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请教PCR产物中为什么会有两条很近的条带?
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请教PCR产物中为什么会有两条很近的条带?# Biology - 生物学
b*G
1
爸妈不确定来了住多久,想订个开口票随时想回去就回去,但不知道价钱方面差距大到
什么程度,哪里订票合算,还请内行指教
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v*a
2
要克隆一个gene,发现用我自己培养的细胞来PCR扩增时,大部分P不出,少数P得出。
用别人养的相同的细胞,都P不出。凡是P出来的,会有两条靠得很近很近的条带(~1.
5kb)。
然后我就挖了上面的那一条下来,做成plasmid了,测序也都完全正确。
这次要做recombinant protein,所以重新设计了primer(PCR产物很短,只有600多bp
),用上次做的现成的plasmid进行PCR,结果又P出来两条很近的条带。
有点想不通,请教一下大家这是怎么回事呢?
另,做western blot时偶尔也出现靠得很近的条带(忽而又只有一条),没有见过有相
关isoform的报导。
谢谢!
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s*r
3
你对开口票的理解比较独特 呵呵
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a*d
4
splicing?
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h*s
5
RE
一般开口票是指到和回不是一个地方,比如北京到纽约,再从波士顿回北京。
你说的那个票很贵,比现在买往返然后改期还贵(一般改期只要不是旺季,罚款加仓位
差价最多加个五六百美元就差不多了);那个一年内随时走的往返没3000下不来。

【在 s*******r 的大作中提到】
: 你对开口票的理解比较独特 呵呵
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v*a
6
在plasmid中应该不会有这样的情况吧?

【在 a****d 的大作中提到】
: splicing?
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l*0
7
韩国的航班以前是改回程时间不要钱,后来变成只能改一次不要钱,不知道现在怎么样
了,去问问agent?
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b*n
8
自己配的那种loading dye,而且颜色棕红的,不是蓝色的?

bp

【在 v***a 的大作中提到】
: 要克隆一个gene,发现用我自己培养的细胞来PCR扩增时,大部分P不出,少数P得出。
: 用别人养的相同的细胞,都P不出。凡是P出来的,会有两条靠得很近很近的条带(~1.
: 5kb)。
: 然后我就挖了上面的那一条下来,做成plasmid了,测序也都完全正确。
: 这次要做recombinant protein,所以重新设计了primer(PCR产物很短,只有600多bp
: ),用上次做的现成的plasmid进行PCR,结果又P出来两条很近的条带。
: 有点想不通,请教一下大家这是怎么回事呢?
: 另,做western blot时偶尔也出现靠得很近的条带(忽而又只有一条),没有见过有相
: 关isoform的报导。
: 谢谢!

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D*t
9
That could be different isoforms. Why not clone the lower band and sequence
it?
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v*a
10
不是啊,是蓝色的。这个loading dye会有影响吗?

【在 b******n 的大作中提到】
: 自己配的那种loading dye,而且颜色棕红的,不是蓝色的?
:
: bp

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v*a
11
这是个好主意,下次试试。
另,isoforms到底是怎么回事呢,总是有点不甚了了,牛人能给解释一下吗?比方说我
这个例子,从plasmid是如何产生的。多谢!

sequence

【在 D******t 的大作中提到】
: That could be different isoforms. Why not clone the lower band and sequence
: it?

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b*n
12
发现过用自己配的loading dye,如果pH没调整好
会引起DNA的电泳行为发生变化
比如本来1.2k,跑出来800bp
那种有双带的可以用商用loading dye上样重新跑一下

【在 v***a 的大作中提到】
: 不是啊,是蓝色的。这个loading dye会有影响吗?
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v*a
13
多谢!我们这个应该是商用的,反正自己没配过,有公用的一个stock。

【在 b******n 的大作中提到】
: 发现过用自己配的loading dye,如果pH没调整好
: 会引起DNA的电泳行为发生变化
: 比如本来1.2k,跑出来800bp
: 那种有双带的可以用商用loading dye上样重新跑一下

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w*z
14
template switch?
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