关于293细胞和lentivirus# Biology - 生物学
x*w
1 楼
Interview 里有个问题是这样问的：
Describe you current ideal working environment。
我的理解是问我认为的理想工作环境。不知道我的理解对不对，请大家指教一下。
多谢！
Describe you current ideal working environment。
我的理解是问我认为的理想工作环境。不知道我的理解对不对，请大家指教一下。
多谢！
f*u
2 楼
租的房子，用棍子捅天花板好像没有反应，我只好打了911.有什么更好的方法吗？
D*w
3 楼
大概是最大屏幕的GPS
D*y
4 楼
最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
多谢！
。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
多谢！
S*Y
5 楼
应该是吧
【在 x****w 的大作中提到】
: Interview 里有个问题是这样问的：
: Describe you current ideal working environment。
: 我的理解是问我认为的理想工作环境。不知道我的理解对不对，请大家指教一下。
: 多谢！
【在 x****w 的大作中提到】
: Interview 里有个问题是这样问的：
: Describe you current ideal working environment。
: 我的理解是问我认为的理想工作环境。不知道我的理解对不对，请大家指教一下。
: 多谢！
m*s
6 楼
1. better talk to apartment management
2. if no manager, go upstairs and talk to your neighbor.
what you did would only make your situation worse
【在 f****u 的大作中提到】
: 租的房子，用棍子捅天花板好像没有反应，我只好打了911.有什么更好的方法吗？
2. if no manager, go upstairs and talk to your neighbor.
what you did would only make your situation worse
【在 f****u 的大作中提到】
: 租的房子，用棍子捅天花板好像没有反应，我只好打了911.有什么更好的方法吗？
f*i
7 楼
曾经有一段时间流行过bluetooth GPS sensor + laptop
【在 D*w 的大作中提到】
: 大概是最大屏幕的GPS
【在 D*w 的大作中提到】
: 大概是最大屏幕的GPS
p*d
8 楼
能的。
c*2
9 楼
放哪啊，大哥，那么大个东西!一般GPS能听声音就不用看屏幕，多看看路。
T*e
10 楼
先低速离心，再过滤
c*h
11 楼
我自己DIY了个卡在出气孔那里，用得很爽。安上取下也挺方便。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 c******2 的大作中提到】
: 放哪啊，大哥，那么大个东西!一般GPS能听声音就不用看屏幕，多看看路。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 c******2 的大作中提到】
: 放哪啊，大哥，那么大个东西!一般GPS能听声音就不用看屏幕，多看看路。
l*g
12 楼
293T 平均16个micron，过不了filter的。过滤完你看一下就知道了。
你看到的是你后来感染的细胞吧？
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
你看到的是你后来感染的细胞吧？
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
c*2
13 楼
个人认为7"都嫌大了，准确的TTL才是王道，当然车上有两个人的时候大屏幕还是不错
的，但前提还是要有好的TTL。出于安全考虑，最好的GPS位置应该是平视可见，还不挡
视野，所以不应该太大。
的，但前提还是要有好的TTL。出于安全考虑，最好的GPS位置应该是平视可见，还不挡
视野，所以不应该太大。
D*y
14 楼
非常感谢大家的回复。看起来可能是后来感染的细胞。但是就是形态比较怪
【在 l******g 的大作中提到】
: 293T 平均16个micron，过不了filter的。过滤完你看一下就知道了。
: 你看到的是你后来感染的细胞吧？
:
: cells
【在 l******g 的大作中提到】
: 293T 平均16个micron，过不了filter的。过滤完你看一下就知道了。
: 你看到的是你后来感染的细胞吧？
:
: cells
a*e
15 楼
怎么做的，有图吗？
【在 c*****h 的大作中提到】
: 我自己DIY了个卡在出气孔那里，用得很爽。安上取下也挺方便。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 c*****h 的大作中提到】
: 我自己DIY了个卡在出气孔那里，用得很爽。安上取下也挺方便。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
D*y
16 楼
非常感谢大家的回复。看起来可能是后来感染的细胞。但是就是形态比较怪
【在 l******g 的大作中提到】
: 293T 平均16个micron，过不了filter的。过滤完你看一下就知道了。
: 你看到的是你后来感染的细胞吧？
:
: cells
【在 l******g 的大作中提到】
: 293T 平均16个micron，过不了filter的。过滤完你看一下就知道了。
: 你看到的是你后来感染的细胞吧？
:
: cells
j*x
17 楼
如果用的是VSVG，那么这种形态是非常典型的，多个细胞聚集成团，形态变圆，
由于VSVG的细胞毒性造成的。
不过看来你的包转效率不够高啊，否则的话感染之后一般满屏都是阳性细胞根本
不用去怀疑是不是没有被过滤掉的273T
【在 D***y 的大作中提到】
: 非常感谢大家的回复。看起来可能是后来感染的细胞。但是就是形态比较怪
由于VSVG的细胞毒性造成的。
