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求教：带有flag tag的蛋白纯化

求教：带有flag tag的蛋白纯化# Biology - 生物学

t*x2011-01-13 08:01

1 楼

我想约4月1号的，开放了吗？

l*22011-01-13 08:01

2 楼

还是那句话，成熟的大公司，到这时候，早就PROD FREEZE了，该休假的早就跑路了。
留下的人顶多干干修修补补的事情，把手头攒着的REVIEW看看，把没写完的DESIGN DOC
写写，IF ANY。
你说哪个大公司的人，一年都不忙，这时候突然开始忙了，有点工作经验的人谁信啊？
好虫整天说别人太监，尿遁，结果自己先尿遁了？太让人失望了，枉我给你站了一个星
期台。

l*g2011-01-13 08:01

3 楼

请问带有flag tag的蛋白能用含有500 mM NaCl的buffer做bingding buffer吗？

T*i2011-01-13 08:01

4 楼

这两年来，我被好虫追着骂。你可以翻翻他的帖子。他骂我的哪句话能够成立？更不用
说每贴里面的胡言秽语了。

p*i2011-01-13 08:01

5 楼

為啥要用到這麼高濃度的NaCl?
btw，你用啥purify? M2-beads? 有沒有說明書？

【在 l********g 的大作中提到】

: 请问带有flag tag的蛋白能用含有500 mM NaCl的buffer做bingding buffer吗？

w*z2011-01-13 08:01

6 楼

人说了，年底之前给答复，不差再等10天吧。

DOC

【在 l**********2 的大作中提到】

: 还是那句话，成熟的大公司，到这时候，早就PROD FREEZE了，该休假的早就跑路了。
: 留下的人顶多干干修修补补的事情，把手头攒着的REVIEW看看，把没写完的DESIGN DOC
: 写写，IF ANY。
: 你说哪个大公司的人，一年都不忙，这时候突然开始忙了，有点工作经验的人谁信啊？
: 好虫整天说别人太监，尿遁，结果自己先尿遁了？太让人失望了，枉我给你站了一个星
: 期台。

l*g2011-01-13 08:01

7 楼

用高浓度NaCl是因为蛋白不是很稳定。
我是用M2-beads纯化的，说明书上直接推荐了一款产品作为lysis buffer，
我查了一下这种lysis buffer的盐浓度是150 mM，但是在这个浓度下我蛋白可能不稳定
。。
另外，我的lysis buffer还加了15%的甘油。
我新手，不是很清楚用flag tag纯化的时候需要注意什么。
还请大牛们指点指点

【在 p******i 的大作中提到】

: 為啥要用到這麼高濃度的NaCl?
: btw，你用啥purify? M2-beads? 有沒有說明書？

T*r2011-01-13 08:01

8 楼

这厮尿循也不止一两次了，可是事后居然还有脸出来骂得更凶。。。
在篮球版跟人单挑1对1，对方机票都买好了，goodbug说他大姨妈来了。。。
在股票版，给我老算来美国几年，工作几年，工资最多多少，“根本不可能”有钱买
400个apple put，跟我老打赌，输了吃屎，验证交易的湾区网友都超过十几个了，丫最
后也不露面，风头一过，照样出来满口喷粪。。。

z*g2011-01-13 08:01

9 楼

go ahead, not big deal.

【在 l********g 的大作中提到】

: 请问带有flag tag的蛋白能用含有500 mM NaCl的buffer做bingding buffer吗？

p*22011-01-13 08:01

10 楼

傻逼，你能否有多远滚多远，你怎么不被车撞死，脑浆流一地啊？

【在 T*****r 的大作中提到】

: 这厮尿循也不止一两次了，可是事后居然还有脸出来骂得更凶。。。
: 在篮球版跟人单挑1对1，对方机票都买好了，goodbug说他大姨妈来了。。。
: 在股票版，给我老算来美国几年，工作几年，工资最多多少，“根本不可能”有钱买
: 400个apple put，跟我老打赌，输了吃屎，验证交易的湾区网友都超过十几个了，丫最
: 后也不露面，风头一过，照样出来满口喷粪。。。

h*c2011-01-13 08:01

11 楼

我记得是圣诞之前吧。

【在 w**z 的大作中提到】

: 人说了，年底之前给答复，不差再等10天吧。
:
: DOC

T*e2011-01-13 08:01

12 楼

可以理解，这很正常。 PROD FREEZE不等于
研发和设计停了。我下个季度前也要赶出手上的俩个
项目的编程和设计部分。测试下季度再做。好虫完全有可能
得为下季度做各种项目的planning.

