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弱弱地请教酶切问题!!!
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弱弱地请教酶切问题!!!# Biology - 生物学
o*2
1
paper里打算画一个grain boundary diffusion的图,晶粒形状不规则,
所以PPT不好搞,有没有好的软件推荐?我知道最牛的是Illustrator,有没有什么其次
,learning curve没有太强的?
类似这样的:
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s*k
2
好久没上正餐了
来个刚做的午餐吧
大家请忽略粗细不一的土豆丝= =
也请忽略有点焦的青椒
慢了一小会儿把菜从锅里移出来就焦了。。。55555555555555555555
味道还算欣慰。。。
嘿嘿
很简单滴~~~
==========================
土豆一个 青辣椒1个 花椒10粒左右 干红辣椒2个掰开 白醋 糖 盐
油五成热 下花椒 出香味 捞出
下红辣椒 然后速度下青辣椒
炒一下 速度下土豆丝
速度喷白醋 量自己掌握
调味
速度出锅!!!
要不然就是我这样的杯具 - -。。。
好啦~~~
我是来赚包子滴~~哇咔咔
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k*e
3
请问一下牛人们
有没有什么12个月一直0%purchase APY的卡比较好申呢, 在网上看到很多都是要
excellent credit:(
我在creditkarma 上查到是740,这个算是excellent么
谢谢啦:)
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m*o
4
有详细说写什么,写哪里的贴子么?谢谢!
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c*t
5
看到大家说home depot和 Lowes常有10%的胖子,请问Sears也会有类似胖子么?怎么可
以拿到呢?谢谢!
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w*e
7
【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: skysea (skysea), 信区: Piebridge
标 题: 南加州MM征男友
发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 6 02:51:38 2010, 美东)
★性别: 女
★年龄: 29
★所在地(至少明确state): Southern Ca - orange county
★职业情况(学生还是工作): 工作
★简单的物理参数(身高/体重): 162cm/54kg
★外表: 较好
★当前婚姻状态(从没结过婚/曾婚/丧偶): 从没结过婚
★联系方式(email/IM/站内): 站内联系
我们都是做自由运动的分子,希望我们能遇见,给彼此一个机会,看看是否为对方停留。
自认为挺好的一姑娘,温和,善良,娴淑,顾家,
想找一个豁达,坚毅,风趣的男人,一起走。
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B*t
8
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s*r
9
很多人喜欢看鬼故事,相对于那些直接用文字表现恐怖的故事而言,内涵鬼故事显得更
可怕,因为这样的鬼故事往往在产生一定的思考后才能弄明白,所谓“后怕”即是如此
,下面分享了9个内涵鬼故事,故事最终的答案在最后一页哦。
1、一个人晚上回家,他的家住在6楼,他走进电梯,过了几秒,发现十二楼亮了,他想
一定是十二楼的人要坐电梯,过了一会儿他猛然按下了345楼,门打开就冲了出去,待
在大楼附近的便利店直到第二天。
2.这个故事是发生在我的一个同学的身上。我同学是一名寄宿生,在某个假期室友全都
回家了,她依然留在宿舍中。当晚,我同学在睡眠中感到尿急,可是由于厕所距离房间
有一段距离,四周又黑漆漆的,我同学感到害怕便叫醒睡在她身边的室友陪她一同去厕
所,当她进入厕所后,却在也不敢出去了。为什么?
3.有一天,我突然在书房找到了一本日记,是我爷爷写的,这让我怀念起了他,从小爷爷就
扶养我长大,直到去年某一天突然在家中心脏病发而死,想了想我翻开了日记,上面写着:
当你翻开这日记时
我早已逝去了
其实啊,你爸爸并不是不爱你
其实是因为家里太穷
这间房子也是你爸爸身上最后的钱,买来的
宝贝孙子,接下就告诉你爷爷的藏钱地方吧
千年杉下有种草
