅。我现在扩大概50个循环。但是已经开始有很多的非特异带。
不敢再往上增加了。不知道怎么除去。对了你说的10个copy，是指质粒吗？是怎么扩的
，用的什么酶啊。
不敢再往上增加了。不知道怎么除去。对了你说的10个copy，是指质粒吗？是怎么扩的
，用的什么酶啊。
相关阅读
借宝地问个选方向的问题本版定海神针“善意提示”怎么没内容了有谁知道Syracuse University的Department of Biology怎么样？请科普一下Alzheimer's Diseases area 吧求paper一篇，谢谢。求一篇老paper，伪币相送。视频一枚：Can treat this! 灰常搞笑，Patricia D'Amore实验室的～文献求助！a position at GSKPlease recommend good next-gen sequencing data analysis workshops or conferencespositions in Hangzhou Chinanext gen sequencing的data analysis需要的统计知识多吗？Help with paper, Thanks!请问关于postdoc回国H1b返签被check的问题用于overexpression的lentiviral vector有没有人做MOUSE 的Dnmt3b的western？问个triple IF的问题最老的生物千老研究揭示东亚存史前人群迁徙的内陆路线老板想开人了何去何从