l*d
2 楼
Very well said.
How much time is granted for an international student to get a successful
startup in US?
Visa application (1 year) + work to impress boss in order to keep the H1B
visa job (2 – 3 years) + start to apply for the Green card (typically
requires 5 -6 years)
http://trackgc.com/tr/ViewArticle.aspx?ArticlePk=794
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requires 5 -6 years)
http://trackgc.com/tr/ViewArticle.aspx?ArticlePk=794
e*o
3 楼
想在一个细胞里同时表达GFP, RFP,BFP,不知道用什么办法能让这几个蛋白成像时各
自分得比较开,没有overlapping,(就像做DNA FISH那样),
不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
不知道用弱启动子,或是加特殊的信号肽,比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
谢谢各位!
自分得比较开,没有overlapping,(就像做DNA FISH那样),
不用很大的放大倍数就可以把几个蛋白分开.
不知道用弱启动子,或是加特殊的信号肽,比如锚定到细胞膜上或囊泡上什么的。
谢谢各位!
e*o
7 楼
谢谢回复。我这几个FP需要用同样的信号肽。或者都不用。我想弱启动子,膜会不会好
一些。
一些。
e*o
8 楼
有个问题,若弱动子的话,gfp可能也看不清楚,background 太高。好像不好弄啊。
b*e
9 楼
没太看懂。。。。
你是想用一个同样的信号肽带着不同的FPs,同时表达在一个细胞里?那他们三个都会
去同一个地方吧?比如你用CAAX,就会到膜上。
那你担心什么样的overlapping 问题?你这个表达的要求,他们三个的信号难道不是永
远在一起么?
你是想用一个同样的信号肽带着不同的FPs,同时表达在一个细胞里?那他们三个都会
去同一个地方吧?比如你用CAAX,就会到膜上。
那你担心什么样的overlapping 问题?你这个表达的要求,他们三个的信号难道不是永
远在一起么?
e*o
12 楼
不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
到一起了,只有一个颜色了。
我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
验。 不知道我表达清楚了没有。
感谢!
彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
到一起了,只有一个颜色了。
我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
验。 不知道我表达清楚了没有。
感谢!
l*1
13 楼
LZ 换位思考下 如何?
即使五颜六色
用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
哪怕 z 轴上的 overlapping
Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
spectra
http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf
【在 e***o 的大作中提到】
: 不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
: 彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
: 到一起了,只有一个颜色了。
: 我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
: 但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
: 验。 不知道我表达清楚了没有。
: 感谢!
即使五颜六色
用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
哪怕 z 轴上的 overlapping
Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
spectra
http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf
【在 e***o 的大作中提到】
: 不好意思,我没有表达得清楚。我的主要目的是表达这几个蛋白。让他们分的比较开,
: 彼此没有overlap(就像DNA FISH 那样,不同的颜色分得很开,各自独立)。不然就混
: 到一起了,只有一个颜色了。
: 我想过吧他们弄到细胞膜上,或囊泡上,什么的。不知道能不能通过confocal分开。
: 但是这几个construct要不不带信号肽,要不都得带一样的。因为我还得做得做别的实
: 验。 不知道我表达清楚了没有。
: 感谢!
b*e
15 楼
lz列的这仨FPs,假设是用的最常用的那几个,激发、发射光谱几乎完全不overlay,别
说用confocal了,就是普通的荧光显微镜都能分清楚的啊。尤其是在每个channel单独
照,emission filter足够好的情况下。
我觉得lz可能没有搞清楚这三个颜色是不同的channel,是分开来照的。。。。
【在 l**********1 的大作中提到】
: LZ 换位思考下 如何?
: 即使五颜六色
: 用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
: 哪怕 z 轴上的 overlapping
: Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
: META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
: spectra
: http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
: http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf
说用confocal了,就是普通的荧光显微镜都能分清楚的啊。尤其是在每个channel单独
照,emission filter足够好的情况下。
我觉得lz可能没有搞清楚这三个颜色是不同的channel,是分开来照的。。。。
【在 l**********1 的大作中提到】
: LZ 换位思考下 如何?
: 即使五颜六色
: 用LSM510 Meta (Zeiss) 可以试下 分开各色 signal 吧
: 哪怕 z 轴上的 overlapping
: Inverted LSM 510 laser scanning confocal microscope (Zeiss) - "Rocky"
: META detector for spectral unmixing of fluorochromes with overlapping
: spectra
: http://www.rockefeller.edu/bioimaging/equipment
: http://dbc.bio.uci.edu/pdf_documents/LSM510META_Zeiss.pdf
e*o
17 楼
多谢各位的回复。应该是我没有表达清楚。这几种蛋白的ex/em肯定是可以分开的。我
的目的是想这几个蛋白分子在物理空间上分得比较开。这一点用靠分辨显微镜是比较容
易的,但在一般显微镜下,由于XFP表达都很多,就混在一起了,分子和分子之间分不
开。
最好就像做DNA FISH的染色,分得很开。
的目的是想这几个蛋白分子在物理空间上分得比较开。这一点用靠分辨显微镜是比较容
易的,但在一般显微镜下,由于XFP表达都很多,就混在一起了,分子和分子之间分不
开。
最好就像做DNA FISH的染色,分得很开。
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