那种草叫做鬼针草
记得以前教你快速解迷的人是我吗?
快点用那笔百米跑步六秒的速度解吧。
4.今天我去图书馆借书来看。位于馆内角落的书架是小说类别的,我对小说很感兴趣因
此便去那选书。当我出抽第一本书时,书页却零散的掉了下来。当时我与书架对面的人
眼神交会了一会。我继续在书架前花了约10钟左右选出3本看起来挺有趣的书,拿到柜
台请管理员办理借书手续。在回家的路上我心理想着应该也把第一本书借回来的,但是
书变成那样也没办法了,今天就先借这些书回家吧。看出问题没有?
5.因为出勤的关系我与同事租住了一间酒店的房间,当时同事还有事要去办今晚不会回
来因为我很胆小所以早早就上床睡觉,但是在夜深人静的时候,我却听到「咯咯」的敲
门声「是酒店的职员吗?」我叫道却没人回应我,听着咯咯的敲门声感到非常害怕,那
个敲门声一直从深夜持续到黎明才停止,然后我立刻就跑去退房了,之后我和出勤回来
的同事说起敲门声的事「果然发生了呢」,听说他说这间酒店以前发生过火灾有个女人
因为被困在那个房间里,到现在还是找不到她的尸体或残骸,还好我可以打开那个房门
呢...
1、一个人晚上回家,他的家住在6楼,他走进电梯,过了几秒,发现十二楼亮了,他想
一定是十二楼的人要坐电梯,过了一会儿他猛然按下了345楼,门打开就冲了出去,待
在大楼附近的便利店直到第二天。 2.这个故事是发生在我的一个同学的身上。我同学
是一名寄宿生,在某个假期室友全都回家了,她依然留在宿舍中。当晚,我同学在睡眠
中感到尿急,可是由于厕所距离房间有一段距离,四周又黑漆漆的,我同学感到害怕便
叫醒睡在她身边的室友陪她一同去厕所,当她进入厕所后,却在也不敢出去了。为什么
? 3.有一天,我突然在书房找到了一本日记,是我爷爷写的,这让我怀念起了他,从小爷
爷就扶养我长大,直到去年某一天突然在家中心脏病发而死,想了想我翻开了日记,上面
写着:当你翻开这日记时 我早已逝去了 其实啊,你爸爸并不是不爱你 其实是因为家
里太穷 这间房子也是你爸爸身上最后的钱,买来的 宝贝孙子,接下就告诉你爷爷的藏
钱地方吧 千年杉下有种草 那种草叫做鬼针草 记得以前教你快速解迷的人是我吗?
快点用那笔百米跑步六秒的速度解吧。 4.今天我去图书馆借书来看。位于馆内角落
的书架是小说类别的,我对小说很感兴趣因此便去那选书。当我出抽第一本书时,书页
却零散的掉了下来。当时我与书架对面的人眼神交会了一会。我继续在书架前花了约10
钟左右选出3本看起来挺有趣的书,拿到柜台请管理员办理借书手续。在回家的路上我
心理想着应该也把第一本书借回来的,但是书变成那样也没办法了,今天就先借这些书
回家吧。看出问题没有? 5.因为出勤的关系我与同事租住了一间酒店的房间,当时同
事还有事要去办今晚不会回来因为我很胆小所以早早就上床睡觉,但是在夜深人静的时
候,我却听到「咯咯」的敲门声「是酒店的职员吗?」我叫道却没人回应我,听着咯咯
的敲门声感到非常害怕,那个敲门声一直从深夜持续到黎明才停止,然后我立刻就跑去
退房了,之后我和出勤回来的同事说起敲门声的事「果然发生了呢」,听说他说这间酒
店以前发生过火灾有个女人因为被困在那个房间里,到现在还是找不到她的尸体或残骸
,还好我可以打开那个房门呢... 6.在公司又被老板给骂了,就是那个在公司女同事
之间风评也差到爆的秃驴。“唉唉,该不会最近老觉得有人追踪我的犯人也是那贼秃吧
?”我一面这样想着,一面抵达家门口。虽然说是家,但其实也是个只有两个房间的旧
公寓,就只有起居室厨房和寝室,也只有起居室才有窗户,话说真的是很便宜啦。开锁
进了房间,吓了我一大跳,起居室的衣橱被翻乱了!突然想起来了,今早吃完早餐出门
时忘了锁门,就这样去上班了……啊啊……窗户都有锁上,也就是说一定是从玄关进来
的!感觉好倒霉!真让人不爽!好想去死!算了,今天已经这么累了,晚饭也不吃了,明天
早上起来再再报警吧!我再次确定玄关的门已经锁上,往寝室走去.. 7.他们是青梅竹
马,以为可以携手看夕阳。但35岁的她得了肺癌。拿着诊断书,他哭了笑,笑了哭。不
停抽烟,没有任何不良嗜好,何以得了肺癌?他来到他办公室,却看到她桌上一袋自己
素日最爱吃的干果,旁边,放着个药瓶子,说明触目惊心。他流下泪来,红色。三日后
,他哭着为她点燃生日蜡烛,她不在。他点燃了34根长蜡烛,一根短蜡烛,低笑道:你
真是瘦了. 8.在某个小镇发生的事情。有个男人在某个房间里被监禁了。男人睁开双
眼,听见了声音。「从那个纸箱中找出两面相同的硬币」眼前有一个很大的箱子,打开
来看,里面有很多的硬币。「如果可以找到两面相同的,用桌上的相机拍下那枚硬币。
在找到以前不放你走。照片用那边的传真机发送。」当然传真机除了被设定了的号码之
外都无法传送。男子在纸箱中奋力的找寻。终于找到了那两面相同的硬币。用要相机拍
下照片用传真机送出的时候,男人发觉了。这时他已经知道,一辈子都没办法从这房间
里出去。 9.某个地方发生了大地震当作临时避难所都挤满了人,想睡觉却觉却被吵闹