不过看来你的包转效率不够高啊，否则的话感染之后一般满屏都是阳性细胞根本
不用去怀疑是不是没有被过滤掉的273T
【在 D***y 的大作中提到】
: 非常感谢大家的回复。看起来可能是后来感染的细胞。但是就是形态比较怪
D*y
18 楼
用的是vsvg。不知道为什么包转效率很低。转293T后看了一下gfp,很多细胞是positive
的。
【在 j****x 的大作中提到】
: 如果用的是VSVG，那么这种形态是非常典型的，多个细胞聚集成团，形态变圆，
: 由于VSVG的细胞毒性造成的。
: 不过看来你的包转效率不够高啊，否则的话感染之后一般满屏都是阳性细胞根本
: 不用去怀疑是不是没有被过滤掉的273T
的。
【在 j****x 的大作中提到】
: 如果用的是VSVG，那么这种形态是非常典型的，多个细胞聚集成团，形态变圆，
: 由于VSVG的细胞毒性造成的。
: 不过看来你的包转效率不够高啊，否则的话感染之后一般满屏都是阳性细胞根本
: 不用去怀疑是不是没有被过滤掉的273T
h*l
19 楼
concentrate your virus soup via ultracentrifugation or PEG will help.
B*o
20 楼
病毒感染细胞也要一段时间才能表达的
一般2-3天才会有GFP出来。24小时太短了些
多留一会儿才能比较准确的知道virus titer如何
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
一般2-3天才会有GFP出来。24小时太短了些
多留一会儿才能比较准确的知道virus titer如何
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
b*k
21 楼
gfp usually only take overnight to get expressed, if use cmv promoter
【在 B******o 的大作中提到】
: 病毒感染细胞也要一段时间才能表达的
: 一般2-3天才会有GFP出来。24小时太短了些
: 多留一会儿才能比较准确的知道virus titer如何
:
: cells
【在 B******o 的大作中提到】
: 病毒感染细胞也要一段时间才能表达的
: 一般2-3天才会有GFP出来。24小时太短了些
: 多留一会儿才能比较准确的知道virus titer如何
:
: cells
B*o
22 楼
你说的plasmid转染还是病毒感染？
lentivirus从感染细胞到整合到基因组到表达蛋白都需要时间
你能给个24时就能看的reference么？
俺先给俺的吧。System biosciences的protocol明确写了3天。Openbiosystems明确写
的2天。自己的经历也是至少2天。无论是CMV,PGK,or MMLV promoter。
【在 b******k 的大作中提到】
: gfp usually only take overnight to get expressed, if use cmv promoter
lentivirus从感染细胞到整合到基因组到表达蛋白都需要时间
你能给个24时就能看的reference么？
俺先给俺的吧。System biosciences的protocol明确写了3天。Openbiosystems明确写
的2天。自己的经历也是至少2天。无论是CMV,PGK,or MMLV promoter。
【在 b******k 的大作中提到】
: gfp usually only take overnight to get expressed, if use cmv promoter
D*y
23 楼
GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
【在 b******k 的大作中提到】
: gfp usually only take overnight to get expressed, if use cmv promoter
我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
【在 b******k 的大作中提到】
: gfp usually only take overnight to get expressed, if use cmv promoter
B*o
24 楼
你问题里提到的24小时候之看到很少的细胞是GFP+。 这是infected的吧？
infected cells need at least 2 days to express the transgenes. 如果你仅仅在
24小时后就去check GFP，很难看到positive的细胞。应该多留一下，过一天再看，才
能知道你的virus titer到底如何。
如果2-3天后，infected的细胞里GFP+的还很少。那么说明你virus titer很低。这时候
你得去查是不是transfection效率不够，如果不是，那么说明你的packaging plasmid
或者packaging cells不好。
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
infected cells need at least 2 days to express the transgenes. 如果你仅仅在
24小时后就去check GFP，很难看到positive的细胞。应该多留一下，过一天再看，才
能知道你的virus titer到底如何。
如果2-3天后，infected的细胞里GFP+的还很少。那么说明你virus titer很低。这时候
你得去查是不是transfection效率不够，如果不是，那么说明你的packaging plasmid
或者packaging cells不好。
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
j*x
25 楼
“很多”是不够的，基本上293T转染的效率应该达到至少90%以上
positive
【在 D***y 的大作中提到】
: 用的是vsvg。不知道为什么包转效率很低。转293T后看了一下gfp,很多细胞是positive
: 的。
positive
【在 D***y 的大作中提到】