DOC

【在 l**********2 的大作中提到】

b*s2011-01-13 08:01

13 楼

it must be true love

【在 T*******e 的大作中提到】

: 可以理解，这很正常。 PROD FREEZE不等于
: 研发和设计停了。我下个季度前也要赶出手上的俩个
: 项目的编程和设计部分。测试下季度再做。好虫完全有可能
: 得为下季度做各种项目的planning.
:
: DOC

T*e2011-01-13 08:01

14 楼

？

【在 b*******s 的大作中提到】

: it must be true love

e*o2011-01-13 08:01

15 楼

这个很明显是魏老师的强项，多给好虫点时间也正常。
我觉得敢接招就很不错，不服的跟魏老师来两个回合不就好了。
我前后端都搞，也是吃程序员这碗饭的，但是魏老师的代码，硬是看不懂。

T*e2011-01-13 08:01

16 楼

希望这次赌约后，大家能好好讨论问题。本来
这个版还是不错的。

【在 T********i 的大作中提到】

: 这两年来，我被好虫追着骂。你可以翻翻他的帖子。他骂我的哪句话能够成立？更不用
: 说每贴里面的胡言秽语了。

g*g2011-01-13 08:01

17 楼

你傻逼吧，我要是要尿遁何必给自己设 deadline。我老也从来没说过自己平时不忙。
我老说了不出结果之前不评论，反而变成靶子了。我们年底有prod freeze不假，所以
prof freeze之前赶release特别忙，每年如此。

DOC

【在 l**********2 的大作中提到】

t*a2011-01-13 08:01

18 楼

郝总来了慌鸡毛啊坐看郝总出手

【在 g*****g 的大作中提到】

: 你傻逼吧，我要是要尿遁何必给自己设 deadline。我老也从来没说过自己平时不忙。
: 我老说了不出结果之前不评论，反而变成靶子了。我们年底有prod freeze不假，所以
: prof freeze之前赶release特别忙，每年如此。
:
: DOC

h*c2011-01-13 08:01

19 楼

郝老师的deadline似乎是浮动的。前面说是圣诞以前，现在貌似是新年前了。等下变农
历新年了。魏老师给自己设了个strict deadline, 没给郝老师设，貌似吃了亏。

【在 t******a 的大作中提到】

: 郝总来了慌鸡毛啊坐看郝总出手

g*g2011-01-13 08:01

20 楼

我只给自己设过一个 deadline，傻逼们你们注册一堆马甲出来丢人有用吗？
太监尿遁一遁就是一年，我老度假几天你们都等不了。得被我操成啥样才连这点耐心都
没有。真是大太监不急急死小太监。

【在 h*c 的大作中提到】

: 郝老师的deadline似乎是浮动的。前面说是圣诞以前，现在貌似是新年前了。等下变农
: 历新年了。魏老师给自己设了个strict deadline, 没给郝老师设，貌似吃了亏。

T*r2011-01-13 08:01

21 楼

哈哈，就一傻x，不懂就闭嘴，猪鼻子插葱装什么象啊？被雷劈得个外焦里嫩，好一个
丢人现眼！
现在无非是“死刑立即执行”和“死缓一周”罢了，早死早超生，要牢记我老的忠告，
下辈子选一家基因
好点的投胎，要不还是一辈子有傻又蠢，再怎么练，羽毛球也打不过我老！：）

【在 g*****g 的大作中提到】

h*c2011-01-13 08:01

22 楼

郝老师真是好涵养。在下拜服。您说的对，我错了。您不急我们当然不急。

【在 g*****g 的大作中提到】

: 我只给自己设过一个 deadline，傻逼们你们注册一堆马甲出来丢人有用吗？
: 太监尿遁一遁就是一年，我老度假几天你们都等不了。得被我操成啥样才连这点耐心都
: 没有。真是大太监不急急死小太监。