的声音和被闷热的空气弄的无法入睡想说出去吹个凉风,却发现了一栋没有开着灯的建
筑物里面很凉爽而且很安静,所以有很多人躺在那里就决定睡这里了!过了不久却发现
了不太对劲的地方,太安静了…当时我马上冲出了那栋建筑物. 答案: 1、外面有人
按里面是不会亮的。 2、室友全都回家了,陪她的是鬼 3、第三行第一个字、第四行
第二个字、第五行第三个字。。。依次读下来,就是:其实房子有鬼快跑! 4、对面是
墙,不会有人 5、他听到的是尸体在房间里敲门的声音 6、闯进屋子在人还在里面 7
、女的得肺癌是男的涂致癌药在她爱吃的坚果上,她把男的杀了炼油做蜡烛,不够35根
8、不能同时拍到两面的,他出不去了 9、医院停尸房
6.在公司又被老板给骂了,就是那个在公司女同事之间风评也差到爆的秃驴。“唉唉,
该不会最近老觉得有人追踪我的犯人也是那贼秃吧?”我一面这样想着,一面抵达家门
口。虽然说是家,但其实也是个只有两个房间的旧公寓,就只有起居室厨房和寝室,也
只有起居室才有窗户,话说真的是很便宜啦。开锁进了房间,吓了我一大跳,起居室的
衣橱被翻乱了!突然想起来了,今早吃完早餐出门时忘了锁门,就这样去上班了……啊
啊……窗户都有锁上,也就是说一定是从玄关进来的!感觉好倒霉!真让人不爽!好想去
死!算了,今天已经这么累了,晚饭也不吃了,明天早上起来再再报警吧!我再次确定玄
关的门已经锁上,往寝室走去..
7.他们是青梅竹马,以为可以携手看夕阳。但35岁的她得了肺癌。拿着诊断书,他哭了
笑,笑了哭。不停抽烟,没有任何不良嗜好,何以得了肺癌?他来到他办公室,却看到
她桌上一袋自己素日最爱吃的干果,旁边,放着个药瓶子,说明触目惊心。他流下泪来
,红色。三日后,他哭着为她点燃生日蜡烛,她不在。他点燃了34根长蜡烛,一根短蜡
烛,低笑道:你真是瘦了.
8.在某个小镇发生的事情。有个男人在某个房间里被监禁了。男人睁开双眼,听见了声
音。「从那个纸箱中找出两面相同的硬币」眼前有一个很大的箱子,打开来看,里面有
很多的硬币。「如果可以找到两面相同的,用桌上的相机拍下那枚硬币。在找到以前不
放你走。照片用那边的传真机发送。」当然传真机除了被设定了的号码之外都无法传送
。男子在纸箱中奋力的找寻。终于找到了那两面相同的硬币。用要相机拍下照片用传真
机送出的时候,男人发觉了。这时他已经知道,一辈子都没办法从这房间里出去。
9.某个地方发生了大地震当作临时避难所都挤满了人,想睡觉却觉却被吵闹的声音和被
闷热的空气弄的无法入睡想说出去吹个凉风,却发现了一栋没有开着灯的建筑物里面很
凉爽而且很安静,所以有很多人躺在那里就决定睡这里了!过了不久却发现了不太对劲
的地方,太安静了…当时我马上冲出了那栋建筑物.
答案:
1、外面有人按里面是不会亮的。
2、室友全都回家了,陪她的是鬼
3、第三行第一个字、第四行第二个字、第五行第三个字。。。依次读下来,就是:其
实房子有鬼快跑!
4、对面是墙,不会有人
5、他听到的是尸体在房间里敲门的声音
6、闯进屋子在人还在里面
7、女的得肺癌是男的涂致癌药在她爱吃的坚果上,她把男的杀了炼油做蜡烛,不够35根
8、不能同时拍到两面的,他出不去了
9、医院停尸房
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d*e
10
【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】
发信人: dilettante (半瓶醋), 信区: PDA
标 题: 连同新iphone 4转让SERO
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Feb 22 00:05:14 2012, 美东)
刚续的SERO合同,到2013年4月。新IPHONE4,8G的,50刀一个月。现在想转让出去,有
人感兴趣的给我PM。 $400 OBO
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S*g
11
我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,能切开,但是切开的目的带特别弱,质
粒很亮,我guarantee质粒浓度没问题,会不会是目的带弱质粒本身的碱基数太多了?
我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
PS:我在考虑可不可以加大上样量,或者在酶切体系中少加点水?
PPS:我以前博士做的是bioinfo,现在博后为了跟一个NAS的大佬,被强迫做bench
work,这一年来非常痛苦。进展很慢。只有一篇文章,刚写好,压在老板手里,还没改。
我是不是应该转回bioinfo?
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v*a
12
matlab?