: 用的是vsvg。不知道为什么包转效率很低。转293T后看了一下gfp,很多细胞是positive
: 的。
j*x
26 楼
我上过流式，24小时之后确实就能检测到，不过信号相对很弱，48小时肯定就没问题了。
这也和细胞系有一定关系
【在 B******o 的大作中提到】
: 你说的plasmid转染还是病毒感染？
: lentivirus从感染细胞到整合到基因组到表达蛋白都需要时间
: 你能给个24时就能看的reference么？
: 俺先给俺的吧。System biosciences的protocol明确写了3天。Openbiosystems明确写
: 的2天。自己的经历也是至少2天。无论是CMV,PGK,or MMLV promoter。
这也和细胞系有一定关系
【在 B******o 的大作中提到】
: 你说的plasmid转染还是病毒感染？
: lentivirus从感染细胞到整合到基因组到表达蛋白都需要时间
: 你能给个24时就能看的reference么？
: 俺先给俺的吧。System biosciences的protocol明确写了3天。Openbiosystems明确写
: 的2天。自己的经历也是至少2天。无论是CMV,PGK,or MMLV promoter。
L*O
27 楼
yes~~~
0.45um filter 能把293T去掉吗？
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
0.45um filter 能把293T去掉吗？
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
T*e
28 楼
用过FUGW的 lentiviru, 不知道和FUW是不是类似的，确实是gfp表达很快，信号强。不
管原代细胞还是细胞系，加入病毒
overnight就可以在显微镜下看到荧光。
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
管原代细胞还是细胞系，加入病毒
overnight就可以在显微镜下看到荧光。
【在 D***y 的大作中提到】
: GFP 24小时应该够了。我转染后20个小时左右check，已经有很强的信号。
: 我用的是FUW的lentivirus vector.板上不知道有没有人用过？
d*p
29 楼
what you saw might be cell debris. They are GFP positive and attach to cells
. Check it at 48 hr.
. Check it at 48 hr.
C*h
30 楼
filter之后，在benchtop centrifuge里，离心10秒钟，去处少量debris
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
cells
【在 D***y 的大作中提到】
: 最近开始用293Tproduce lentivirus，收集上清后过0.45um filter,然后Infect cells
: 。24小时后check GFP，只有很少的细胞gfp positive的，而且是一簇一簇的。看形态
: 像293T细胞，想问各位一下：0.45um filter 能把293T去掉吗？
: 多谢！
P*r
31 楼
我的理解Lentivirus 是慢的，不会很快见到GFP。摘自维基百科：
Lentivirus (lenti-, Latin for "slow") is a genus of slow viruses of the
Retroviridae family, characterized by a long incubation period. Lentiviruses
can deliver a significant amount of genetic information into the DNA of the
host cell and have the unique ability among retroviruses of being able to
replicate in non-dividing cells。
Lentivirus (lenti-, Latin for "slow") is a genus of slow viruses of the
Retroviridae family, characterized by a long incubation period. Lentiviruses
can deliver a significant amount of genetic information into the DNA of the
host cell and have the unique ability among retroviruses of being able to
replicate in non-dividing cells。
D*y
32 楼
我们用的是一样的。能告诉一下你用的什么packing 和envelop vector吗？
【在 T********e 的大作中提到】
: 用过FUGW的 lentiviru, 不知道和FUW是不是类似的，确实是gfp表达很快，信号强。不
: 管原代细胞还是细胞系，加入病毒
: overnight就可以在显微镜下看到荧光。
【在 T********e 的大作中提到】
: 用过FUGW的 lentiviru, 不知道和FUW是不是类似的，确实是gfp表达很快，信号强。不
: 管原代细胞还是细胞系，加入病毒
: overnight就可以在显微镜下看到荧光。
T*e
33 楼
暂时找不到具体的vector图谱。
我们用三个helper vector：p-gag／pol； p-vsvg; prsv－rev。不知道有没有帮助
【在 D***y 的大作中提到】
: 我们用的是一样的。能告诉一下你用的什么packing 和envelop vector吗？
我们用三个helper vector：p-gag／pol； p-vsvg; prsv－rev。不知道有没有帮助
【在 D***y 的大作中提到】
: 我们用的是一样的。能告诉一下你用的什么packing 和envelop vector吗？
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