原核表达蛋白的毒性问题# Biology - 生物学
H*s
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现在在尝试用原核系统(E.coli)表达一个病毒蛋白(400aa),T7 promoter,BL21(DE3
) host。现在遇到了一个难题,这个基因怎么也克隆不到原核表达载体里去。转化后有
colonies,但是小提质粒后发现没有插入片段。
首先排除的是克隆问题,同样的片段,同样的酶切位点,使用完全同样的试剂,该基因
很容易就克隆到真核表达载体里去。
尝试了cytoplasm表达载体,periplasm表达载体,和不同的宿主菌,都是同样的结果。
(原核表达老手了,头一次遇到这种情况)。
是不是此蛋白毒性太大,即使是一点点的leaky expression都不行?
我现在在想的试验是:(1)做一个这个基因的文库,来看看到底是哪部分有毒性;(2
)使用GroES的leader peptide试试看。
各位有没有什么建议?谢谢。
) host。现在遇到了一个难题,这个基因怎么也克隆不到原核表达载体里去。转化后有
colonies,但是小提质粒后发现没有插入片段。
首先排除的是克隆问题,同样的片段,同样的酶切位点,使用完全同样的试剂,该基因
很容易就克隆到真核表达载体里去。
尝试了cytoplasm表达载体,periplasm表达载体,和不同的宿主菌,都是同样的结果。
(原核表达老手了,头一次遇到这种情况)。
是不是此蛋白毒性太大,即使是一点点的leaky expression都不行?
我现在在想的试验是:(1)做一个这个基因的文库,来看看到底是哪部分有毒性;(2
)使用GroES的leader peptide试试看。
各位有没有什么建议?谢谢。