【在 o****2 的大作中提到】
: paper里打算画一个grain boundary diffusion的图,晶粒形状不规则,
: 所以PPT不好搞,有没有好的软件推荐?我知道最牛的是Illustrator,有没有什么其次
: ,learning curve没有太强的?
: 类似这样的:

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R*s
13
沙发~
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d*i
14
740申卡肯定可以了,关键看有多长history吧。
再说网上说excellent的卡未必就难申,不同卡差别很大

【在 k******e 的大作中提到】
: 请问一下牛人们
: 有没有什么12个月一直0%purchase APY的卡比较好申呢, 在网上看到很多都是要
: excellent credit:(
: 我在creditkarma 上查到是740,这个算是excellent么
: 谢谢啦:)

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w*t
15
DS-160表格确认页:
请在上面注明您的中文姓名、您中文姓名的电报码、中文家庭地址、公司名字, 地址及
电子邮件地址。
请将您的表格确认页竖着打印在A4纸上。
面谈时请携带打印出来的DS-160表格确认页,不要使用传真的确认页。
--以上文字来自于美领馆官网。

【在 m***o 的大作中提到】
: 有详细说写什么,写哪里的贴子么?谢谢!
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H*7
16
从来没见过sear的胖子
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k*i
18
1、外面有人按里面是不会亮的。
这个答案不准确。准确的是,只有在电梯里按楼层,该楼层才会亮。这个人是一个人
住6楼,只可能按了6楼,12楼自己亮,说明电梯里有鬼,所以他按了345,第一时间冲
出去。
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k*l
19
目的带多长,质粒多长?
如果是100bp比10kb,那是小很多
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s*e
20
xfig
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Y*e
21
兔兔照得就是好看
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k*e
22
我刚才申请CONTINENTAL 50K的那个,没有给instant approve
所以现在心理很担心呢:(
听天由命啦///:(
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m*o
23
thank you!

