avatar
GFP, RFP,BFP共表达# Biology - 生物学
y*x
1
某日,受了委屈,心情极度不好,连pizza都欺负我
于是出现了此物,向黑暗料理界致敬之作
avatar
l*d
2
Very well said.
How much time is granted for an international student to get a successful
startup in US?
Visa application (1 year) + work to impress boss in order to keep the H1B
visa job (2 – 3 years) + start to apply for the Green card (typically
requires 5 -6 years)
http://trackgc.com/tr/ViewArticle.aspx?ArticlePk=794
avatar
e*o
3
想在一个细胞里同时表达GFP, RFP,BFP,不知道用什么办法能让这几个蛋白成像时各
自分得比较开,没有overlapping,(就像做DNA FISH那样),
不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
不知道用弱启动子,或是加特殊的信号肽,比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
谢谢各位!
avatar
y*x
4
周末,回归光明料理界,健康又小资的一顿。
鲜蔬鸡肉丝,燕麦番茄汤,谷物面包配橄榄油 鲜榨蕃茄汁. 开学了,很辛苦,努力积累
正性能量继续加油!

【在 y***x 的大作中提到】
: 某日,受了委屈,心情极度不好,连pizza都欺负我
: 于是出现了此物,向黑暗料理界致敬之作

avatar
w*e
5
表达在细胞不同的部位,如
细胞核膜,细胞膜,其他细胞结构(如线粒体)不就可以了
有很多序列可以实现这些目的

【在 e***o 的大作中提到】
: 想在一个细胞里同时表达GFP, RFP,BFP,不知道用什么办法能让这几个蛋白成像时各
: 自分得比较开,没有overlapping,(就像做DNA FISH那样),
: 不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
: 不知道用弱启动子,或是加特殊的信号肽,比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
: 谢谢各位!

avatar
p*c
6
最讨厌深夜发图的了。。。。

【在 y***x 的大作中提到】
: 周末,回归光明料理界,健康又小资的一顿。
: 鲜蔬鸡肉丝,燕麦番茄汤,谷物面包配橄榄油 鲜榨蕃茄汁. 开学了,很辛苦,努力积累
: 正性能量继续加油!

avatar
e*o
7
谢谢回复。我这几个FP需要用同样的信号肽。或者都不用。我想弱启动子,膜会不会好
一些。
avatar
e*o
8
有个问题,若弱动子的话,gfp可能也看不清楚,background 太高。好像不好弄啊。
avatar
b*e
9
没太看懂。。。。
你是想用一个同样的信号肽带着不同的FPs,同时表达在一个细胞里?那他们三个都会
去同一个地方吧?比如你用CAAX,就会到膜上。
那你担心什么样的overlapping 问题?你这个表达的要求,他们三个的信号难道不是永
远在一起么?
avatar
w*e
10
我也没看懂lz的问题
不知道该怎么回了

【在 b*********e 的大作中提到】
: 没太看懂。。。。
: 你是想用一个同样的信号肽带着不同的FPs,同时表达在一个细胞里?那他们三个都会
: 去同一个地方吧?比如你用CAAX,就会到膜上。
: 那你担心什么样的overlapping 问题?你这个表达的要求,他们三个的信号难道不是永
: 远在一起么?

avatar
w*e
11
同样的信号肽 ?
这样就表达在同一个地方了呀,不和你的愿望矛盾?

【在 e***o 的大作中提到】
: 谢谢回复。我这几个FP需要用同样的信号肽。或者都不用。我想弱启动子,膜会不会好
: 一些。

avatar
e*o
12
不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
到一起了,只有一个颜色了。
我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
验。 不知道我表达清楚了没有。
感谢!
avatar
l*1
13
LZ 换位思考下 如何?
即使五颜六色
用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
哪怕 z 轴上的 overlapping
Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
spectra
http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf

【在 e***o 的大作中提到】
: 不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
: 彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
: 到一起了,只有一个颜色了。
: 我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
: 但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
: 验。 不知道我表达清楚了没有。
: 感谢!

avatar
s*s
14
混到一起怎么会是一个颜色?不同的激发和发散波长啊!
FP啥的最好不要弱表达,细胞快死的时候荧光背景还是很强的

【在 e***o 的大作中提到】
: 不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
: 彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
: 到一起了,只有一个颜色了。
: 我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
: 但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
: 验。 不知道我表达清楚了没有。
: 感谢!

avatar
b*e
15
lz列的这仨FPs,假设是用的最常用的那几个,激发、发射光谱几乎完全不overlay,别
说用confocal了,就是普通的荧光显微镜都能分清楚的啊。尤其是在每个channel单独
照,emission filter足够好的情况下。
我觉得lz可能没有搞清楚这三个颜色是不同的channel,是分开来照的。。。。

【在 l**********1 的大作中提到】
: LZ 换位思考下 如何?
: 即使五颜六色
: 用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
: 哪怕 z 轴上的 overlapping
: Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
: META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
: spectra
: http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
: http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf

avatar
n*k
16
cerulean/CFP vs YFP vs RFP 我们常拿来做三颜色共定位,多颜色比较某个的表达量
不能比其他的高太多。

【在 e***o 的大作中提到】
: 想在一个细胞里同时表达GFP, RFP,BFP,不知道用什么办法能让这几个蛋白成像时各
: 自分得比较开,没有overlapping,(就像做DNA FISH那样),
: 不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
: 不知道用弱启动子,或是加特殊的信号肽,比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
: 谢谢各位!

avatar
e*o
17
多谢各位的回复。应该是我没有表达清楚。这几种蛋白的ex/em肯定是可以分开的。我
的目的是想这几个蛋白分子在物理空间上分得比较开。这一点用靠分辨显微镜是比较容
易的,但在一般显微镜下,由于XFP表达都很多,就混在一起了,分子和分子之间分不
开。
最好就像做DNA FISH的染色,分得很开。
相关阅读
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章,不代表同意其说法或描述,仅为提供更多信息,也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责,与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿,如发现稿件侵权,或作者不愿在本网发表文章,请版权拥有者通知本网处理。