T*t
3 楼
Stratagene的QuikChange Kit,我所有的mutants都是用这个kit做的。
Stratagene现在改名叫Agilent Genomics了。
自己PCR也行啊,用kit主要是方便,所有需要的东西都给你配好了,多省事。要不然你
不是还得另外买限制酶和感受态细胞么。
Stratagene现在改名叫Agilent Genomics了。
自己PCR也行啊,用kit主要是方便,所有需要的东西都给你配好了,多省事。要不然你
不是还得另外买限制酶和感受态细胞么。
p*o
6 楼
NEB的Phusion系统,保证你用了就不想用其他的系统了
s*s
7 楼
我送你一个,屡试不爽的~
1.Computer-Aid Primer design
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
2.Mutagenesis(20uL) :
5XBuffer: 5uL
dNTP(5mM):0.5uL
oligo(F):0.5uL
oligo(R):0.5
template:100ng
DMSO:1.25uL
Phusion:0.3uL
Add water to 20uL
PCR setup
98 C, 30'
98 C, 10' --
65 C, 30' -- (X 23 cycle)
72 C, 4min --
72 C, 10min
4 C, forever
3.Dpn I digestion( 1uL and at least 3 hours)
4.transformation(5uL)
1.Computer-Aid Primer design
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
2.Mutagenesis(20uL) :
5XBuffer: 5uL
dNTP(5mM):0.5uL
oligo(F):0.5uL
oligo(R):0.5
template:100ng
DMSO:1.25uL
Phusion:0.3uL
Add water to 20uL
PCR setup
98 C, 30'
98 C, 10' --
65 C, 30' -- (X 23 cycle)
72 C, 4min --
72 C, 10min
4 C, forever
3.Dpn I digestion( 1uL and at least 3 hours)
4.transformation(5uL)
n*w
8 楼
Thank you!
【在 s*********s 的大作中提到】
: 我送你一个,屡试不爽的~
: 1.Computer-Aid Primer design
: http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
: 2.Mutagenesis(20uL) :
: 5XBuffer: 5uL
: dNTP(5mM):0.5uL
: oligo(F):0.5uL
: oligo(R):0.5
: template:100ng
: DMSO:1.25uL
【在 s*********s 的大作中提到】
: 我送你一个,屡试不爽的~
: 1.Computer-Aid Primer design
: http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
: 2.Mutagenesis(20uL) :
: 5XBuffer: 5uL
: dNTP(5mM):0.5uL
: oligo(F):0.5uL
: oligo(R):0.5
: template:100ng
: DMSO:1.25uL
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