【在 w******t 的大作中提到】
: DS-160表格确认页:
: 请在上面注明您的中文姓名、您中文姓名的电报码、中文家庭地址、公司名字, 地址及
: 电子邮件地址。
: 请将您的表格确认页竖着打印在A4纸上。
: 面谈时请携带打印出来的DS-160表格确认页,不要使用传真的确认页。
: --以上文字来自于美领馆官网。

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K*S
24
SEARS5OFF50
HEHE

【在 H******7 的大作中提到】
: 从来没见过sear的胖子
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z*4
25
第8题也可以破解,拿着硬币对着镜子拍照,这样一来两面都可以拍下来
avatar
p*p
26
多少酶、质粒,多长时间?
最简单的解释是你的酶可能坏了。拿个别的质粒切一下看看。

改。

【在 S*********g 的大作中提到】
: 我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,能切开,但是切开的目的带特别弱,质
: 粒很亮,我guarantee质粒浓度没问题,会不会是目的带弱质粒本身的碱基数太多了?
: 我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
: PS:我在考虑可不可以加大上样量,或者在酶切体系中少加点水?
: PPS:我以前博士做的是bioinfo,现在博后为了跟一个NAS的大佬,被强迫做bench
: work,这一年来非常痛苦。进展很慢。只有一篇文章,刚写好,压在老板手里,还没改。
: 我是不是应该转回bioinfo?

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o*1
27
小小建议 -
美摄高手们比如兔子EPA等能不能顺便把光圈快门什么的顺带一句啊?觉得会有好多版
友喜欢的。

【在 s*******k 的大作中提到】
: 好久没上正餐了
: 来个刚做的午餐吧
: 大家请忽略粗细不一的土豆丝= =
: 也请忽略有点焦的青椒
: 慢了一小会儿把菜从锅里移出来就焦了。。。55555555555555555555
: 味道还算欣慰。。。
: 嘿嘿
: 很简单滴~~~
: ==========================
: 土豆一个 青辣椒1个 花椒10粒左右 干红辣椒2个掰开 白醋 糖 盐

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v*r
28
这个只是北京还是别的都要这样?
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c*t
29
呵呵,明白了,看来没有胖子,谢谢各位热心的回复!:)
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m*n
30
房间里没给镜子,正确答案是在地上撒泡尿。

【在 z*******4 的大作中提到】
: 第8题也可以破解,拿着硬币对着镜子拍照,这样一来两面都可以拍下来
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t*o
31
我靠坑王转行挖学术坑了?

改。

【在 S*********g 的大作中提到】
: 我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,能切开,但是切开的目的带特别弱,质
: 粒很亮,我guarantee质粒浓度没问题,会不会是目的带弱质粒本身的碱基数太多了?
: 我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
: PS:我在考虑可不可以加大上样量,或者在酶切体系中少加点水?
: PPS:我以前博士做的是bioinfo,现在博后为了跟一个NAS的大佬,被强迫做bench
: work,这一年来非常痛苦。进展很慢。只有一篇文章,刚写好,压在老板手里,还没改。
: 我是不是应该转回bioinfo?

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F*t
32
赞 速度
这样的土豆丝还是很脆的吧,赞
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n*w
33
哈哈。坑王原来是学生物的。。。lol
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s*k
34
内个。。。内个。。。
不是我不说。。。
我是真不知道是啥 - -
我都是凭着感觉拍的。。。。
汗。。。

【在 o*******1 的大作中提到】
: 小小建议 -
: 美摄高手们比如兔子EPA等能不能顺便把光圈快门什么的顺带一句啊?觉得会有好多版
: 友喜欢的。

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s*y
35
啊? 你不是已经把老板杀了么?

改。

【在 S*********g 的大作中提到】
: 我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,能切开,但是切开的目的带特别弱,质
: 粒很亮,我guarantee质粒浓度没问题,会不会是目的带弱质粒本身的碱基数太多了?
: 我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
: PS:我在考虑可不可以加大上样量,或者在酶切体系中少加点水?
: PPS:我以前博士做的是bioinfo,现在博后为了跟一个NAS的大佬,被强迫做bench
: work,这一年来非常痛苦。进展很慢。只有一篇文章,刚写好,压在老板手里,还没改。
: 我是不是应该转回bioinfo?

