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ELISA新手问题

ELISA新手问题# Biology - 生物学

a*t2010-12-13 08:12

1 楼

贴吧丑女吧是我常去的地方，因为这个地方接地气。正如贴吧名，丑女吧，很多很多都
是女性发帖，在抱怨自己形象不好，导致自己的际遇很差，偶尔我也能看到一些失恋的
小伙，在上面倾诉心事。浏览了很多丑女的不幸经历，大多是幼年时受到重创，成年后
延续那种自卑的心情，或敏感易怒，或小心翼翼。我把一些帖子转给我的朋友看，她说
，这个吧里哪里有真正的丑女啊，其实都是心理作用。今晚的一个帖子内容是给丑女吧
的女性同胞打气，但是无人问津。
从我个人的经历上看，我不怪丑女吧的丑女们这么冷漠，因为这个社会的男生以什么为
乐趣呢？刷级打怪，美女直播，聊天的时候往往是哪个系系花是谁，杂志哪个女孩好看
，带来的结果就是对于现实生活中的女孩们，尤其特指普通女孩的忽视和无所顾忌的聊
天方式，这给异性传达的一是自己并不受重视，不吸引人，二是男生们普遍看的是颜值
而不是内心。当心灵鸡汤普及女生只要不懒，花时间打扮就会有男生爱上你的时候，我
们都会抱着期待，而当我们真正这么做了，又会发现，他们眼睛很毒，可能只是不解你
为什么突然间这么大变化，你是受了哪个高人指点，他的审美并没有下滑到你目前上升
到的高度。于是心灵鸡汤就是毒鸡汤了。
对于我，也是一个貌不惊人的丑女，我觉得人可以被别人不重视看不上，但是自己要鼓
足勇气去生活，去让微笑萦绕在自己的脸上，改变自己的命格，用乐观换得更多的人生
机会，方能改变命运，而不是去自怨自艾，你改变不了别人，只能改变你自己。

o*e2010-12-13 08:12

2 楼

用比如NaHCO3/Na2CO3 buffer coating（antigen or antibody）完，甩掉后，
一定要洗，还是可洗可不洗？
加完blocking solution，block完，甩掉后，
一定要洗，还是可洗可不洗？
感觉block完后，似乎可以不洗，反正残余的可以继续block些空位？

c*i2010-12-13 08:12

3 楼

这两步都可以不洗。blocking buffer一般不加tween吧，不过加了也没啥问题

TBS？

【在 o****e 的大作中提到】

: 用比如NaHCO3/Na2CO3 buffer coating（antigen or antibody）完，甩掉后，
: 一定要洗，还是可洗可不洗？
: 加完blocking solution，block完，甩掉后，
: 一定要洗，还是可洗可不洗？
: 感觉block完后，似乎可以不洗，反正残余的可以继续block些空位？

f*r2010-12-13 08:12

4 楼

coating完毕，到加样品之前，要彻底洗一下。洗液加满，至少5遍。
同理，联酶抗体孵育完毕，到加显色剂之前，也要彻底洗一下。
中间的冲洗，不认真也没关系。
冲洗的时候，只要不是用力喷射，而且没有用枪头刮well内壁的话，是不会把抗原、抗
体、封闭分子洗下来的。
加一句：以上方法只适用于三明治elisa。而不可用于竞争性elisa。

b*r2010-12-13 08:12

5 楼

正解，一看就是老手

【在 f*********r 的大作中提到】

: coating完毕，到加样品之前，要彻底洗一下。洗液加满，至少5遍。
: 同理，联酶抗体孵育完毕，到加显色剂之前，也要彻底洗一下。
: 中间的冲洗，不认真也没关系。
: 冲洗的时候，只要不是用力喷射，而且没有用枪头刮well内壁的话，是不会把抗原、抗
: 体、封闭分子洗下来的。
: 加一句：以上方法只适用于三明治elisa。而不可用于竞争性elisa。

f*r2010-12-13 08:12

6 楼

客气客气。这东西我做过5年多。没有上千，也有几百盘。做到最后，都不用plate
reader，看一眼就知道结果了（开玩笑）。现在看见12X8的组合就想吐。不过也总结出
不少道道。别人买1个kit做1盘，我现在1盘变5盘。

【在 b****r 的大作中提到】

: 正解，一看就是老手

p*i2010-12-13 08:12

7 楼

請問是如何1變5的～

【在 f*********r 的大作中提到】

: 客气客气。这东西我做过5年多。没有上千，也有几百盘。做到最后，都不用plate
: reader，看一眼就知道结果了（开玩笑）。现在看见12X8的组合就想吐。不过也总结出
: 不少道道。别人买1个kit做1盘，我现在1盘变5盘。

f*r2010-12-13 08:12

8 楼

商业机密。（开玩笑啦）
我是不会随便推荐厂家说明书以外的用法。一来不想对不成功的结果负责，二来也不想
对成功的、但是不被审稿人接受的结果负责。
给你一个提示：kit提供的coating ab，capturing ab，显色剂等，都是“绝对过量”
的。

【在 p******i 的大作中提到】

: 請問是如何1變5的～

p*i2010-12-13 08:12

9 楼

恩,恩
多謝您~
不過, 什麼情況下審稿人不接受成功的結果呢...比較好奇 :)

【在 f*********r 的大作中提到】

: 商业机密。（开玩笑啦）
: 我是不会随便推荐厂家说明书以外的用法。一来不想对不成功的结果负责，二来也不想
: 对成功的、但是不被审稿人接受的结果负责。
: 给你一个提示：kit提供的coating ab，capturing ab，显色剂等，都是“绝对过量”
: 的。

f*r2010-12-13 08:12

10 楼

假设我审稿，投稿人说他买来kit，但是
多次回收重复使用coating ab
稀释样品（包括standards）至厂家建议的浓度的20%甚至更多
明显降低capturing ab和显色剂
或者与别家产品混用
等等
就算最后结果无异，我也会拒他。理由：破坏游戏规则。NIH发我们这么多钱，不是让
我们节约的，而是应该使劲花，养活下游企业的。

【在 p******i 的大作中提到】

: 恩,恩
: 多謝您~
: 不過, 什麼情況下審稿人不接受成功的結果呢...比較好奇 :)

p*i2010-12-13 08:12

11 楼

啊，這樣說確實也 Make Sense ……
再次感謝～

【在 f*********r 的大作中提到】

: 假设我审稿，投稿人说他买来kit，但是
: 多次回收重复使用coating ab
: 稀释样品（包括standards）至厂家建议的浓度的20%甚至更多
: 明显降低capturing ab和显色剂
: 或者与别家产品混用
: 等等
: 就算最后结果无异，我也会拒他。理由：破坏游戏规则。NIH发我们这么多钱，不是让
: 我们节约的，而是应该使劲花，养活下游企业的。

M*n2010-12-13 08:12

12 楼

as long as you do it consistently each time, I don't see any difference it makes。

s*n2010-12-13 08:12

13 楼

搭车问前辈个问题，ELISA检测T cell IL-2 production的实验，如果background比较
高，有什么办法降低background么？
多谢了先！

【在 f*********r 的大作中提到】

f*r2010-12-13 08:12

14 楼

我昨天看到你的问题，想了一晚上，还是没能确定你说的背景是个啥。你能不能具体说
说是怎么回事？

【在 s********n 的大作中提到】

: 搭车问前辈个问题，ELISA检测T cell IL-2 production的实验，如果background比较
: 高，有什么办法降低background么？
: 多谢了先！