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l*t
36
其实焦焦的更香!
avatar
c*y
37
杀了也要继续做实验

【在 s******y 的大作中提到】
: 啊? 你不是已经把老板杀了么?
:
: 改。

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l*2
38
兔兔最近开始尝试吃辣椒了
:)颜色非常漂亮
avatar
s*y
39
你的质粒的buffer 是否带有EDTA? 你用的酶是新买的么?
是的,你可以加水

改。

【在 S*********g 的大作中提到】
: 我最近酶切质粒(PMD-18T)总是切的相当不好,能切开,但是切开的目的带特别弱,质
: 粒很亮,我guarantee质粒浓度没问题,会不会是目的带弱质粒本身的碱基数太多了?
: 我用的酶是ASCI和NCOI,请高手指点,不胜感激!
: PS:我在考虑可不可以加大上样量,或者在酶切体系中少加点水?
: PPS:我以前博士做的是bioinfo,现在博后为了跟一个NAS的大佬,被强迫做bench
: work,这一年来非常痛苦。进展很慢。只有一篇文章,刚写好,压在老板手里,还没改。
: 我是不是应该转回bioinfo?

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l*z
40
老是拍得像艺术照!!
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S*g
41
我试一下


【在 p****p 的大作中提到】
: 多少酶、质粒,多长时间?
: 最简单的解释是你的酶可能坏了。拿个别的质粒切一下看看。
:
: 改。

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S*g
42


【在 k****l 的大作中提到】
: 目的带多长,质粒多长?
: 如果是100bp比10kb,那是小很多

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S*g
43
有EDTA
酶不是新买的,但前几天labmate也用过
没问题的
不过我还是check一下

【在 s******y 的大作中提到】
: 你的质粒的buffer 是否带有EDTA? 你用的酶是新买的么?
: 是的,你可以加水
:
: 改。

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s*y
44
有EDTA的话就可以构成问题。
因为有些酶依赖离子,而EDTA 会chelate 那些离子。 你可以加进更多的水,
用少量的DNA, 看看怎么样。或者把DNA 重新纯化一次,然后用水溶解

【在 S*********g 的大作中提到】
: 有EDTA
: 酶不是新买的,但前几天labmate也用过
: 没问题的
: 不过我还是check一下

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j*x
45
我看你是想的太多啦,呵呵
我敢肯定,坑王如果这不是在挖坑的话,那么必然是没有考虑到片段之间长度比和亮度
之间的关系。切出来一个300bp的片段,看着比剩下来3kb的的质粒backbone亮度弱很多
倍,所以很奇怪,你说呢?

【在 s******y 的大作中提到】
: 有EDTA的话就可以构成问题。
: 因为有些酶依赖离子,而EDTA 会chelate 那些离子。 你可以加进更多的水,
: 用少量的DNA, 看看怎么样。或者把DNA 重新纯化一次,然后用水溶解

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p*p
46
Commercial buffers (eg, NEB) can tolerate the 1mM EDTA from TE buffer
because of much higher Mg2+ in the buffers.

【在 s******y 的大作中提到】
: 有EDTA的话就可以构成问题。
: 因为有些酶依赖离子,而EDTA 会chelate 那些离子。 你可以加进更多的水,
: 用少量的DNA, 看看怎么样。或者把DNA 重新纯化一次,然后用水溶解

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h*g
47
最简单上张胶图,一眼明了~~
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s*y
48
嗯,鉴于坑王不是专业生物男,是有可能出现这种错误的。
建议坑王把没有酶切的片段跑在同一个胶上看看尺寸对比。
另外一个建议就是坑王最好赶快转回生物信息,如果连这种小事都搞不定的话

【在 j****x 的大作中提到】
: 我看你是想的太多啦,呵呵
: 我敢肯定,坑王如果这不是在挖坑的话,那么必然是没有考虑到片段之间长度比和亮度
: 之间的关系。切出来一个300bp的片段,看着比剩下来3kb的的质粒backbone亮度弱很多
: 倍,所以很奇怪,你说呢?

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